白介(jie)素3（IL-3）ELISA Kit

產品名稱(cheng)：白介(jie)素3(IL-3)ELISA Kit
英(ying)文名稱(cheng)：Human interleukin 3 (IL-3) ELISA Kit
規(gui)格 ：48T/96T
主(zhu)要成分：酶標(biao)板,試(shi)劑(ji),標(biao)準品(pin)等(deng)。
試(shi)劑(ji)盒種(zhong)屬：馬(ma)鈴薯、鹿、羊(yang)、雞(ji)、鴨、魚、人(ren)、大(da)鼠、小(xiao)鼠、豚(tun)鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬(zhu)、犬、猴(hou)、馬、牛等(deng)動植物(wu)。
檢測目的：用(yong)於(yu)測定血(xue)清，血(xue)漿(jiang)及相關(guan)液體等(deng)樣本(ben)。例如適合檢測包(bao)括(kuo)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、尿(niao)液、胸腹水(shui)、灌洗(xi)液、腦脊(ji)液、細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清、組(zu)織勻(yun)漿(jiang)等(deng)標(biao)本..

試(shi)劑(ji)盒組(zu)成及試(shi)劑(ji)配制(zhi) :
1. 酶聯板（Assay plate ）：壹(yi)塊(kuai)（96孔）。 
2. 標(biao)準品(pin)（Standard）：2瓶（凍(dong)幹品(pin)）。
3. 樣(yang)品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 標(biao)記(ji)抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣(la)根(gen)過(guo)氧化物(wu)酶標(biao)記(ji)親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標(biao)記(ji)抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣(la)根(gen)過(guo)氧化物(wu)酶標(biao)記(ji)親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底(di)物(wu)溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
9. 濃洗(xi)滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用(yong)時(shi)每(mei)瓶用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)稀釋25倍(bei)。 
10. 終(zhong)止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
標(biao)本的(de)采(cai)集(ji)與(yu)保存：
1、血(xue)清：將(jiang)收集(ji)於(yu)血(xue)清分離管(guan)的(de)全(quan)血(xue)標(biao)本在(zai)室溫(wen)放置(zhi)2 小(xiao)時(shi)或4oC 過(guo)夜(ye)，然(ran)後(hou)1000×g 離(li)心20 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即
可，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於-20oC 或-80oC 保(bao)存，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。
2、血(xue)漿(jiang)：用(yong)EDTA 或肝素作(zuo)為抗凝(ning)劑(ji)采(cai)集(ji)標(biao)本，並(bing)將(jiang)標(biao)本在(zai)采(cai)集(ji)後(hou)的30 分鐘(zhong)內(nei)於(yu)2-8oC 1000×g 離(li)心15 分鐘(zhong)，
取(qu)上(shang)清即可檢測，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於-20oC 或-80oC 保(bao)存，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。
3、組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：
1） 取(qu)適量(liang)組織塊(kuai)，於預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗(xi)去除血(xue)液，稱重後備用(yong)（組(zu)織塊(kuai)較大(da)需先剪碎後(hou)再勻(yun)漿(jiang)）；
2） 可同(tong)時(shi)選(xuan)用(yong)多(duo)種勻(yun)漿(jiang)方(fang)法(fa)達(da)到(dao)較(jiao)好(hao)的破(po)碎(sui)效果(guo)：首(shou)先(xian)將(jiang)組(zu)織塊(kuai)移(yi)入(ru)玻璃勻(yun)漿(jiang)器，加入(ru)5-10mL 預冷PBS 進(jin)行(xing)充(chong)分研(yan)磨，該(gai)過(guo)程(cheng)需在冰上(shang)進(jin)行(xing)（有(you)條(tiao)件(jian)實驗室可選(xuan)用(yong)機(ji)器勻(yun)漿(jiang)）；得(de)到(dao)的(de)勻(yun)漿(jiang)液可再利用(yong)超聲破(po)碎(sui)或反(fan)復(fu)凍(dong)融進(jin)壹(yi)步(bu)處理（超聲破(po)碎(sui)過(guo)程(cheng)中註意(yi)冰浴降(jiang)溫(wen)；反(fan)復(fu)凍(dong)融法(fa)可重復(fu)2 次）。
3） 將(jiang)制(zhi)備好(hao)的勻(yun)漿(jiang)液於5000×g 離(li)心5 分鐘(zhong)，留(liu)取上(shang)清即可檢測。
4、其(qi)它生(sheng)物(wu)標(biao)本：請(qing)1000×g 離(li)心20 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即可檢測，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於-20oC 或-80oC 保(bao)存，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。
操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：
1. 標(biao)準品(pin)的稀釋：本(ben)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供原倍(bei)標(biao)準品(pin)壹(yi)支，用(yong)戶(hu)可按照(zhao)下列(lie)圖(tu)表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管中進行(xing)稀釋。
2. 加(jia)樣：分別設空(kong)白孔（空(kong)白對(dui)照(zhao)孔不(bu)加樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其余各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標(biao)準孔、待測樣品(pin)孔。在酶標(biao)包(bao)被(bei)板上(shang)標(biao)準品(pin)準確(que)加(jia)樣(yang) 50μl，待測樣品(pin)孔中先加樣品(pin)稀釋液 40μl，然(ran)後(hou)再加待測樣品(pin) 10μl（樣(yang)品終稀釋度(du)為 5 倍(bei)）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加於酶標(biao)板孔底部，盡量(liang)不(bu)觸及孔壁，輕(qing)輕晃(huang)動混(hun)勻(yun)。
3. 溫(wen)育：用(yong)封板膜(mo)封板後(hou)置(zhi) 37℃溫(wen)育 30 分鐘(zhong)。
4. 配(pei)液：將(jiang) 30 倍(bei)濃縮洗(xi)滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui) 30 倍(bei)稀釋後(hou)備用(yong)
5. 洗(xi)滌：小(xiao)心揭(jie)掉封板膜(mo)，棄(qi)去液體，甩(shuai)幹，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi) 30 秒(miao)後棄去，如此重復(fu) 5 次，拍幹。
6. 加(jia)酶：每(mei)孔加入(ru)酶標(biao)試(shi)劑(ji) 50μl，空(kong)白孔除外(wai)。
7. 溫(wen)育：操(cao)作(zuo)同(tong) 3。
8. 洗(xi)滌：操(cao)作(zuo)同(tong) 5。
9. 顯色：每(mei)孔先加(jia)入(ru)顯色劑(ji) A50μl，再加入(ru)顯色劑(ji) B50μl，輕(qing)輕震蕩混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色15 分鐘(zhong).
10. 終(zhong)止：每(mei)孔加終(zhong)止(zhi)液 50μl，終(zhong)止反(fan)應（此時(shi)藍(lan)色(se)立(li)轉(zhuan)黃色）。
11. 測定：以(yi)空(kong)白空(kong)調零(ling)，450nm 波(bo)長依序(xu)測量(liang)各(ge)孔的吸光(guang)度（OD 值(zhi)）。 測定應在加(jia)終止液後 15 分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行(xing)。
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