BT-549人乳腺(xian)導(dao)管癌細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入培(pei)養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒(he)可直接放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明書為主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管在 37℃水浴中(zhong)迅速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基混合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後吹勻(yun)。然後將所有細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入含適量(liang)培養(yang)基的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

    a、棄去培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細胞(bao)1-2次(ci)。        

    b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而定(ding)），然後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大(da)部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液後吹勻(yun)。        

     c、將細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好時(shi)，可進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例；a、收集(ji)細胞(bao)及細胞培養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去上清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數。

     b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量(liang)加(jia)入無血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做好標識。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌儲存。記(ji)錄凍(dong)存管位置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。  

公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

LETMD1： 原(yuan)癌基因(yin)2抗(kang)體 大(da)鼠(shu)嗜(shi)堿(jian)性粒細胞性白血(xue)病(bing)細胞;RBL-1

CHO/dhFr-倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢細(xi)胞(bao),二氫還原(yuan)酶(mei)缺(que)陷 CHO/dhFr- Chinese hamster ovary cells, dihydrofolate reductase deficiency IMDM培養(yang)基(GIBCO)+10%FBS 大(da)鼠(shu)脂蛋(dan)白(bai)α(Lp-α)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Bovine IgM/RBITC 羅丹明標記IgM 0.3ml

LOXL4： 賴酰(xian)氧化(hua)酶樣(yang)蛋(dan)白(bai)4抗(kang)體 SERPINI1 Others Human 人(ren) SERPINI1 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽性對照(zhao))

原(yuan)代(dai)心肌(ji)細(xi)胞培養(yang)特(te)制添(tian)加(jia)劑(ji)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5/2.5/1ml 大(da)鼠(shu)支(zhi)鏈(lian)α-酮酸(suan)脫(tuo)氫酶(BCKDK)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Chicken IgG/RBITC 羅丹明標記雞(ji)IgG 0.3ml

Lactoferrin： 乳鐵蛋(dan)白(bai)抗(kang)體 野(ye)生型(xing)人c-kit受體細(xi)胞(bao)株(zhu);A7d

TNFRSF18 Others Rat 大(da)鼠(shu) GI / TNFRSF18 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽性對照(zhao)) 人(ren)抗(kang)突變型瓜酸(suan)波(bo)形(xing)蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(MCV)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) GR (Glucocorticoid receptor) 糖皮(pi)質激(ji)素(su)受體 多肽(tai) 0.5mg

HHV8/ORF K2： 人類皰疹(zhen)病(bing)毒8抗(kang)體 HL-02 [L-02,HL-7702], 正(zheng)常(chang)人肝上皮細(xi)胞

Ealy926細胞，人腸(chang)系膜下(xia)腔(qiang)動(dong)脈血(xue)管內皮細(xi)胞(bao) 白色假絲(si)酵母/白(bai)色念球(qiu)菌(jun) 人(ren)肺(fei)動(dong)脈內(nei)皮(pi)細胞(bao)總RNAHPAEC NA 人抗(kang)透(tou)明帶抗(kang)體(aZP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Annexin II 膜粘(zhan)連(lian)蛋(dan)白(bai)-2抗(kang)原(yuan) 0.5mg

HHV8 ORF50： 人類皰疹(zhen)病(bing)毒8抗(kang)體 HA Others H3N2 甲(jia)型(xing)流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血(xue)凝素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人細胞(bao)裂解液 (陽性對照(zhao))

艾氏腹水(shui)瘤瘤株(zhu);Ehrlich 人抗(kang)天然脫(tuo)氧(yang)核(he)糖核(he)酸(suan)抗(kang)體(n-DNA-Ab)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 ) G蛋(dan)白(bai)偶(ou)聯(lian)受體-2(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

BT-549人乳腺(xian)導(dao)管癌細(xi)胞(bao)PDCD2L： 程序性細胞死亡2樣(yang)抗(kang)體 犬(quan)腎細胞(bao);MDCK/IgR

人臍帶動(dong)脈內(nei)皮(pi)細胞(bao) (HUAEC)( 5×105 ) A549, 人肺癌細(xi)胞(bao)系 Human 大(da)鼠(shu)棘(ji)皮(pi)動(dong)物微(wei)管關(guan)聯(lian)蛋(dan)白(bai)樣(yang)蛋(dan)白(bai)2(EML2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) EBMZ(Human epidermal basement membrane zone)  人抗(kang)表皮細胞(bao)基底膜抗(kang)體 人(ren)肝臟星形(xing)細胞(bao)cDNAHHSteC cDNA

TNF Protein Cynomolgus 重組(zu)食蟹(xie)猴(hou) / 恒(heng)河猴(hou) TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A / Cachectin 蛋(dan)白(bai) 大(da)鼠(shu)極低(di)密(mi)度(du)脂蛋(dan)白(bai)受體(VLDLR)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) MMP-4  大(da)鼠(shu)基質金屬蛋(dan)白(bai)酶(mei)4 96T

Proteasome 20S alpha 3： 蛋(dan)白(bai)酶(mei)體PSMα3抗(kang)體 SMYD2 Others Human 人(ren) SMYD2 / KMT3C 桿狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂解液 (陽性對照(zhao))

HCCLM3 人高轉(zhuan)移(yi)肝癌細(xi)胞(bao) 大(da)鼠(shu)極低(di)密(mi)度(du)脂蛋(dan)白(bai)(VLDL)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) C4a(Mouse Complement fragment 4a) 小鼠過(guo)敏(min)毒素(su)/補(bu)體片(pian)斷(duan)4a 96T

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若有上述現(xian)象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細(xi)胞(bao)說明書，了(le)解細胞相關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例、所需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等，確保(bao)細(xi)胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任由 客(ke)戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細胞瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混勻(yun)收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的培養(yang)基用(yong)於細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後前 3 天各拍幾張細胞照(zhao)片(pian)，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細胞會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情況，請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具體情況，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該細胞僅供科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不能再用(yong)來培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書細胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培養(yang)基來培養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細胞後第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。