RAPA3G SYBR Green qPCR Mix

公司產品(pin)僅供(gong)科(ke)研研究(jiu)使用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷！

商品(pin)屬性(xing)

本制品(pin)是采用 SYBR Green 嵌(qian) 合(he) 熒(ying) 光(guang) 法 進 行(xing)Real-Time PCR 的專用(yong)試劑，本 SYBR Green qPCR Mix將化學修(xiu)飾(shi)的熱啟(qi)動 RAPA3G DNA 聚合(he)酶(mei)、反應 Buffer、dNTP、SYBR Green 染(ran)料等(deng)試劑預混(hun)在(zai)壹起，是壹(yi)種(zhong) 2×濃(nong)度的單(dan)組分預混試劑。該制(zhi)品(pin)配有(you)單(dan)獨(du)的 ROX 內參染(ran)料，可(ke)用(yong)於(yu)需要(yao) ROX 進行(xing)孔(kong)間校(xiao)正(zheng)的定(ding)量(liang) PCR 儀。RAPA3G DNA 聚(ju)合酶(mei)為第三(san)代(dai) DNA 聚(ju)合(he)酶(mei)，其具(ju)有(you)的雜質(zhi)耐受性(xing)（對(dui)乙(yi)醇(chun)、胍(gua)鹽、肝素(su)具(ju)有(you)高(gao)的耐受性(xing)），因(yin)此(ci)對(dui)於(yu)純(chun)度較(jiao)差(cha)的 DNA 模板，該 Mix 仍然可以獲(huo)得理(li)想(xiang)的實驗結果(guo)。RAPA3G DNA 聚(ju)合酶(mei)為化學法修(xiu)飾(shi)的 HotStart版本(ben)，其在(zai) 50℃以(yi)下 無(wu)活(huo)性(xing)，只(zhi)有(you) 95℃條件下加熱5min 後(hou)才(cai)能恢(hui)復酶(mei)的活(huo)力。因(yin)此該系(xi)統(tong)可(ke)以有(you)效(xiao)抑制非特(te)異(yi)性(xing) PCR 擴(kuo)增(zeng)，極大(da)的提(ti)高了 PCR 擴(kuo)增(zeng)特(te)異(yi)性(xing)。該(gai)試劑盒的反應緩沖液，可(ke)在寬(kuan)範(fan)圍中(zhong)得(de)到良好的擴(kuo)增(zeng)結果、檢(jian)測(ce)靈敏度更高(gao)、信(xin)號(hao)更強。
包裝
規 格
2×RAPA3G SYBR
Green qPCR Mix
50×ROX Dye
1ml （A2250A） 1 ml 200 μl
5ml （A2250B） 1 ml×5 200 μl
儲存：
請避光(guang)置(zhi)於(yu)-20℃以(yi)下可保存３年。該試劑經 30 次凍(dong)融(rong)後性(xing)能無下降(jiang)，因(yin)此不(bu)使用時請置(zhi)於(yu)-20℃避(bi)光(guang)保存。
操作(zuo)方(fang)法
1. 根據機(ji)型(xing)選擇(ze)步驟 A 或 B
A: 需要(yao)添加 ROX 染(ran)料進(jin)行(xing)反(fan)應孔(kong)間信號(hao)矯正的 Real-TimePCR 儀，包括：ABI PRISM7900HT, 7300/7500/7500 FastReal-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P(Stratagene)等(deng)。按(an)照如下組分配制 20 μl PCR 反(fan)應體系：終(zhong)濃(nong)度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
註(zhu)意：引(yin)物(wu)用(yong)量(liang)有(you)時可提(ti)高到 0.8 μl 以提(ti)高擴(kuo)增(zeng)效率(lv)。B:無需添加 ROX 染(ran)料進(jin)行(xing)反(fan)應孔(kong)間信號(hao)矯正的 Real-TimePCR 儀，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)； CFX96Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene等(deng)。按(an)照如下組分配制 20 μl PCR 反(fan)應體系：終(zhong)濃(nong)度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 進行 Real-Time PCR 反(fan)應,通常采用兩(liang)步法，程序(xu)如下：
 Stage 1: 95℃ 5min*
 Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles
 Stage 3: Dissociation analysis
註(zhu)意：由(you)於(yu)該(gai)酶(mei)為化學修(xiu)飾(shi)的熱啟(qi)動 RAPA3G DNA 聚合(he)酶(mei)，必(bi)須(xu)於(yu) 95℃加(jia)熱 5min 才(cai)能恢(hui)復酶(mei)的活(huo)性(xing)，該(gai)熱(re)啟(qi)動步驟不(bu)能縮短(duan)時間。
3. 反應結束後(hou)確(que)認 Real-Time PCR 的擴(kuo)增(zeng)曲線(xian)、融(rong)解曲(qu)線(xian)和(he)標(biao)準曲線(xian)。

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