MDCK狗腎轉(zhuan)化細胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供科研研究使(shi)用、不得(de)用於臨床診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞回縮(suo)變圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞回縮(suo)變圓後加入(ru)培(pei)養液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並放置(zhi)於凍存管(guan)中；

4）先將(jiang)細胞凍存(cun)管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其移入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮中進行(xing)長期(qi)保(bao)存。使(shi)用程序

降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培養(yang)凍(dong)存處理(li)僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅速搖晃解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻。然後將所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適量培(pei)養(yang)基的(de)培養瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培養基，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並檢查(zha)細胞密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如果細胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培養上清，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中，使(shi)消化液(ye)浸潤所(suo)有(you)細胞，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況而(er)定(ding)），然後在顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細胞消化(hua)情(qing)況，若細胞大部(bu)分(fen)變圓並脫(tuo)落，迅速拿(na)回操作臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到新的含8 mL培養(yang)基的新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於培養箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生長(chang)狀態(tai)良好時(shi)，可(ke)進行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集細胞及細胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量加入(ru)無(wu)血清細胞凍存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支凍(dong)存管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲存。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培養註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後首(shou)先觀察(cha)細胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若有(you)上述現(xian)象 發生請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱讀細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細胞相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血清比(bi)例、所需 細胞因子(zi)等(deng)，確保(bao)細胞培養(yang)條(tiao)件壹(yi)致，若由(you)於培養條件(jian)不(bu)壹(yi)致而導致細胞出現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自(zi)行承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細胞狀態(tai)。因運輸問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞由(you)於溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正常現(xian)象。觀察(cha)好細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混勻收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到新的培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培養箱中進行(xing)培養。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的培養基用於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到細胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞照片，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便(bian)於和我司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於運輸的原因，個(ge)別敏(min)感細胞會出(chu)現(xian)不穩定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術人員跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供科研使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培養(yang)基) 不能再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細胞，請換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培 養(yang)條(tiao)件新配(pei)制的(de)培(pei)養基來培養(yang)細胞。     收(shou)到細胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

猴(hou)腎細胞;Vero IgCD4 大鼠(shu)內(nei)皮(pi)抑(yi)素(su)(ES)ELISA 試(shi)劑盒(he) CK-HMW(Human cytokeratin High Molecular Weight)  人高分(fen)子(zi)量細胞角(jiao)蛋白(bai) 96T

NOC2L： NOC2家(jia)族樣(yang)蛋白(bai)抗(kang)體(ti) 二氫(qing)還原酶(mei)缺(que)陷(xian)型(xing)中國倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢細胞;CHO/dhFr-

人(ren)口(kou)腔角(jiao)質細胞(HOK)( 5×105 ) NSC，大鼠(shu)神(shen)經幹(gan)細胞 Rattus 大鼠(shu)內(nei)皮(pi)型(xing)合(he)酶(mei)(NOS3)ELISA試(shi)劑盒(he) PL-A2(Mouse Phospholipidase A2)  小鼠(shu)0脂(zhi)酶(mei)A2 96T

Nitrotyrosine： 硝(xiao)基(ji)酪酸(suan)抗(kang)體(ti) 小鼠(shu)淋(lin)巴瘤(liu)細胞;P388D1(IL-1)

IL13 Protein Human 重(zhong)組(zu)人 IL13 / ALRH 蛋(dan)白(bai) 大鼠(shu)內(nei)皮(pi)型(xing)合(he)成(cheng)酶(mei)3(eNOS-3)ELISA試(shi)劑盒(he) PCNA  大鼠(shu)抗(kang)增(zeng)殖細胞核抗(kang)原抗(kang)體(ti) CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對照)

KLC1： 驅(qu)動(dong)蛋(dan)白(bai)2抗(kang)體(ti) MA, 小鼠(shu)星(xing)形(xing)膠(jiao)質細胞

EFNA3 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠(shu) Ephrin-A3 / EFNA3 蛋(dan)白(bai) (His 標簽(qian)) 綿(mian)羊主(zhu)要組(zu)織相(xiang)容性復合(he)體(ti)(MHC)ELISA 試(shi)劑盒(he) CD105 CD105蛋白(bai) 0.2mg

KIAA1522： KIAA1522蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti) CTNNB1 Others Mouse 小鼠(shu) beta-Catenin / CTNNB1 桿(gan)狀病毒-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對照)

人(ren)神(shen)經元細胞培養(yang)基(ji) 100mL 綿(mian)羊胰(yi)島(dao)素(su)(Insulin)ELISA試(shi)劑盒(he) CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP) 瓜(gua)酸(suan)環肽(tai) 0.5mg

KCTD5： 離(li)子(zi)通(tong)道(dao)四聚體(ti)結構域(yu)蛋白(bai)5抗(kang)體(ti) RDFs, 大鼠(shu)真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞 ICPB 7[C-1;ICMP 8639;NCPPB 2626]細胞 CGM1(EB病毒(du)轉(zhuan)化的B細胞)

MDCK狗(gou)腎轉(zhuan)化細胞人(ren)小梁(liang)網細胞HTMC 大鼠(shu)P21蛋(dan)白(bai)(P21)ELISA試(shi)劑盒(he) CNR-1(Human cadherln-related neuronal receptor1)  人鈣粘(zhan)蛋(dan)白(bai)相(xiang)關的神(shen)經(jing)受體(ti)1 96T

Sumo 2+3： 泛(fan)素(su)樣蛋(dan)白(bai)Sumo2/3抗(kang)體(ti) AsPC-1(人胰腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2

EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的人(ren)B淋巴細胞;KMY1022 人神(shen)經(jing)星形(xing)膠(jiao)質細胞培養(yang)基(ji) 100mL 大鼠(shu)P0蛋(dan)白(bai)(p0)ELISA試(shi)劑盒(he) ATM(Human Ataxia telangiectasia mutated)  人毛(mao)細血管(guan)擴(kuo)張(zhang)性共(gong)濟失調(tiao)突(tu)變(bian)基(ji)因 96T

SCNN1D： 上(shang)皮(pi)離(li)子(zi)通(tong)道(dao)蛋(dan)白(bai)D/δENaC抗(kang)體(ti) CL-0125J82(人膀胱(guang)癌細胞)5×106cells/瓶×2

MiaPaCa-2, 人(ren)胰(yi)腺癌細胞 大鼠(shu)N-乙(yi)酰基-絲(si)酰(xian)-天(tian)門(men)冬(dong)酰(xian)-賴(lai)酰-脯酸(suan)(AcSDKP)ELISA試(shi)劑盒(he) AhR(Human aryl hydrocarbon receptor)  人芳(fang)香(xiang)烴(ting)受體(ti) 96T