BCPaP人甲(jia)狀腺癌細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)研研究使用、不得(de)用於臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消化，再(zai)輕輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比例(li)進行分瓶傳(chuan)代，最後放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消化，輕(qing)輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中進行長期保存(cun)。使用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考，具體(ti)操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明書(shu)為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻。然後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進行傳代培(pei)養(yang)。

    a、棄去培(pei)養(yang)上清(qing)，用不含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。        

    b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消化液浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱中消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然後在顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化情(qing)況，若細(xi)胞(bao)大(da)部分變圓(yuan)並脫落(luo)，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕敲幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。輕(qing)輕打(da)勻後裝入無(wu)菌離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻。        

     c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管中，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

     b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次拿(na)取。  

公司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產品(pin)：

IL-31RA/CRL3： 白介(jie)素31受(shou)體(ti)a抗(kang)體(ti) T-109A彈(dan)性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL

FGF10 Protein Human 重組(zu)人 FGF10 蛋白 大(da)鼠脂(zhi)肪甘(gan)油三酯脂(zhi)酶(ATGL)ELISA試劑(ji)盒(he) Rabbit IgG/Biotin 化兔(tu)IgG 0.1ml

LRSAM1： LRSAM1蛋白抗(kang)體(ti) CCNE1 Others Human 人 CCNE1 / Cyclin-E1 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

大(da)鼠腸巨噬細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠脂(zhi)多(duo)糖(tang)結(jie)合蛋白(LBP)ELISA試劑(ji)盒(he) mouse IgG/Biotin 化小(xiao)鼠IgG 0.1ml

Limd1： LIM結(jie)構域(yu)蛋白1抗(kang)體(ti) SK-N-SH, 人神(shen)經母細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao) 低(di)轉(zhuan)移(yi)肺(fei)癌細(xi)胞(bao),96-C細(xi)胞(bao) PLC/PRF/5(肝(gan)癌亞(ya)力(li)山(shan)大(da)細(xi)胞(bao))

EL4(小鼠(shu)淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 CL-0255A875(人黑(hei)色素瘤(liu)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2 豚鼠胚胎細(xi)胞(bao);104C1 人抗(kang)胸腺細(xi)胞(bao)球(qiu)蛋白(ATG)ELISA 試劑(ji)盒(he) MMP-14(Matrix metalloproteinase-14) 金屬基(ji)質(zhi)蛋白酶-14 0.5mg

HSP70： 熱(re)休克蛋白-70抗(kang)體(ti) 人臍(qi)靜(jing)脈內皮細(xi)胞(bao)(人膀(pang)胱癌細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran));ECV-304 [ECV304;ECV 304]

R 1610(倉鼠(shu)肺(fei)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人抗(kang)信(xin)號(hao)識(shi)別顆粒(li)抗(kang)體(ti)(SRP)ELISA 試劑(ji)盒(he) GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1) GDNF家族受體(ti)α-1(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

HSP90 alpha： 熱(re)休克蛋白90α抗(kang)體(ti) EPHB6 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) EphB6 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

原(yuan)代骨(gu)細(xi)胞(bao)特(te)制(zhi)無血清(qing)添(tian)加(jia)劑(ji)Many types of cells包(bao)裝：1ml 人抗(kang)心(xin)0脂(zhi)抗(kang)體(ti)IgM(ACA-IgM)ELISA 試劑(ji)盒(he) Ang- II (Angiotensin II ) 血管緊(jin)張素II抗(kang)原(yuan) 0.5mg

BCPaP人甲(jia)狀腺癌細(xi)胞(bao)人上(shang)皮細(xi)胞(bao)(HMEpiC) (5×105) THP-1人單(dan)核白血病細(xi)胞(bao) Human 大(da)鼠甲(jia)狀旁腺素受(shou)體(ti)2(PTHR2)ELISA試劑(ji)盒(he) LTB4  大(da)鼠白三烯(xi)B4 96T

Phospho-PDK1(Ser241)： 0酸(suan)化30酸(suan)肌(ji)醇依(yi)賴(lai)性蛋白激(ji)酶1 0.1ml

Rhesus antibody Rh HPV33 E6 人類狀(zhuang)瘤(liu)病(bing)毒(du)33抗(kang)體(ti) 人間充(chong)質(zhi)幹(gan)細(xi)胞(bao)(肝(gan)臟(zang))cDNAHMSC-hp cDNA

TNF Protein Ferret 重組(zu)雪貂 TNF-alpha / TNFA 蛋白 大(da)鼠甲(jia)狀旁腺激素相(xiang)關蛋白(PTHrP)ELISA試劑(ji)盒(he) 28S rRNP(Human 28S ribosome RNP antibody)  人28S抗(kang)核(he)糖(tang)體(ti)抗(kang)體(ti) SMPD1 Others Human 人 SMPD1 / ASM 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

HCC827 人非(fei)小細(xi)胞(bao)肺(fei)癌細(xi)胞(bao) 大(da)鼠甲(jia)狀旁腺激素相(xiang)關蛋白(PTHrP) ELISA 試劑(ji)盒(he) Cyt-C(Mouse Cytochrome-C)  小鼠細(xi)96T

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若有上(shang)述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說明書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹(yi)致，若由於(yu)培(pei)養(yang)條件不壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度 變化及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是正常(chang)現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相同條件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後前 3 天各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感細(xi)胞(bao)會出現(xian)不穩定(ding)的(de)情況，請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。