ELISA試劑盒在檢(jian)測目(mu)標抗(kang)原時(shi),可能(neng)會(hui)因(yin)為抗(kang)體(ti)與(yu)非目(mu)標抗(kang)原的(de)交(jiao)叉反(fan)應(ying)而影(ying)響(xiang)結(jie)果的(de)準(zhun)確(que)性(xing)。交(jiao)叉反(fan)應(ying)率是(shi)衡量(liang)試劑盒特異(yi)性(xing)的關鍵(jian)指標,其(qi)值(zhi)越(yue)低,特異(yi)性越(yue)高 。
控制(zhi)豬(zhu)ELISA試劑盒的交(jiao)叉反(fan)應(ying)率是(shi)確(que)保檢(jian)測結(jie)果準(zhun)確(que)性(xing)的(de)關鍵(jian),主要(yao)通(tong)過以(yi)下策略(lve)實現:
壹、選(xuan)擇高特異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)
優先(xian)使(shi)用(yong)單(dan)克隆(long)抗(kang)體(ti),因(yin)其(qi)僅(jin)識別(bie)特(te)定(ding)表位(wei),可顯(xian)著(zhu)降(jiang)低與非(fei)目(mu)標抗(kang)原的(de)結(jie)合(he)風(feng)險(xian)。例(li)如,非(fei)洲(zhou)豬(zhu)瘟(wen)抗(kang)體(ti)檢(jian)測中(zhong)需通過陰陽(yang)性對(dui)照(zhao)OD值(zhi)差(cha)(≥4.0)排除(chu)非特(te)異性(xing)結(jie)合(he)。
二、優化(hua)實驗條(tiao)件(jian)
封閉(bi)劑選(xuan)擇:使(shi)用(yong)酪(lao)蛋(dan)白或明膠(jiao)等(deng)封(feng)閉(bi)劑(ji),減少非(fei)特異性(xing)結(jie)合(he)位(wei)點(dian)。
洗滌(di)程序(xu):嚴格洗(xi)滌(如5次洗(xi)滌+30秒浸(jin)泡(pao)),降(jiang)低背(bei)景(jing)信(xin)號(hao)。
孵育(yu)控制(zhi):縮短溫(wen)育時(shi)間至(zhi)25分鐘(zhong),同時(shi)保持(chi)靈(ling)敏(min)度(du)。
三、驗證(zheng)與質(zhi)控
交(jiao)叉反(fan)應(ying)實驗:要(yao)求(qiu)交(jiao)叉反(fan)應(ying)率<5%(如豬(zhu)IgG與IgA的驗(yan)證)。
加標(biao)回收率:確保(bao)回收率在80%-120%之(zhi)間,避(bi)免(mian)假(jia)陽(yang)性/陰性(xing)結(jie)果。
批(pi)間精(jing)密(mi)度(du):不同批(pi)次試劑盒檢(jian)測同(tong)壹(yi)標(biao)準(zhun)品(pin),OD值(zhi)偏(pian)差(cha)應<20%。
四(si)、試劑盒選(xuan)擇標(biao)準(zhun)
優先(xian)選(xuan)擇通(tong)過(guo)農(nong)業(ye)農(nong)村部(bu)認證的(de)試劑盒,並(bing)關註(zhu)其(qi)特異(yi)性指標(如(ru)與BVDV無交(jiao)叉反(fan)應(ying))。
為了有效(xiao)控(kong)制交(jiao)叉反(fan)應(ying)率,建(jian)議從抗(kang)體(ti)選(xuan)擇、實驗條(tiao)件(jian)優化(hua)、操(cao)作(zuo)規(gui)範(fan)三(san)個方(fang)面入手(shou)。同時(shi),定期進行(xing)試劑盒性能(neng)評(ping)估,確保(bao)其(qi)在不(bu)同(tong)樣本(ben)中(zhong)的穩定(ding)性與(yu)特異(yi)性(xing)。如發(fa)現(xian)交(jiao)叉反(fan)應(ying)異常(chang),應(ying)調(tiao)整(zheng)實驗條(tiao)件(jian)或更換試劑盒。