癌基(ji)因(yin)轉化細(xi)胞基(ji)因(yin)組(zu) DNA 轉染法實驗步(bu)驟(zhou)：

1、 提(ti)取(qu)基(ji)因(yin)DNA(含(han)癌基(ji)因(yin)).

2、 DNA準備:取(qu)供(gong)體DNA50～100微克(ke),加3M NaCl或(huo)醋(cu)酸鈉使(shi)最終濃(nong)度至0.3M混(hun)勻.

3、 再(zai)加2倍(bei)體積(ji)無(wu)水乙醇(chun),3000轉/分離(li)心10分鐘(zhong),去(qu)上(shang)清(qing).

4、 加入轉染緩(huan)沖(chong)液(ye),待DNA充分融(rong)解(jie)後(hou),再(zai)加入2.5M CaCl2,令(ling)最終濃(nong)度為125mM,用(yong)吸管輕(qing)輕(qing)吹(chui)打三(san)次(ci).置(zhi)室溫(wen)下(xia)10～30分鐘(zhong),待液(ye)體透明(ming)度降低,出現微濁藍(lan)色(se)時(shi),即(ji)可用(yong)於轉染受(shou)體細(xi)胞.

5、 細(xi)胞:取(qu)生(sheng)長狀(zhuang)態良(liang)好(hao)、處於(yu)半(ban)匯(hui)合階段的指(zhi)數(shu)增生(sheng)期(qi)細(xi)胞,在轉染前(qian)24小(xiao)時,更換培養(yang)液(ye)1次(ci).

6、 轉染:向每(mei)瓶(ping)中(zhong)加DNA－磷酸鈣(gai)沈澱物0.5～1ml/瓶,置(zhi)37℃作(zuo)用(yong)4～6小時(shi).

7、 培養(yang):棄(qi)去(qu)培養(yang)液(ye),用(yong)15％甘油(you)處理(li)3分鐘(zhong),無血清(qing)培(pei)養(yang)漂洗(xi)1次(ci),加入新(xin)培養(yang)液(ye),37℃溫(wen)箱(xiang)培(pei)養(yang)24小時(shi).

8、 傳代(dai):按1:5或(huo)1:10分瓶(ping)傳代,每(mei)2～3天(tian)換液(ye)1次(ci),接(jie)近匯(hui)合時血清(qing)用(yong)量(liang)降至(zhi)5％,培養(yang)2～3周.

9、 檢(jian)測(ce):逐(zhu)日觀(guan)察(cha),待出現轉化竈(zao)後(hou),分離(li)入另(ling)瓶(ping)中(zhong)培養(yang).