A549+RFP 人肺(fei)癌(ai)細胞+RFP

公(gong)司產(chan)品(pin)僅供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回縮變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱細(xi)胞用 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱中培養；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回縮變圓後(hou)加入(ru)培養液終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管(guan)中；

4）先將細胞凍存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養凍存(cun)處理(li)僅供(gong)參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含有1 mL細(xi)胞懸液的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培養基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所有細(xi)胞懸液加入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培養基的培養瓶中培養過夜(ye)（或將細胞懸液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細胞密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

    a、棄去(qu)培養上清，用不含鈣、鎂離(li)子的PBS潤洗細胞1-2次(ci)。        

    b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中，使消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有細(xi)胞，將培養瓶置於(yu)37℃培養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而(er)定），然(ran)後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞大部分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養瓶後加2-3ml培養基終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培養液後吹勻(yun)。        

     c、將細胞懸液按(an)1:2比例(li)分到新(xin)的含8 mL培養基的新(xin)皿(min)中或者瓶(ping)中，置於(yu)培養箱中培養。 3) 細胞凍存(cun)：待細(xi)胞生長狀(zhuang)態良好時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞凍存(cun)。下面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及細胞培養液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計數。

     b、根(gen)據(ju)細胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清細胞凍存(cun)液，使細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。  

公司正在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：

LRRC10： 富(fu)含亮(liang)酸重(zhong)復(fu)蛋(dan)白10抗體(ti) Hep G2, 人肝(gan)癌(ai)細胞系 胰腺(xian)導管(guan)上皮癌(ai)細胞,PAN-1細胞 A3(淋巴細(xi)胞白血病(bing)細(xi)胞)

CDH15 Others Rat 大鼠(shu) Cadherin-15 / CDH15 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 大鼠(shu)腫(zhong)瘤壞(huai)死因(yin)子β(TNF-β)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 human sIgA (親(qin)和(he)化(hua)) 人分泌(mi)型IgA 1mg

LRCH2： 富(fu)含亮(liang)酸重(zhong)復(fu)家庭蛋(dan)白2抗體(ti) 中國倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢細(xi)胞(亞系克(ke)隆(long));CHO-HCV-E1

6T-CEM人T細(xi)胞白血病(bing)細(xi)胞 The 6T-CEM of human T cell leukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)腫(zhong)瘤壞(huai)死因(yin)子α(TNF-α)ELISA試(shi)劑(ji)盒 human IgG/Biotin 化(hua)人IgG 1ml

LRDD： 富(fu)含亮(liang)酸重(zhong)復(fu)死亡(wang)結(jie)構域(yu)蛋(dan)白抗體(ti) IL1RAP Others Human 人 IL1R3 / IL1RAP 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

Hsp93： 熱(re)休克(ke)蛋(dan)白93抗體(ti) 豹(bao)貓(mao)肺成(cheng)纖(xian)維(wei)樣細胞;LCL2 中國倉(cang)鼠(shu)肺(fei)細胞，V79-4細胞 3T6-Swiss albino細胞，小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎成(cheng)纖維(wei)細胞

CD36 Others Rat 大鼠(shu) CD36 / SCARB3 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 人可(ke)溶性(xing)白細胞分化(hua)抗原(yuan)40配(pei)體(ti)(sCD40L)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huan)腺(xian)苷酸應答(da)元件(jian)結(jie)合(he)蛋(dan)白(抗原(yuan)) 0.5mg

Phospho-HDAC3 (Ser424)： 0酸化(hua)組蛋(dan)白去(qu)乙酰(xian)化(hua)酶(mei)3抗(kang)體(ti) Hep-2, 人喉(hou)癌(ai)細胞系

OKT3細(xi)胞，總T淋巴(ba)細胞 小(xiao)鼠(shu)β胰島(dao)素瘤(liu)細(xi)胞,RIN-m5F細胞 人心(xin)肌(ji)細胞-cDNAHCM-a cDNA 人可(ke)溶性(xing)白細胞分化(hua)抗原(yuan)38(sCD38)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 phospho-CREB-1 0酸化(hua)環(huan)腺(xian)苷酸應答(da)元件(jian)結(jie)合(he)蛋(dan)白(多(duo)肽) 0.1mg

Histone H2B： 組(zu)蛋(dan)白H2B抗體(ti) HA Others H8N4 甲(jia)型流(liu)感 H8N4 (A/piail duck/Alberta/114/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

A549+RFP 人肺(fei)癌(ai)細胞+RFPPlastin L： 淋(lin)巴細胞胞漿蛋(dan)白LCP1抗體(ti) 家貓(mao)皮膚細胞;FCA-S1

人卵(luan)巢微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞(HOMEC) ( 5×105 ) Saos-2，人成(cheng)骨肉瘤細(xi)胞 Human 大鼠(shu)角(jiao)化(hua)細胞內分泌(mi)因子(zi)(KAF)/雙(shuang)調(tiao)蛋(dan)白(AR)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 LH(Mouse luteotropic hormone) 小(xiao)鼠(shu)促黃體(ti)激(ji)素(su) 96T

PRAME： 黑色(se)素瘤優先表(biao)達抗原(yuan)抗(kang)體(ti) 人骨(gu)骼肌(ji)衛星(xing)細(xi)胞總RNAHSkMSC NA

TNFSF9 Protein Rat 重(zhong)組大鼠(shu) 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 大鼠(shu)角(jiao)蛋(dan)白18(K18)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MCV(Human anti-mutated citrullinated vimentin antibody)  人抗(kang)突變型瓜酸波(bo)形(xing)蛋(dan)白抗體(ti) NOV Others Human 人 CCN3 / NOV 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

G422瘤(liu) 神經膠(jiao)質(zhi)瘤(liu) 大鼠(shu)角(jiao)蛋(dan)白1(K1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 VC  大 96T

三(san)、培養註意事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶是(shi)否(fou)完好(hao)，培養液是(shi)否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象 發生請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯系。

2. 仔(zai)細閱讀細胞說明(ming)書(shu)，了(le)解細胞相關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞形態、所用培養基、血清比例、所需(xu) 細(xi)胞因子等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培養條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件(jian)不壹致而(er)導致細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細(xi)胞瓶表面，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態。因運輸問題(ti)，部分細(xi)胞由於(yu)溫度(du) 變化(hua)及劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培養基重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種到新(xin)的培養瓶或培養皿(min)中，置於(yu)培養箱中進(jin)行(xing)培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培養基用於(yu)細胞培養。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞後前(qian) 3 天各(ge)拍幾張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸(shu)的原因，個別(bie)敏感細胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定的情(qing)況，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系，告知細胞 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至問題(ti)解決(jue)。

7. 該細胞僅供科研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的培養基 (灌液(ye)培養基) 不能再用來(lai)培養細胞，請換(huan)用按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)細胞培 養條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培養基來(lai)培養細胞。     收(shou)到細胞後第壹次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。