CCRFS-180II(S180)細胞

公(gong)司(si)產品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶傳代，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

壹、商品介紹：

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並放置於凍(dong)存管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中進(jin)行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒可(ke)直接放入-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品說明書為(wei)主。將含(han)有(you)1 mL細胞懸液的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸液加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶中培養(yang)過夜（或將細胞懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如(ru)果(guo)細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用不含(han)鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞，將培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況而(er)定），然後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細胞大部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫落，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻(yun)。

c、將細胞懸液按1:2比(bi)例分到新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待細胞生長狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行細胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集細胞及細胞培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸液，註意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存管(guan)放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的產(chan)品：

組織單胺(an)氧(yang)化酶(mei)B型（MAO－B）活(huo)性(xing)熒光定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

蛋(dan)白結(jie)合(he)反(fan)應(ying)試劑盒(he)

組織WNV（WEST NILE）病毒定性(xing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

MYC蛋(dan)白表(biao)達(da)ELISA定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

通用(yong)型比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

活(huo)體(ti)細胞半(ban)-1（CASPASE-1）活(huo)性(xing)原(yuan)位熒光染色檢測試劑盒(he)

組織LCK激酶(mei)活(huo)性(xing)定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)（A/B/C）

通用(yong)型植物樣(yang)品細胞周期G1/S和G2/M期同步(bu)（SYNCHRONY）處(chu)理試劑盒(he)

細胞/組織明膠載(zai)玻片(pian)制備(bei)試劑盒(he)

細胞乙酰(xian)酯酶(mei)活(huo)性(xing)化(hua)學(xue)發(fa)光法(fa)定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

魚(yu)類受精卵(luan)細胞凍(dong)存試劑盒(he)（低溫(wen)）

體外(wai)非(fei)細胞系統細胞色素(su)P450亞酶(mei)2C8（PACLILAXEL）活(huo)性(xing)

載(zai)玻片(pian)細胞鈣鈉交(jiao)換(huan)體(ti)（NCX）蛋(dan)白表(biao)達(da)熒光顯微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

體液(ye)基(ji)質(zhi)金屬抑(yi)制劑1（TIMP-1）活(huo)性(xing)熒光定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

胚(pei)胎幹(gan)細胞分化定性(xing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

載(zai)脂蛋(dan)白H抗體(ti)

鈣依(yi)賴(lai)膜結(jie)合(he)蛋(dan)白Copine蛋(dan)白1抗體(ti)

驅動蛋(dan)白KIF5A抗體(ti)

I型膠原蛋(dan)白

細胞分裂(lie)周(zhou)期(qi)調控蛋(dan)白45抗體(ti)

X染色體開放閱(yue)讀(du)框(kuang)56抗體(ti)

跨膜蛋(dan)白2樣(yang)蛋(dan)白抗(kang)體

CCRFS-180II(S180)細胞APC標記(ji)人CD73單克(ke)隆(long)抗體

鋅指(zhi)蛋(dan)白76抗(kang)體

三、培養(yang)註意事項(xiang) 

1. 收到細胞後首(shou)先(xian)觀(guan)察細胞瓶是否完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是否有(you)漏液、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述現象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞說明書(shu)，了解(jie)細胞相關信(xin)息，如(ru)細胞形態、所用培養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所(suo)需 細胞因子等，確保(bao)細胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若(ruo)由於培養(yang)條(tiao)件(jian)不壹致而(er)導致細胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞狀態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞由於溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細胞狀態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮細胞直接混(hun)勻(yun)收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細胞，並接種(zhong)到新(xin)的培養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培養(yang)基(ji)用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建議客戶收到細胞後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞照片(pian)，記錄(lu)細胞狀態，便(bian)於和我司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由於運輸的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏(min)感(gan)細胞會(hui)出現(xian)不穩定的情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和我們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞 的具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤回訪(fang)直至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸用的培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來培養(yang)細胞，請換用(yong)按照說明(ming)書(shu)細胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞。     收到細胞後第(di)壹次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。