4T1+luc小鼠(shu)乳(ru)腺癌細胞(bao)熒光(guang)素(su)酶標記(ji)

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供(gong)科研研究使用、不得用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養(yang)液終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期保存。使(shi)用程序(xu)

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入(ru)-80℃。

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

二(er)、細胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考，具體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以隨貨產(chan)品說(shuo)明書(shu)為主。將含有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液加入含適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況而定(ding)），然後(hou)在顯微鏡(jing)下觀察細胞(bao)消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大部分變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅速拿回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例分到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生長狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集細胞(bao)及細胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計數。

b、根據(ju)細胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，使細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標識。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌儲存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以便下次(ci)拿取。

公(gong)司正(zheng)在出售的產(chan)品：

A7r5(大鼠(shu)胸(xiong)大動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人腦(nao)血管(guan)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)HBVSMC 大鼠(shu)周(zhou)期素依(yi)賴性(xing)激(ji)酶5(CDK5)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) human IgG/Cy3 熒光(guang)素(su)Cy3標記(ji)人IgG 0.1ml

LZTFL1： 亮酸拉(la)鏈(lian)轉錄因子樣(yang)1抗(kang)體(ti) CL-0089H9c2(2-1) (大鼠(shu)心(xin)肌(ji)細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

FGF12 Protein Canine 重組狗(gou) FGF12 蛋(dan)白(bai) 大(da)鼠(shu)周(zhou)期素依(yi)賴性(xing)激(ji)酶2(CDK2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) human IgM/Cy3 熒光(guang)素(su)Cy3標記(ji)人IgM 0.1ml

Laminin B2 gamma 1： 層粘(zhan)連(lian)蛋(dan)白(bai)B2γ1抗(kang)體(ti) EPD1 Others Mouse 小鼠(shu) CD39 / EPD1 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

大鼠(shu)小腸血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大鼠(shu)重肽(tai)鐵(tie)蛋(dan)白(bai)(FTH)ELISA試(shi)劑盒 human IgA/Cy3 熒光(guang)素(su)Cy3標記(ji)人IgA 0.1ml

COLO 205(人結(jie)腸(chang)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 CL-0158MGC80-3(人胃癌細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2 大鼠(shu)肝(gan)細胞(bao);BRL 人酪(lao)酸激(ji)酶2(Tyk-2)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Calponin 1 鈣調(tiao)節(jie)蛋(dan)白(bai)-1(抗(kang)原) 0.5mg

GATA4： GATA結(jie)合(he)蛋白(bai)4抗(kang)體(ti) 人肺癌細胞(bao);A549 [A-549]

NEC(人食(shi)管(guan)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人狼(lang)瘡(chuang)抗(kang)凝(ning)抗(kang)體(ti)(LAC/LA)ELISA 試劑(ji)盒(he) COMP 軟(ruan)骨寡聚(ju)基(ji)質蛋(dan)白(bai)抗(kang)原 0.5mg

GABA： 兔抗(kang)γ1基(ji)抗(kang)體(ti) EPCAM Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴 / 恒(heng)河(he)猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

肝(gan)竇(dou)內(nei)皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml) 人萊姆(mu)IgG(Lyme-IgG)ELISA 試(shi)劑盒 Caspase-1 (ICE; CASP-1;P45) 天(tian)冬(dong)酸-胱(guang)酸特(te)異性(xing)蛋(dan)白(bai)酶家族(zu)(抗(kang)原) 0.5mg

4T1+luc小鼠(shu)乳(ru)腺癌細胞(bao)熒光(guang)素(su)酶標記(ji)DLD-1 人結(jie)直(zhi)腸腺癌上(shang)皮細胞(bao) 大鼠(shu)精酸酶1(ARG1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) sPECAM-1/sCD31  大鼠(shu)可(ke)溶性(xing)血(xue)小板內(nei)皮(pi)細胞(bao)粘(zhan)附分(fen)子1 96T

PSMA4： 蛋白(bai)酶體(ti)PSMα4/20S Proteasome α4抗(kang)體(ti) 6T-CEM細胞(bao)，T細胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing) 人巨(ju)細胞(bao)性(xing)肺癌細胞(bao),801-D細胞(bao) 細胞(bao)

CTSD Others Human 人 Cathepsin D / CTSD 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 大(da)鼠(shu)精酸酶(Arg)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) cmDNA(Human anti-cell membrane DNA antibody)  人抗(kang)細胞(bao)膜DNA抗(kang)體(ti) CL-0396NCI-H226(人肺鱗(lin)癌細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

CMVECs微血管內(nei)皮(pi)細胞(bao) CMVECs micro vascular endothelial cells DMEM+10%FBS 大鼠(shu)精酸加(jia)壓(ya)素受體(ti)1A(AVPR1A)ELISA試劑(ji)盒(he) GFAP(Mouse glial fibrillary acidic protein)  小鼠(shu)神(shen)經膠(jiao)質纖(xian)維酸性(xing)蛋(dan)白(bai) 96T

PIP5KL1： 4-0酸0脂(zhi)酰(xian)肌醇(chun)5激(ji)酶1樣(yang)蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti) ADAM15 Others Human 人 ADAM15 / MDC15 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首先觀察細胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏(lou)液、渾濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比例、所(suo)需 細胞(bao)因子等(deng)，確保細胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責任由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡(jing)下觀察細胞(bao)狀態。因運輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀察好細胞(bao)狀態後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直接混勻收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞(bao)，並接種到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用相同條(tiao)件的培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞(bao)照片，記(ji)錄細胞(bao)狀態，便於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運輸的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞(bao)會出現不穩(wen)定(ding)的情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知細胞(bao) 的具體(ti)情況，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供(gong)科研使用。

8. 備(bei)註：運輸用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。