A549+luc 人(ren)肺(fei)癌(ai)細胞熒(ying)光(guang)素(su)酶(mei)標(biao)記(ji)

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供科研研究使用、不得用於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止(zhi)消化，再輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru)培(pei)養液(ye)終

止(zhi)消化，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置於凍存(cun)管(guan)中；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心3 min，棄去上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養基(ji)的培養(yang)瓶中培養(yang)過夜（或將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

    a、棄去培養(yang)上清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。        

    b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於37℃培養箱(xiang)中消化1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止(zhi)消化。輕輕(qing)打勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄去上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻。        

     c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新皿中或者(zhe)瓶中，置於培養箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞生長(chang)狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收集(ji)細胞及(ji)細胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離心管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心4 min，棄去上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

     b、根(gen)據細胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每支凍存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意凍存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。  

公(gong)司正在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

phospho-LEF1(Ser42)： 0酸(suan)化淋巴增(zeng)強因子(zi)-1抗(kang)體 CCL24 Others Human 人(ren) CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

大(da)鼠直腸平滑(hua)肌(ji)細胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大鼠(shu)腫(zhong)瘤(liu)蛋白p53(TP53)ELISA試劑盒 Monkey IgM (親(qin)和(he)化) 猴IgM 1mg

LAP1： 層(ceng)粘連相關多(duo)肽(tai)蛋白1抗體 PC-12(高分化)，PC12，大鼠(shu)腎上腺(xian)髓質嗜鉻瘤分(fen)化細胞株(zhu)(高分化) 骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細胞(瘤(liu)株(zhu)),OS-732細胞 PANC-1(胰(yi)腺癌(ai)細胞)

RK2 Others Rat 大(da)鼠 kB / RK2 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 大鼠(shu)腫瘤蛋白53(TP53)ELISA試劑盒 Mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biao)記(ji)小鼠IgG(細胞流(liu)式(shi)同(tong)型對照(zhao)) 0.1ml

Lubricin： 淺(qian)表層(ceng)粘膜蛋白多糖抗體(ti) 倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢細胞;Lec1

HDAC10： 組(zu)蛋白去乙酰化酶(mei)10抗體(ti) CECR1 Others Human 人(ren) CECR1 / ADA2 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

腸粘膜上皮(pi)細胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml) 人(ren)可溶(rong)性P選(xuan)擇素(su)(sP-selectin)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CT-R (Calcitonin receptor) 降(jiang)鈣素受(shou)體(ti)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

HOXB4： HOXB4抗(kang)體 豹貓肺(fei)成纖維樣細胞;LCL3 中國倉(cang)鼠(shu)肺(fei)細胞，CHL/IU[CHL-11]細胞 C3H 10T1/2 2A6細胞，小鼠成纖維細胞

CD36 Others Rat 大(da)鼠 CD36 / SCARB3 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 人(ren)可溶(rong)性E選(xuan)擇素(su)(sE-selectin)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Ferritin peptide 鐵(tie)蛋(dan)白抗原 0.5mg

Phospho-HER2(Tyr1248)： 0酸(suan)化HER2受(shou)體(ti)抗(kang)體(ti) HT-29, 人(ren)結(jie)腸癌(ai)細胞

A549+luc 人(ren)肺(fei)癌(ai)細胞熒(ying)光(guang)素(su)酶(mei)標(biao)記(ji)細胞 大(da)鼠(shu)膠質細胞系(xi)來源(yuan)的神(shen)經營(ying)養(yang)因子(zi)(GDNF)ELISA 試(shi)劑盒(he) AMA IgA(Human anti-myelin antibody IgA)  人(ren)抗(kang)髓0脂(zhi)抗(kang)體(ti) 豹貓肺(fei)成纖維樣細胞;LCL1

人(ren)卵(luan)巢上皮細胞(HOSEpiC) ( 5×105 ) Caco-2，人(ren)結(jie)直腸腺癌(ai)細胞 Human 大(da)鼠(shu)膠原酶(mei)II(Collagenase II)ELISA試劑(ji)盒 Hsp-60(Mouse heat shock protein 60) 小鼠熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白60 96T

PCDH10： 原(yuan)鈣粘附蛋(dan)白10抗體 人(ren)肺(fei)泡上皮細胞總(zong)RNAHPAEpiC NA

TNFSF9 Protein Rat 重組(zu)大鼠(shu) 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 標(biao)簽(qian)) 大(da)鼠(shu)膠原酶(mei)II(Collagenase II)ELISA 試劑(ji)盒 Col I  大鼠Ⅰ型膠原 96T

PCDHB1： 原(yuan)鈣粘附蛋(dan)白β1抗體 DMT1 Others Human 人(ren) DNMT2 / DMT1 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

三、培養註意事項(xiang) 

1. 收到細胞後(hou)首先觀(guan)察細胞瓶是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是否有(you)漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現象，若(ruo)有(you)上(shang)述現象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞相關信(xin)息，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細胞因子(zi)等，確(que)保(bao)細胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培養條件(jian)不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞出(chu)現問題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞瓶表面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞狀態。因運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分細胞由(you)於(yu)溫度 變化及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正常現象。觀(guan)察好(hao)細胞狀態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消(xiao)化，懸浮(fu)細胞直接混(hun)勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的培養(yang)瓶或培(pei)養皿中，置於培養箱(xiang)中進行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的培養(yang)基(ji)用於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到細胞後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞狀態，便(bian)於和(he)我(wo)司技術部(bu)溝通(tong) 交流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的原因，個(ge)別敏(min)感細胞會(hui)出(chu)現不穩定(ding)的情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，告知細胞 的具體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我們(men)的技術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細胞僅(jin)供(gong)科研使用。

8. 備註：運輸(shu)用的培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能再用來培養(yang)細胞，請(qing)換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的培養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞。     收到細胞後(hou)第壹次(ci)傳代(dai)建議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。