H22小鼠肝癌細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不得用於(yu)臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後加入培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入液氮中進(jin)行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養(yang)基(ji)混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加入含適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二天換(huan)液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使消化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕打(da)勻後(hou)裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按1:2比例分到新的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液氮灌儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以(yi)便下次拿取(qu)。

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：

MDA-MB-415(人癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 NRK(大(da)鼠腎(shen)細(xi)胞(bao)) 大(da)鼠血管(guan)細(xi)胞(bao)粘(zhan)附分子1(VCAM1)ELISA試劑(ji)盒 ANG- II (Rat angiotension II )  大(da)鼠血管(guan)緊張素Ⅱ 96T

phospho-MEK5(Ser137)： 0酸(suan)化原(yuan)活化蛋(dan)白(bai)激(ji)酶激(ji)酶5抗體(ti) 非(fei)洲綠猴腎(shen)細(xi)胞(bao)系(xi)/HCV-p7;Vero-HCV-p7

IFNA7 Protein Human 重(zhong)組(zu)人 Ierferon alpha 7 / IFNA7 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽(qian)) 大(da)鼠血管(guan)細(xi)胞(bao)粘(zhan)附分子(VCAM-1)ELISA試劑(ji)盒 Mouse reduced glutathione,GSH  小鼠還原型(xing) 96T

MIG5： 細(xi)胞(bao)遷(qian)移誘(you)導(dao)因(yin)子5抗體(ti) IL5 Others Mouse 小鼠 IL5 桿狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

大(da)鼠腦動(dong)脈血管(guan)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠血管(guan)舒緩(huan)激(ji)肽(BK)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Plant Indole-3-acetic acid ,IAA  植(zhi)物吲(yin)哚(duo)乙(yi)酸(suan) 96T

H Cadherin： 心(xin)臟鈣(gai)粘蛋(dan)白(bai)抗體(ti) CL-0178OVCAR-3(人(ren)卵巢癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

SK23細(xi)胞(bao)，人(ren)黑色素瘤(liu)細(xi)胞(bao) 嗜(shi)熱(re)乳酸(suan)鏈球菌(jun) 人腦(nao)瘤(liu)細(xi)胞(bao);SF17 人(ren)過氧(yang)化物酶(mei)體(ti)增(zeng)殖因子活化受體(ti)γ( PPAR-γ)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CK2(casein kinase 2) 細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋(dan)白(bai)2抗原(yuan) 0.5mg

HSD17B6： 17-β-羥(qiang)脫(tuo)氫酶(mei)6抗(kang)體(ti) HA Others H2N2 甲(jia)型(xing)流感(gan) H2N2 (A/Canada/720/2005) 血(xue)凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

獼猴皮膚(fu)細(xi)胞(bao);MMS4 人(ren)過氧(yang)化物酶(mei)體(ti)增(zeng)殖物激(ji)活受體(ti)α(PPAR-α)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CK5(Cytokeratin 5) 細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋(dan)白(bai)5抗原(yuan) 0.5mg

H5N1-H5： H5亞型(xing)全(quan)病(bing)毒抗(kang)體(ti) 人(ren)整(zheng)合SV40基(ji)因(yin)的(de)上皮(pi)細(xi)胞(bao);HBL-100 [HBL100]

H22小鼠肝癌細(xi)胞(bao)PPHLN1： 脈周蛋(dan)白(bai)1抗體(ti) MMP7 Others Human 人(ren) MMP7 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

BALB/C小鼠肝上(shang)皮細(xi)胞(bao);BNL 1ME A.7R.1 大(da)鼠高密(mi)度脂蛋(dan)白(bai)3(HDL3)ELISA試劑(ji)盒 Human Coronaviruses IgG  人(ren) 96T

PINX-1： 端(duan)粒酶抑(yi)制(zhi)因(yin)子PinX-1抗體(ti) 鼬肺上皮細(xi)胞(bao);MV-1-Lu

人胚胎(tai)眼(yan)鞏(gong)膜成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao);HFSF 人(ren)肺大(da)動(dong)脈內(nei)皮細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠高密(mi)度脂蛋(dan)白(bai)2(HDL2)ELISA試劑(ji)盒 ANG-2  大(da)鼠血管(guan)生成素2 96T

PRLR： 泌乳素受體(ti)抗(kang)體(ti) 人(ren)臍(qi)靜脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)HUVEC

三、培養(yang)註意事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是否有(you)漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上述現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件壹致，若由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不壹致(zhi)而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度 變化及(ji)劇(ju)烈碰亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消化，懸浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新的(de)培養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相同(tong)條件的(de)培養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於(yu)和我(wo)司(si)技術部溝通 交(jiao)流。由(you)於(yu)運輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出現(xian)不穩(wen)定的(de)情況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技術人員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直至(zhi)問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使用。

8. 備註：運輸(shu)用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。