芡實染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書

儲存條(tiao)件：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理及保存方(fang)法
1. 血(xue)清：使(shi)用不含(han)熱原(yuan)和內(nei)毒(du)素的試管，操作過程(cheng)中避免任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅細(xi)胞(bao)迅速(su)小心地(di)分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或(huo)肝(gan)素抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分(fen)鐘(zhong)取上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)去除顆粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。
4. 組織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織加(jia)入適(shi)量生理鹽水(shui)搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)取上清(qing)。
5. 保存：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集後不及時(shi)檢測(ce)，請(qing)按(an)壹次(ci)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存於(yu)-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並確保樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。

特點：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用(yong)戶只需(xu)要(yao)提供(gong)病(bing)毒樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保守序列設(she)計的專壹性(xing)引(yin)物，與相關病(bing)毒無(wu)交叉反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以達(da)到(dao)幾(ji)百(bai)拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹管式熒光定量(liang) PCR 檢(jian)測(ce)，避免後續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒(he)足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體系的熒光定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研，不能(neng)用於(yu)臨床診斷(duan)。

使(shi)用方(fang)法：
壹(yi)、樣品(pin)采集：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集與預(yu)培(pei)養按(an)照樣(yang)品(pin)的采(cai)集與預(yu)培(pei)養按(an)照《食(shi)品(pin)衛生微生物學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿(gan)菌(jun)檢驗要(yao)求進行(xing)。
2、血液(ye)樣品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射(she)器(qi)抽取受(shou)檢者靜脈(mai)血2mL，註入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸鈉)抗(kang)凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：取糞便(bian)置(zhi)於(yu)滅菌的(de)收(shou)集管中送檢(jian)。
4、病(bing)竈部位(wei)樣(yang)品(pin)：取發病(bing)部位(wei)新(xin)鮮滲(shen)出物(wu)、粘液膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋度為例(li)）
1. 註意(yi)：由(you)於(yu)標準品(pin)濃度非(fei)常(chang)高，因此下(xia)列稀(xi)釋操(cao)作壹定要(yao)在(zai)獨立的(de)區域(yu)進行(xing)，千萬(wan)不能(neng)汙(wu)染(ran)樣(yang)品(pin)或本(ben)試劑盒(he)的(de)其(qi)他(ta)成(cheng)分(fen)）。為增加(jia)產品(pin)穩(wen)定性(xing)和避免擴散傳染(ran)性(xing)病(bing)原(yuan)，本(ben)產品(pin)不提(ti)供(gong)活(huo)體樣品(pin)做陽(yang)性對(dui)照，只(zhi)提供(gong)可(ke)以(yi)直(zhi)接使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為陽(yang)性對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀(xi)釋液(ye)（用帶芯(xin)槍頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上步(bu)稀(xi)釋所(suo)得)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
7. 重復(fu)上面的操作直(zhi)到(dao)得到(dao) 6 個稀(xi)釋度的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述樣(yang)品(pin)建議經過增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集培養(yang)物用(yong)於(yu)檢測(ce)。 
二、DNA提取：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試劑盒(he)配(pei)備(bei)的DNA抽提(ti)液(ye)，按(an)以下(xia)說明進行(xing)DNA核酸(suan)的粗(cu)提。也(ye)可(ke)采(cai)購上海(hai)澤(ze)葉生物科(ke)技(ji)有限公司生產的(de)DNA提(ti)取試劑盒(he)(過柱法-熒光配(pei)套)或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的商業(ye)化產品(pin)，並按(an)照相應(ying)試劑盒(he)說(shuo)明(ming)進行(xing)操作(zuo)。
1、液體培養(yang)物(wu)：取液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，8000rpm離(li)心3min，盡量(liang)吸棄(qi)上(shang)清，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體培(pei)養物(wu)：挑(tiao)取單克隆菌落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便樣品(pin)：挑(tiao)取米粒(li)大(da)小(xiao)糞(fen)便(bian)於(yu)滅菌離(li)心管(guan)中，加(jia)入0.5mL生理鹽水(shui)，振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體(ti)標本(ben)：取標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上(shang)清，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註：陽(yang)性對(dui)照和(he)陰性對(dui)照為已經(jing)抽提(ti)好的核酸(無(wu)需(xu)提取)，直(zhi)接取5μL加(jia)入到(dao)反(fan)應(ying)體系中即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度較(jiao)高，建(jian)議在(zai)樣品(pin)制(zhi)備區域(yu)加(jia)入陽(yang)性對(dui)照。 
JEC, 人(ren)內膜腺癌細胞系人(ren)參二(er)醇(chun)(標準品(pin))Panaxadiol質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)

mRTEC, 小(xiao)鼠(shu)腎小管(guan)上皮(pi)細(xi)胞 小鼠胰腺癌(ai)beta細胞(bao)，Beta-TC-6細(xi)胞 EB (NBL-4)(牛(niu)胚(pei)氣管細胞)人(ren)參三(san)醇(chun)(標準品(pin))Panaxatriol質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)

人(ren)紅系(xi)白血病(bing)細胞;TF-1人(ren)參皂(zao)苷(gan)CK(標準品(pin))Compound K質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥97%，標準品(pin)

HAVCR1 Others Canine 狗(gou) KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人(ren)細胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 人(ren)參皂(zao)苷(gan)F1(標準品(pin))Ginsenoside F1質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)

