芡實(shi)探針法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒(he)*

實驗(yan)流程(cheng)：
1. 整個檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴(yan)格按照本說明書(shu)要(yao)求(qiu)分別(bie)在(zai)試劑準備區(qu)、樣(yang)本處(chu)理(li)區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進行(xing)操(cao)作，各區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀(yi)器(qi) 、耗材(cai)應獨(du)立使用，不(bu)能混用；實驗(yan)用吸頭采(cai)用帶濾(lv)芯(xin)吸頭；樣本處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣本處(chu)理(li)在(zai)生物(wu)安全(quan)櫃(gui)中(zhong)進行(xing)操(cao)作；三(san)個區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫外(wai)線殺(sha)菌裝置(zhi)。
2. 為避免(mian)RNA降解，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條件下操(cao)作，且完(wan)成實驗(yan)後(hou)立即上機(ji)檢(jian)測(ce)；樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)器具耗材(cai)應經(jing)過(guo)無核酶(mei)處(chu)理(li)。
3. 每次實驗(yan)應該(gai)設置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試劑盒(he)所有(you)試劑在(zai)使(shi)用前應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下充(chong)分融(rong)化(hua)混勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬(shun)時(shi)離心(xin)。
5. 試劑盒(he)內(nei)所配(pei)陰(yin)性和陽(yang)性(xing)對照在壹次(ci)使用(yong)前應(ying)全(quan)部(bu)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標本準備區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為防止(zhi)熒光(guang)幹(gan)擾，應避免(mian)裸(luo)手(shou)直(zhi)接接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上進行(xing)任(ren)何標記(ji)。
7. 儀器 擴增相關參數(shu)應(ying)按照本說明書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求(qiu)進行(xing)設置；不(bu)同批(pi)號試劑不(bu)能混用。
8. ABI系列(lie)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參數設置中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇None。
9. 實驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)產(chan)品(pin)的廢(fei)棄物(wu)應(ying)該進行(xing)無害(hai)化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可丟(diu)棄。

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用(yong)戶只需(xu)要提供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據地(di)黃(huang)保守(shou)序(xu)列(lie)設計的(de)專(zhuan)壹性(xing)引(yin)物(wu)，與(yu)相關(guan)病(bing)毒(du)無交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈敏度(du)可以達(da)到幾百拷貝(bei)/反應。
4. 壹管(guan)式熒光(guang)定量(liang) PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染。
5. 本試劑盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反應體(ti)系(xi)的熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產品(pin)只適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研，不(bu)能用於臨(lin)床(chuang)診斷。
使用方(fang)法(fa)：
壹、樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按照樣品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按照《食品(pin)衛生微(wei)生物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要求(qiu)進行(xing)。
2、血(xue)液樣品(pin)：用無菌註射(she)器抽(chou)取受檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉(na))抗凝(ning)管(guan)，立即混勻。
3、糞便樣(yang)品(pin)：取糞便置(zhi)於(yu)滅(mie)菌的收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈部(bu)位(wei)樣品(pin)：取發(fa)病(bing)部(bu)位(wei)新(xin)鮮(xian)滲(shen)出物(wu)、粘液膿血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對照（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由(you)於標準品(pin)濃度(du)非(fei)常高，因(yin)此(ci)下列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作壹定(ding)要在(zai)獨(du)立的區(qu)域(yu)進行(xing)，千(qian)萬不(bu)能汙染樣品(pin)或本試劑盒(he)的(de)其他(ta)成分）。為(wei)增加產品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和避免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染性病(bing)原，本產品(pin)不(bu)提供(gong)活(huo)體(ti)樣品(pin)做陽(yang)性(xing)對照，只提供(gong)可以直(zhi)接使用(yong)的(de) DNA段(duan)作(zuo)為陽(yang)性(xing)對照。
2. 標記(ji) 6 個離心(xin)管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍頭分別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液（用帶(dai)芯(xin)槍頭，下同）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰上待(dai)用。
5. 換槍頭，在 6 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照(上步稀(xi)釋(shi)所得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰上待(dai)用。
6. 換槍頭，在 5 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照到 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰上待(dai)用。
7. 重復上面的操(cao)作直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰上待(dai)用。
註：上述(shu)樣品(pin)建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增菌後(hou)，收(shou)集(ji)培(pei)養(yang)物(wu)用(yong)於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提取：
可采(cai)用PCR試劑盒(he)配(pei)備的DNA抽提液，按以下說明進行(xing)DNA核酸的粗(cu)提。也(ye)可采(cai)購(gou)上海澤(ze)葉生物(wu)科(ke)技(ji)有(you)限公司(si)生產(chan)的(de)DNA提取試劑盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒光配(pei)套(tao))或其他(ta)合適(shi)的(de)商業化產(chan)品(pin)，並(bing)按照相應試劑盒(he)說明進行(xing)操(cao)作。
1、液體培(pei)養(yang)物(wu)：取(qu)液體培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量(liang)吸棄上清，加入50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反應。
2、固體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑(tiao)取(qu)單克(ke)隆菌落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反應。
3、糞便樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒大小(xiao)糞便於(yu)滅(mie)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽(yan)水，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清，沈(chen)澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反應。
4、其他(ta)液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清，沈(chen)澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反應。
註：陽(yang)性(xing)對照和陰性對(dui)照為已經抽(chou)提好(hao)的(de)核酸(無需(xu)提取)，直(zhi)接取5μL加(jia)入到反應(ying)體(ti)系中(zhong)即(ji)可。由(you)於陽(yang)性(xing)對照濃度(du)較(jiao)高，建(jian)議(yi)在(zai)樣品(pin)制(zhi)備區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對照。 
KM3, 人(ren)多(duo)發(fa)性骨髓瘤(liu)細(xi)胞(bao) 肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(bao),HCC-9204細(xi)胞(bao) NCI-H292(肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao)(結轉(zhuan)移(yi)))血(xue)管(guan)緊張素 片段(duan)1-7醋(cu)酸鹽水合物(wu)Angiotensin Fragment 1-7 acetate salt hydrate質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進口(kou)

