Dnase I(Rnase free)

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商品屬性

產品介紹：
該(gai)酶是(shi)將單鏈(lian)或雙鏈(lian) DNA 同等程(cheng)度的(de)隨機(ji)分(fen)解，生成(cheng)具有(you) 5′-P 末(mo)端寡核苷(gan)酸的(de)脫(tuo)氧(yang)核(he)糖核(he)酸(suan)內(nei)切酶。由(you)於RNase-free DNase I 中 Protease 已幾乎被去(qu)除，從而(er)提(ti)高(gao)了該(gai)酶在(zai) pH 中性區域(yu)的(de)穩定(ding)性。此(ci)外(wai)該(gai)酶中添加了
Rnase Inhibitor，用於抑(yi)制(zhi) RNA 樣品中殘(can)留(liu)的(de) RNase 核(he)酸(suan)酶，因(yin)此(ci)可以有(you)效抑(yi)制(zhi) RNA 提(ti)取(qu)過程(cheng)中 Rnase 酶對(dui) RNA的(de)降解(jie)。Stop Buffer 終(zhong)止反(fan)應(ying)後，可通過壹步(bu)加熱失活DNase I 活(huo)性。

活(huo)性定義
在(zai) 50 μl 體系下(xia)，37℃ 10min 條(tiao)件(jian)下(xia)消(xiao)化(hua) 1 μg pBR322質(zhi)粒 DNA 所(suo)需(xu)的(de)酶量(liang)定義(yi)為(wei) 1 個活(huo)性(xing)單(dan)位。純(chun)度
2 U 的(de)本(ben)酶和 1 μg 的(de) 16S, 23S rRNA 在(zai) 37℃、pH7.5 的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)反(fan)應(ying) 1 小時，RNA 的(de)電(dian)泳(yong)譜(pu)帶(dai)不(bu)發生(sheng)變化
應(ying)用：去(qu)除 RNA 樣品中的(de) DNA 汙(wu)染(ran)。
儲(chu)存：-20°C 可(ke)保(bao)存 2 年(nian)。
操(cao)作方(fang)法(fa)（去(qu)除 RNA 中的(de)基(ji)因組(zu) DNA 汙(wu)染(ran)）
1. 按(an)以下組分配制(zhi)反(fan)應(ying)體系
RNA 1~50 μg
10× RD Buffer 2 μl
Rnase Free DNase I (2 U/μl) 1 μl*
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*若(ruo) RNA 樣(yang)品中含有(you)超過(guo) 5 μg 基(ji)因組(zu) DNA 汙(wu)染(ran)，請使用2 μl 該酶。
2. 37°C 孵(fu)育(yu) 15min 以消化去(qu)除基(ji)因組(zu) DNA。
3. 孵(fu)育(yu)完(wan)畢(bi)後加入 2 μl 10× RD Stop Buffer，混(hun)合均(jun)勻室(shi)溫放(fang)置(zhi) 1min，並置(zhi)於 75°C 10min 加熱失活 DNase I。樣(yang)品可直接用於下(xia)壹(yi)步反(fan)轉錄(lu)等試(shi)驗。
註(zhu)意：
1）通(tong)常加熱方(fang)法(fa)即可(ke)失活 DNase I。如(ru)需(xu)要去(qu)除殘(can)留(liu)的(de)變性蛋白(bai)，可在(zai) 37°C 消化(hua)完(wan)畢(bi)後使用酚氯(lv)仿(fang)抽(chou)提(ti)並(bing)沈(chen)澱 RNA樣品（不(bu)進行(xing)加熱操(cao)作）。
2）10× RD Stop Buffer 中含有(you)螯合劑用於去(qu)除二價(jia)陽(yang)離(li)子(zi)，進(jin)行加熱失活前，必須加入 2 μl 10× RD Stop Buffer 並混(hun)合均(jun)勻，再(zai)進行熱失活，否(fou)則會(hui)導(dao)致 RNA 降解(jie)。
3）處(chu)理完(wan)畢(bi)的(de) RNA 樣(yang)品進行(xing)壹(yi)步(bu)反(fan)轉錄(lu)反(fan)應(ying)時，添加量需(xu)要<20%（如(ru) 20 μl 的(de)反(fan)轉錄(lu)體系中加入量要<4 μl）

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