cx-1結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞

公(gong)司產品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使用、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下觀察，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後加入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下觀察，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後加入培養(yang)液終(zhong)

止消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜(ye)，24h 後轉入液氮(dan)中(zhong)進行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫盒可直接放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養(yang)凍存(cun)處理(li)僅(jin)供參考，具體操作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖晃解凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有細(xi)胞懸液(ye)加入含(han)適(shi)量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)加入10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天換液並檢(jian)查細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將(jiang)培養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而定），然後在(zai)顯微(wei)鏡下觀察細(xi)胞消(xiao)化情況，若(ruo)細(xi)胞大部(bu)分(fen)變圓並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝(zhuang)入無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中或(huo)者瓶中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時，可進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞培養(yang)液，裝(zhuang)入無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根據(ju)細(xi)胞數量加入無血清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便下次拿取。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的(de)產品(pin)：

IGFBP4 Protein Cynomolgus 重(zhong)組(zu)食(shi)蟹猴(hou) IGFBP4 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 大鼠載(zai)脂蛋(dan)白B100(Apo B100)ELISA試(shi)劑盒 IL-10 (Rabbit Interleukin 10)  兔白介(jie)素(su)10 96T

Phospho-LRP6(Thr1479)： 0酸(suan)化低密(mi)度(du)脂蛋(dan)白受(shou)體相關蛋(dan)白6抗(kang)體 CSK Others Mouse 小(xiao)鼠 CSK / C-Src kinase 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

大鼠膀胱上(shang)皮細(xi)胞培養(yang)基(ji) 100mL 大鼠載(zai)脂蛋(dan)白B(APOB)ELISA試(shi)劑盒 TPO(Rat Thrombopoietin,TPO ) 大鼠血小(xiao)板生成(cheng)素(su) 96T

phospho-LCK(Tyr394)： 0酸(suan)化淋巴(ba)細(xi)胞特(te)異性(xing)蛋(dan)白酪(lao)酸(suan)激酶抗(kang)體 WM451, 人黑(hei)色(se)素(su)瘤細(xi)胞 導(dao)管瘤細(xi)胞,BT474細(xi)胞 VERO(非洲(zhou)綠(lv)猴腎(shen)細(xi)胞)

ERP27 Others Human 人 ERP27 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照) 大鼠載(zai)脂蛋(dan)白B(apo-B)ELISA 試(shi)劑盒 Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP  小(xiao)鼠垂體腺(xian)苷酸(suan)環(huan)化酶激(ji)活(huo)肽 96T

H4-IIE(大鼠肝(gan)癌(ai)細(xi)胞 ) 5×106cells/瓶×2 CL-0337FO(小(xiao)鼠骨(gu)髓(sui)瘤細(xi)胞)5×106cells/瓶×2 新生牛(niu)眼晶體(ti)上(shang)皮細(xi)胞;NBLE 人抗(kang)利尿(niao)激(ji)素(su)/血管加壓(ya)素(su)/精(jing)酸(suan)加壓(ya)素(su)(ADH/VP/AVP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) M2-PK ( pyruvate Kinase M2) 酸(suan)激酶-M2(抗(kang)原) 0.5mg

Phospho-HDAC5 (Ser259)： 0酸(suan)化組(zu)蛋(dan)白去(qu)乙酰(xian)化酶5抗(kang)體 人前(qian)脂(zhi)肪細(xi)胞-內臟(zang)RNAHPA-v miRNA5 μg

RS1(大鼠皮膚成纖維(wei)樣細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 人抗(kang)類(lei)固醇(chun)細(xi)胞抗(kang)體(SCA)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) M2-PK ( pyruvate Kinase M2 ) 酸(suan)激酶-M2(抗(kang)原) 0.5mg

phospho-HDAC1 (Ser423+Ser421)： 0酸(suan)化組(zu)蛋(dan)白去(qu)乙酰(xian)化酶1抗(kang)體 CSF1 Others Mouse 小(xiao)鼠 M-CSF / CSF-1 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

SHG-44人膠(jiao)質瘤細(xi)胞 Human glioma cell line SHG-44 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 人抗(kang)類(lei)風濕(shi)關節(jie)炎核(he)抗(kang)原抗(kang)體(RANA)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) p-Arhgef2/GEF-H1(Rho guanine nucleotide exchange factor 2,pSer810) 0酸(suan)化Rho鳥苷(gan)酸(suan)交換因子(zi)2抗(kang)原 0.5mg

cx-1結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞人胚胎氣(qi)管組(zu)織(zhi)來源(yuan)細(xi)胞;CCC-HBE-2 大鼠基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)3(MMP3)ELISA試劑盒 Cortisol(Mouse Cortisol) 小(xiao)鼠醇(chun) 96T

PCDH18： 原鈣粘(zhan)附蛋(dan)白18抗(kang)體 犬(quan)腎(shen)細(xi)胞系(xi)/IgR;MDCK/IgR

大鼠神(shen)經皮質(zhi)細(xi)胞(RNc)(1×106) SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰(yi)腺癌(ai)細(xi)胞 Human 大鼠基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)3(MMP-3)ELISA 試劑盒 ASMA(Human Anti-smooth muscle antibody)  人抗(kang)平滑(hua)肌(ji)抗(kang)體 人腦(nao)血管周(zhou)細(xi)胞cDNAHBVP cDNA

TNFSF9 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 大鼠基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)23B(MMP23B)ELISA試劑盒 TSH(Mouse Thyroid Stimulating Hormone) 小(xiao)鼠促甲狀(zhuang)腺素(su) 96T

PCDH8： 原鈣粘(zhan)附蛋(dan)白8抗(kang)體 AGO2 Others Human 人 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首先(xian)觀察細(xi)胞瓶是(shi)否完好(hao)，培養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾濁等(deng)現象，若(ruo)有上(shang)述現象 發生請(qing)及時和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息，如細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培養(yang)條件(jian)不壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態。因運輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫度(du) 變化及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現象。觀察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可以消(xiao)化，懸浮細(xi)胞直接混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中(zhong)進行(xing)培養(yang)。

5. 請客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍幾(ji)張細(xi)胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我司技(ji)術部(bu)溝通 交(jiao)流。由於(yu)運輸的(de)原因，個別敏(min)感細(xi)胞會(hui)出(chu)現不穩(wen)定(ding)的(de)情況，請(qing)及時和(he)我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體(ti)情況，以(yi)便(bian)我們的(de)技術人員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科研使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條件(jian)新配(pei)制的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次傳代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。