小(xiao)鼠(shu)垂體瘤細(xi)胞(bao);GT1-1[Val5]-血(xue)管(guan)緊張素 II 醋(cu)酸鹽水合物(wu)[Val5]-Angiotensin II acetate salt hydrate 質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進口(kou)

CD2 Others Human 人(ren) CD2 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對照) 酸Metoprolol Acid質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進口(kou)

興(xing)國(guo)鯉尾(wei)鰭(qi)細(xi)胞(bao);XGL(R)-(+)-(R)-(+)-Atenolol質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進口(kou)

HA Others H7N9 甲(jia)型(xing)流感(gan) H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血(xue)凝素HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對照) S-(-)-S-(-)-Atenolol質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進口(kou)
LncaP, 人(ren)前列(lie)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao) 腹(fu)水瘤,SRS-82細(xi)胞(bao) TOV-112D(人(ren)上皮(pi)性(xing)卵巢(chao)癌(ai)細(xi)胞(bao))馬來酸阿(e)森(sen)那(na)平(ping)Asenapine Maleate質量(liang)規(gui)格(ge)：>99%

轉(zhuan)PYTL基因(yin)小(xiao)鼠(shu)支持(chi)細(xi)胞(bao);15P-1ZSTK474ZSTK474；ZSTK-474質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%，I型PI3K亞(ya)型(xing)抑(yi)制(zhi)劑

FCGR1 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) CD64 / FCGR1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對照) 木犀草素-7-O-葡(pu)萄糖(tang)醛酸苷(gan)Luteolin 7-O-glucuronide質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥95%，標準品(pin)

人(ren)多(duo)發(fa)性骨髓瘤(liu)細(xi)胞(bao);RPMI-8226 [RPMI8826]STA-9090;STA9090Ganetespib質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,HSP90抑(yi)制(zhi)劑

PDE3A Others Human 人(ren) PDE3A 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對照) 赤芝(zhi)酸DLucidenic acid D質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥97%
人(ren)毛(mao)細(xi)胞(bao)裂(lie)解物(wu)HHDPCL磺(huang)芐(bian)西(xi)林（標準品(pin)）質量(liang)規(gui)格(ge)：效(xiao)價測定SULBENICILLIN

EB-3[EB3]細(xi)胞(bao)，人(ren)樣(yang)Butt瘤細(xi)胞(bao) 人(ren)腎(shen)透明細(xi)胞(bao)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao),786-O細(xi)胞(bao) 前脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)乙酰(xian)（標準品(pin)）質量(liang)規(gui)格(ge)：效(xiao)價測定Acetylspiramycin

兔間(jian)變表(biao)皮(pi)鱗(lin)癌(ai)瘤(liu)株;VX2三(san)氯氨(an)鉑(bo)酸鉀質量(liang)規(gui)格(ge)：>95%Potassium trichloroammineplatinate(II)

SPI2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) SPI2 / HAI2 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對照) 西索(suo)米(mi)星（標準品(pin)）質量(liang)規(gui)格(ge)：效(xiao)價測定Sisomicin

CL-0111HL-7702(人(ren)肝(gan)正(zheng)常(chang)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2脂酰(xian)-β-D-葡萄糖(tang)苷(gan)酸質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進口(kou)Ibuprofen Acyl-β-D-glucuronide
芡實(shi)探針法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒(he)*BT474細(xi)胞(bao)，導(dao)管(guan)瘤細(xi)胞(bao) 人(ren)絨(rong)毛(mao)膜癌(ai),JEG細(xi)胞(bao) 人(ren)牙(ya)周(zhou)膜成纖維(wei)細(xi)胞(bao)RNAHPLR miRNA5 μgACRYL/BIS19:1,PREMIXEDPOWDER酰(xian)胺/甲(jia)叉(cha) 19:1粉(fen)末超(chao)級(ji)白色(se)結晶粉(fen)末RTsigma

EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化(hua)的(de)絨(rong)猴細(xi)胞(bao);B95-8β-紫羅蘭同 4-(2,6,6-Trimqthyl-1-cyclohqxqnyl)-3-butqn-2-onq 79-77-6

EFNA3 Others Human 人(ren) EphrinA3 / EFNA3 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對照) 40%度(du)尿(niao)素水1米

人(ren)侵襲(xi)性
儲存(cun)條(tiao)件：
14℃或－20℃樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存方法(fa)
1. 血(xue)清：使用不(bu)含熱原和內毒(du)素(su)的(de)試管(guan)，操(cao)作過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集(ji)血(xue)液後(hou)，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)將血(xue)清和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心(xin)地分離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或肝(gan)素(su)抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘(zhong)取上清。
3. 細(xi)胞(bao)上清液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒和聚合物(wu)。
4. 組織勻漿：將組織加入適(shi)量(liang)生理(li)鹽(yan)水搗碎。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)取上清。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本收集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹次(ci)用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免(mian)反(fan)復凍(dong)融，在(zai)室溫(wen)下解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。