小(xiao)鼠(shu)神經母細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao);Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]人(ren)參皂(zao)苷(gan)F2(標準品(pin))Ginsenoside F2質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)
RA, 大(da)鼠(shu)星形(xing)膠質(zhi)細胞(bao)L-L-Glutamic acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BR

3T3/e細(xi)胞，小鼠(shu)成纖維細(xi)胞(bao) 白介(jie)素-2轉(zhuan)染(ran)耐VP16絨(rong)癌(ai)細胞(bao),JEG-3/VP16-IL-2細胞(bao) 人(ren)腎系(xi)膜細胞RNAHRMC miRNA5 μgL-延(yan)胡索(suo)乙素L-Tetrahydropalmatine質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

恒河(he)猴(hou)肺細(xi)胞;RM-L1-d4Nicorandil-d4質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

EPHB4 Others Human 人(ren) EphB4 / HTK 人(ren)細胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) N-氧化(hua)物(wu)Nicorandil N-Oxide質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

人(ren)EB病(bing)毒轉(zhuan)化的(de)B細胞;CGM16-羥(qiang)基6-Hydroxy Nicorandil質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)
綠色(se)熒光蛋白標記(ji)小鼠(shu)前(qian)胃(wei)癌(ai)細(xi)胞(bao);MFC-GFP釋放激素相關蛋白（1-13），人(ren)Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human質(zhi)量規(gui)格(ge)：>95%,BR

HL-7702細(xi)胞，人(ren)肝(gan)細(xi)胞正常(chang) 人(ren)幹細(xi)胞(bao)因子單克隆抗體細胞(bao)株,AMS2細胞(bao) 敘利亞倉鼠皮膚(fu)細(xi)胞;GH-S1海(hai)沙瑞林Hexarelin質(zhi)量規(gui)格(ge)：>95%,BR

LM/TK(小(xiao)鼠胸腺(xian)激酶缺陷(xian)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2組胺(an)素5Histatin 5質(zhi)量規(gui)格(ge)：>95%,BR

Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角(jiao)質(zhi)細胞(bao)生長(chang)培養基2型(即(ji)用(yong)型) 500ml高鈣血癥惡(e)性因子（1-34）酰胺(an)，人(ren)Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), amide, human質(zhi)量規(gui)格(ge)：>95%,BR

人(ren)角膜細胞HK高鈣血癥惡(e)性因子（1-34）， 人(ren)Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), human質(zhi)量規(gui)格(ge)：>95%,BR
芡實染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書腦膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(fang)(1ml)AdoMetS-腺(xian)甘基蛋酸100克BR，80%

CSNK2A1 Others Human 人(ren) CSNK2A1 / CK2A1 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲細胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 連本(ben)三(san)加(jia)醋(cu)水(shui)合物(wu) 1,2,3-Bqnzqnqtriccrboxylic ccid 269-21-7

小鼠(shu)單核巨(ju)噬細胞白血病(bing)細胞;RAW 264.7 [RAW264.7;異(yi)炳(bing)基間(jian)本(ben); 3-異(yi)炳(bing)基本(ben); 1-異(yi)炳(bing)基-3-基(ji)本(ben); 1-基(ji)-3-異炳(bing)基本(ben); 間(jian)本(ben)異炳(bing)烷; 間(jian)異炳(bing)
實驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個檢(jian)測(ce)過程(cheng)應(ying)嚴格(ge)按(an)照本(ben)說明書要(yao)求分(fen)別(bie)在(zai)試劑準備區(qu)、樣本(ben)處理區和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進行(xing)操作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材應(ying)獨立使(shi)用，不能(neng)混(hun)用(yong)；實驗用吸(xi)頭(tou)采用(yong)帶(dai)濾芯(xin)吸頭(tou)；樣本(ben)處理區應(ying)配有生物安全櫃(gui)，樣本(ben)處理在(zai)生物安全櫃(gui)中進行(xing)操作(zuo)；三(san)個區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有紫外線殺菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避免RNA降(jiang)解，樣本(ben)處理過程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下(xia)操作，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗後(hou)立即(ji)上(shang)機檢測(ce)；樣本(ben)處理過程(cheng)中使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗材(cai)應(ying)經過無(wu)核(he)酶處理。

3. 每次(ci)實驗(yan)應(ying)該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試劑盒(he)所(suo)有試劑在(zai)使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化混(hun)勻(yun)，並應(ying)瞬時(shi)離(li)心。
5. 試劑盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和陽(yang)性對(dui)照在(zai)壹次(ci)使(shi)用前(qian)應(ying)全部轉(zhuan)移(yi)至標本(ben)準備區(qu)，並單獨存放。
6. 為防(fang)止(zhi)熒光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免裸(luo)手(shou)直(zhi)接接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管，並應(ying)避免在(zai)PCR反(fan)應(ying)管上進行(xing)任何(he)標記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增相關參數應(ying)按(an)照本(ben)說明書相關要(yao)求進行(xing)設置(zhi)；不同(tong)批號(hao)試劑不能(neng)混(hun)用(yong)。
8. ABI系列熒光定量(liang)PCR儀(yi)參數設(she)置中不選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅基(ji)因選擇None。
9. 實驗(yan)過程(cheng)中產品(pin)的廢(fei)棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進行(xing)無(wu)害(hai)化處理後方(fang)可丟(diu)棄(qi)。