AML-12小鼠肝(gan)實質(zhi)細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不得用於(yu)臨床診(zhen)斷！

1、細胞傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消(xiao)化，再(zai)輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然後按 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加入(ru)培(pei)養(yang)液終

止消(xiao)化，輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中進(jin)行長(chang)期保(bao)存。使(shi)用程序

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供參(can)考，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨貨產(chan)品說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸液的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有細胞懸液加入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過夜（或將(jiang)細胞(bao)懸液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

    a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清(qing)，用不含(han)鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。        

    b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後在顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅(xun)速拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。        

     c、將(jiang)細胞(bao)懸液按1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新(xin)皿(min)中或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好時，可(ke)進行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

     b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次拿(na)取(qu)。  

公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的產(chan)品：

IL12B Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠(shu) IL12B / IL-12B 蛋白(bai) (Fc 標簽) 大鼠(shu)神經肽Y(NPY)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) OPGL  大(da)鼠骨(gu)保(bao)護素配體 96T

Neurabin 2： 神經組織(zhi)特(te)異(yi)性(xing)F肌(ji)動蛋白(bai)結(jie)合蛋白(bai)2抗(kang)體 GAD1 Others Human 人 GAD67 / GAD1 桿狀病(bing)毒-昆蟲細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對照)

小鼠膀胱成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大鼠(shu)神經肽Y(NP-Y)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) p2(Human myelin protein 2)  人(ren)神經髓(sui)鞘蛋白(bai) 96T

NYS48： NYS48蛋白(bai)抗(kang)體 COS-1細胞，SV40轉(zhuan)化(hua)的非洲綠(lv)猴(hou)腎(shen)細胞(bao) 人大(da)腸癌(ai)細(xi)胞,PA319細(xi)胞(bao) CM-R005大鼠氣管平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)基100mL

IFNA2 Others Mouse 小鼠 IFNA2 / Ierferon alpha 2 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對照) 大(da)鼠(shu)神經肽Y(NP-Y)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) AVP(Human arginine vasopressin)  人(ren)精酸(suan)加壓(ya)素 96T

人心房(fang)肌(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 人D-乳(ru)酸(suan)(D-LAC)ELISA試(shi)劑盒(he) TRAF1 壞(huai)死因(yin)子受體相關因(yin)子1抗原 0.5mg

IL-23： 白(bai)介(jie)素-23抗體 蚊源細(xi)胞(bao) 人(ren)結腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞，SW620[SW-620]細(xi)胞(bao) HCC 94 [HCC941122](子宮(gong)鱗(lin)癌(ai)細(xi)胞(高(gao)分(fen)化))

CD27 Others Human 人 CD27 / TNFRSF7 人細胞(bao)裂解液 (陽性對照) 人(ren)D二(er)聚體(D2D)ELISA 試劑盒 TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2) 壞(huai)死因(yin)子受體相關因(yin)子2抗原 0.5ml

IL-4： 白(bai)介(jie)素4抗體 兔(tu)腎(shen)細胞(bao);RK-13

PC-12細胞，大鼠(shu)腎(shen)上腺(xian)嗜鉻細胞瘤細胞(未分(fen)化) HCT 116(結(jie)腸癌(ai)細(xi)胞) 人(ren)神經母細(xi)胞(bao)瘤細胞;BE(2)-M17 人DNA結(jie)合蛋白(bai)(DBP)ELISA 試(shi)劑盒 TRAF3/CD40bp (CD40 binding protein) 壞死因(yin)子受體相關蛋白(bai)3抗(kang)原 0.5mg

AML-12小鼠肝(gan)實質(zhi)細(xi)胞(bao)RFPL2+RFPL3： RET指蛋白(bai)樣(yang)2/3抗體 EPHB2 Others Human 人 EphB2 人細胞(bao)裂解液 (陽性對照)

人肺微血(xue)管內皮(pi)細(xi)胞(bao)裂解物HPMECL 大鼠白(bai)介(jie)素25(IL25)ELISA試劑(ji)盒 5-LO/LOX(Human 5-lipoxygenase)  人(ren)5脂(zhi)加氧(yang)酶 96T

RFESD： RFESD蛋白(bai)抗(kang)體 獼猴肌(ji)肉細胞;MMm7

人正(zheng)常前列腺(xian)基質永(yong)生化(hua)細胞;WPMY-1 人(ren)心(xin)肌(ji)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大鼠(shu)白(bai)介(jie)素23受體(IL23R)ELISA試劑盒 AC-1(Human adenylyl cyclase 1)  人(ren)腺(xian)苷(gan)酸(suan)環化酶(mei)1 96T

REG1 beta： 胰島(dao)細(xi)胞再(zai)生(sheng)因(yin)子β抗體 CL-0465WERI-Rb-1(人視網膜神經膠質(zhi)瘤細胞)5×106cells/瓶(ping)×2

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完好，培(pei)養(yang)液是否有漏液、渾濁等(deng)現象，若(ruo)有上述現象 發(fa)生(sheng)請及時和我們聯系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明書，了(le)解(jie)細胞相關信息，如(ru)細胞(bao)形態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子等，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件壹致，若(ruo)由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞(bao)由於(yu)溫度 變(bian)化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現象。觀(guan)察好細胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用相同條(tiao)件的培(pei)養(yang)基用於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶收到細(xi)胞(bao)後前 3 天各(ge)拍(pai)幾張細胞照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司技(ji)術(shu)部溝通 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別敏感細胞(bao)會(hui)出現不穩(wen)定的(de)情況，請及時和我們聯系，告知(zhi)細(xi)胞 的具(ju)體情況，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能(neng)再(zai)用來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換用按照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。