MLE-12小(xiao)鼠(shu)肺上(shang)皮細(xi)胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供科研(yan)研(yan)究使用(yong)、不得用於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消化，再輕(qing)輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進行分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細胞(bao)凍存：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止消化，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍存管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期保(bao)存。使用(yong)程序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以下細胞(bao)培養(yang)凍存(cun)處理僅(jin)供參(can)考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨產品說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴中迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然後將(jiang)所(suo)有細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二天換(huan)液並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有細胞，將(jiang)培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況(kuang)而定），然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部分(fen)變圓並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化。輕輕(qing)打(da)勻後裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分到新的含(han)8 mL培養(yang)基的(de)新皿中或者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存：待細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好時，可(ke)進(jin)行細胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行細胞計數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存管凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管做好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記錄(lu)凍存(cun)管位置(zhi)以便(bian)下次拿(na)取。

三(san)、培養(yang)註意(yi)事項 

1. 收(shou)到細胞後首(shou)先(xian)觀察細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好，培養(yang)液是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及(ji)時和我們(men)聯系。

2. 仔細閱(yue)讀細胞說明書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細胞(bao)形態、所(suo)用培養(yang)基、血清(qing)比例(li)、所(suo)需 細胞因子等(deng)，確(que)保(bao)細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由於培養(yang)條(tiao)件(jian)不壹致而導致(zhi)細胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細胞(bao)狀態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分(fen)細胞由於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀察好細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新的培養(yang)瓶或培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培養(yang)基用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到細胞後前 3 天各(ge)拍(pai)幾張細胞照片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態，便於和我司技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於運輸(shu)的(de)原(yuan)因，個別(bie)敏(min)感細胞(bao)會出現不穩定的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我們(men)聯系，告知細胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基 (灌(guan)液培養(yang)基) 不能(neng)再用來(lai)培養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照說明書(shu)細胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的(de)培養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在出售的產品：

小(xiao)鼠(shu)胎(tai)兒(er)表(biao)皮角(jiao)質形成層細(xi)胞(bao)培養(yang)基 100mL 大(da)鼠(shu)熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白60(Hsp-60)ELISA試(shi)劑盒 PAP(Mouse plasmin-antiplasmin complex)  小(xiao)鼠(shu)纖溶(rong)酶抗(kang)纖(xian)溶(rong)酶復(fu)合(he)物 96T

nonstructural protein 1： A型(xing)流(liu)感病毒(du)-NS1抗(kang)體(ti) BRL 3A細(xi)胞(bao)，大(da)鼠(shu)肝(gan)細胞(bao) 人轉移胰(yi)腺癌(ai)細胞(bao),AsPc-1細胞(bao) CM-R109大(da)鼠(shu)腦成纖(xian)維細胞(bao)培養(yang)基100mL

C6 Others Human 人 C6 / compleme compone 6 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 大(da)鼠(shu)熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白60(Hsp-60)ELISA 試(shi)劑盒 SDF-1a/CXCL12  大(da)鼠(shu)基質細(xi)胞衍生(sheng)因子1a 96T

NET1： 去(qu)甲轉運蛋白/神(shen)經(jing)遞質去(qu)甲轉運體抗(kang)體(ti) 人肺微(wei)血管內皮細(xi)胞(bao)HPMEC

Hela-Luc (穩(wen)定株)人細胞(bao) Hela-Luc (stable sain) in human cervical cancer cells DMEM+10% FBS+200ug/ml Zeocin 大(da)鼠(shu)熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白47(HSP47)ELISA試(shi)劑盒 GMP-140  大(da)鼠(shu)血漿(jiang)α顆(ke)粒(li)膜(mo)蛋白 96T

phospho-ITGB3(Tyr785)： 0酸(suan)化(hua)整(zheng)合(he)素β3抗(kang)體(ti) 敘(xu)利亞倉鼠(shu)腎細胞(bao);BHK-21

PA317細(xi)胞(bao)，逆轉(zhuan)錄病毒(du)包裝的NIH3T3細胞 A10(大(da)鼠(shu)主(zhu)動脈血管平滑肌(ji)細(xi)胞) 小(xiao)鼠(shu)骨髓瘤細(xi)胞;Sp2/0-Ag14 人6酮前列(lie)腺(xian)素(6-K-PG)ELISA 試(shi)劑盒 Connexin-45(CX45) 間隙(xi)連(lian)接蛋白45(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

phospho-IGF1R (Tyr980)： 0酸(suan)化(hua)1受體抗(kang)體(ti) CD48 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) CD48 / BCM1 / SLAMF2 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

人臍動脈平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞總(zong)RNAHUASMC NA 人6酮前列(lie)腺(xian)素(6-K-PG)ELISA 試(shi)劑盒 Anti-Collagen II II 型(xing)膠(jiao)原(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

phospho-IGF1R (Tyr1280)： 0酸(suan)化(hua)1受體抗(kang)體(ti) 人多發性(xing)骨(gu)髓瘤細(xi)胞;RPMI-8226 [RPMI8826]

MLE-12小(xiao)鼠(shu)肺上(shang)皮細(xi)胞(bao)SF9, 昆(kun)蟲(chong)卵(luan)巢細(xi)胞(bao) 大(da)鼠(shu)白介素10受體β(IL10Rβ)ELISA試(shi)劑盒 NSE(Human Neuron-specific enolase)  人神(shen)經(jing)特異(yi)性烯醇(chun)化(hua)酶(mei) 96T

RAGEF2： RAGEF2蛋白抗(kang)體(ti) DNASE1 Others Human 人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

COS-1 非(fei)洲綠(lv)猴(hou)SV40轉化的(de)腎(shen)細(xi)胞(bao) 大(da)鼠(shu)白介素10受體α(IL10Rα)ELISA試(shi)劑盒 CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme)  人肌酸(suan)激(ji)酶同工(gong)酶MB 96T

RAB23： G蛋白偶(ou)聯(lian)受體RAB23抗(kang)體(ti) Mv1Lu細(xi)胞(bao)，貂(diao)肺(fei)上(shang)皮細(xi)胞(bao) 人紅白(bai)細(xi)胞白血病細胞,HEL細(xi)胞(bao) 人皮膚(fu)成(cheng)纖維細胞(bao);HSAS4

NRXN3 Others Human 人 NRXN3 / Neurexin-3-beta 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 大(da)鼠(shu)白介素10(IL-10)ELISA試(shi)劑盒 PAP(Human Prostatic Acid Phosphatase)  人前列(lie)腺(xian)酸(suan)性(xing)0酸酶 96T