A549 人(ren)肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研究使(shi)用(yong)、不得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加入培養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹打(da)細胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉入液氮(dan)中進行(xing)長(chang)期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降溫盒可(ke)直接放入-80℃。

二、細(xi)胞培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇細胞：以下(xia)細(xi)胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參考(kao)，具(ju)體(ti)操作步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含有1 mL細胞懸液的凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸液加入含適量(liang)培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜）。第二天換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

    a、棄去(qu)培養(yang)上清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。        

    b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤所(suo)有細(xi)胞，將培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消化(hua)情(qing)況，若細胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清液，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。        

     c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按1:2比例(li)分(fen)到新的含8 mL培養(yang)基(ji)的新皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良好時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞(bao)培養(yang)液，裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

     b、根(gen)據(ju)細胞數(shu)量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便下(xia)次(ci)拿取。  

公(gong)司(si)正在出售的產(chan)品(pin)：

Phospho-LRP6 (Ser1490)： 0酸(suan)化(hua)低密(mi)度脂(zhi)蛋白(bai)受(shou)體(ti)相(xiang)關(guan)蛋白(bai)6抗體(ti) 中國(guo)倉鼠(shu)卵巢細(xi)胞(bao)(亞系(xi)克隆(long));CHO-HCV-NS5A

293T/17人(ren)胚(pei)腎細胞(bao) Human embryonic kidney cell line 293T/17 DMEM+10%FBS 大(da)鼠(shu)腫(zhong)瘤(liu)壞死(si)因子(zi)可(ke)溶(rong)性受體(ti)Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Goat IgG/APC 熒光(guang)素(su)APC標(biao)記(ji)羊(yang)IgG(細胞流式(shi)同(tong)型對照(zhao)) 0.1ml

Phospho-LATS1 (Thr1079)： 0酸(suan)化(hua)抑(yi)制(zhi)基(ji)因LATS1抗體(ti) CADM3 Others Human 人 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

人(ren)淋巴內皮(pi)細(xi)胞(bao)HLEC 大鼠(shu)腫(zhong)瘤(liu)壞死(si)因子(zi)可(ke)溶(rong)性受體(ti)Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 HSA(Human sermu albumin)/RBITC 羅(luo)丹(dan)明(ming)標記 0.3ml

LRRK2： 富(fu)亮酸(suan)重(zhong)復(fu)激(ji)酶2抗體(ti) 小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎成纖維細胞(bao)(來(lai)自NIH3T3);PA12

Phospho-HDAC4 (Ser246) + HDAC5 (Ser259) + HDAC7 (Ser155)： 0酸(suan)化(hua)組蛋白(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)酶4/5/7抗體(ti) 原代(dai)表(biao)皮角化細胞特制(zhi)基(ji)礎無血(xue)清培養(yang)基(ji)Many types of cells包裝：500/100ml

CCRF-CEM細(xi)胞，人急性淋巴細胞(bao)白(bai)血(xue)病T淋(lin)巴細胞 小(xiao)鼠(shu)白血(xue)病細(xi)胞,C3細胞 人肝(gan)竇內(nei)皮(pi)細胞(bao)cDNAHHSEC cDNA 人可(ke)溶(rong)性雕(diao)亡相(xiang)關(guan)因(yin)子(zi)配體(ti)(sFASL)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 C-Peptide( C-PEP ) C-肽(C肽(tai)) 0.5mg

HP1 gamma： 異染(ran)色(se)質(zhi)蛋白(bai)1-γ抗體(ti) HA Others H6N1 甲型流感 H6N1 血(xue)凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

大(da)鼠(shu)肝(gan)細(xi)胞(bao);BRL 人(ren)可(ke)溶(rong)性雕(diao)亡相(xiang)關(guan)因(yin)子(zi)(sFAS/Apo-1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CR (Calretinin) 鈣結合蛋白(bai)(抗原) 0.5mg

Histone H1t： 組(zu)蛋白(bai)H1抗體(ti) 人胚(pei)肺(fei)成(cheng)纖維細胞(bao);IMR-90

A549 人(ren)肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao)人(ren)肺(fei)腺癌(ai)細胞;Calu-3 大鼠(shu)接觸蛋白(bai)3(CN3)ELISA試(shi)劑(ji)盒 AIRA(Human anti-insulin receptor antibody)  人抗胰島(dao)素(su)受(shou)體(ti)抗體(ti) 家貓肺(fei)細(xi)胞(bao);FCA-L2

人(ren)脂(zhi)肪(fang)細胞(bao)-皮下(xia)(HPA-s)(1×106 ) Raji，人(ren)Butt's淋巴(ba)瘤(liu)細(xi)胞(bao) Human 大鼠(shu)窖蛋白(bai)Caveolin1(Cav-1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 AGPA/PCA(Human anti-gastric parietal cell antibody)  人抗胃壁細胞(bao)抗體(ti) 人尿(niao)道(dao)上皮細胞(bao)總RNAHUC NA

TNFSF15 Protein Rat 重(zhong)組大鼠(shu) TNFSF15 / TL1A 蛋白(bai) (Fc 標(biao)簽) 大鼠(shu)窖蛋白(bai)Caveolin1(Cav-1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 eNOS-3(Mouse Endothelial nitric oxide synthase 3) 小(xiao)鼠(shu)內皮(pi)型合成(cheng)酶3 96T

CD162： P選(xuan)擇(ze)素(su)糖(tang)蛋白(bai)配體(ti)1抗體(ti) AGO1 Others Human 人 AGO1 / Argonaute 1 / EIF2C1 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

FaDu 人(ren)咽鱗癌細(xi)胞(bao) 大(da)鼠(shu)窖蛋白(bai)(CAV1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 P III NP  大鼠(shu)Ⅲ型前膠(jiao)原肽 96T

三(san)、培養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是否完好，培養(yang)液是否有(you)漏(lou)液、渾濁等現象，若(ruo)有(you)上述現象 發(fa)生請(qing)及(ji)時和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細胞形態、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細胞培養(yang)條件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於(yu)培養(yang)條件不(bu)壹致(zhi)而(er)導致細胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸問題(ti)，部分細胞由(you)於(yu)溫度 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈碰亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎片(pian)，是正常現(xian)象。觀察好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可(ke)以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮的培養(yang)基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿中，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的培養(yang)基(ji)用於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞後(hou)前 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定(ding)的情(qing)況，請及(ji)時和我們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以便我們(men)的技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培養(yang)細胞，請(qing)換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培 養(yang)條件新(xin)配制(zhi)的培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細胞。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第壹(yi)次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。