銀(yin)柴(chai)胡(hu)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒說明(ming)書

特(te)點(dian)：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需(xu)要(yao)提(ti)供病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃保(bao)守(shou)序(xu)列(lie)設計(ji)的專壹性(xing)引(yin)物，與(yu)相關(guan)病毒(du)無(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以(yi)達(da)到(dao)幾百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹管式熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢測(ce)，避(bi)免後續(xu)汙染。
5. 本試劑(ji)盒足夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系的(de)熒光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只適用(yong)於科研(yan)，不(bu)能用(yong)於臨床診(zhen)斷(duan)。

使(shi)用(yong)方(fang)法：
壹、樣品(pin)采(cai)集：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集與預培養按照樣品(pin)的采(cai)集與預培養按照《食品(pin)衛生(sheng)微生(sheng)物學檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要求進(jin)行。
2、血(xue)液(ye)樣品(pin)：用(yong)無(wu)菌註(zhu)射(she)器抽取(qu)受檢(jian)者靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入無(wu)菌EDTA2Na(或檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗凝管，立(li)即混(hun)勻。
3、糞便樣品(pin)：取(qu)糞便置(zhi)於滅(mie)菌的(de)收(shou)集管中(zhong)送檢(jian)。
4、病竈(zao)部位(wei)樣品(pin)：取(qu)發(fa)病部位(wei)新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿血(xue)送(song)檢。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例）
1. 註意(yi)：由(you)於(yu)標準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常(chang)高，因(yin)此下列(lie)稀(xi)釋操(cao)作(zuo)壹定(ding)要在(zai)獨(du)立(li)的(de)區(qu)域(yu)進(jin)行，千(qian)萬不(bu)能汙(wu)染樣品(pin)或本試劑(ji)盒的其(qi)他成(cheng)分(fen)）。為(wei)增加產(chan)品(pin)穩(wen)定(ding)性和(he)避(bi)免擴散(san)傳染性病原，本產(chan)品(pin)不(bu)提(ti)供活體樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，只提(ti)供可(ke)以(yi)直接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標記 6 個離心(xin)管，分(fen)別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別加入 45 μL 熒光(guang) PCR 模板稀(xi)釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上待用(yong)。
5. 換槍(qiang)頭，在(zai) 6 號管中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)(上步(bu)稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上待用(yong)。
6. 換槍(qiang)頭，在(zai) 5 號管中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號管中(zhong)，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上待用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面的(de)操作(zuo)直到(dao)得到(dao) 6 個稀釋(shi)度(du)的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上待用(yong)。
註：上述(shu)樣品(pin)建議經(jing)過(guo)增菌後(hou)，收(shou)集培養物用(yong)於檢測。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試劑(ji)盒配(pei)備的(de)DNA抽提(ti)液(ye)，按以(yi)下說明(ming)進(jin)行DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提(ti)。也(ye)可(ke)采(cai)購(gou)上海(hai)澤葉生(sheng)物科技有(you)限公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提(ti)取(qu)試劑(ji)盒(過柱法-熒光(guang)配(pei)套(tao))或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)商業(ye)化(hua)產(chan)品(pin)，並(bing)按照(zhao)相(xiang)應試劑(ji)盒說明(ming)進(jin)行操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體培養物：取(qu)液(ye)體培養物100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌離心(xin)管中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量吸棄上清(qing)，加入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培養物：挑(tiao)取(qu)單(dan)克(ke)隆菌落與(yu)50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞便樣品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒大(da)小糞便於(yu)滅(mie)菌離心(xin)管中(zhong)，加入0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分(fen)鐘，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其他(ta)液(ye)體標(biao)本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註：陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照為(wei)已(yi)經(jing)抽提(ti)好的(de)核(he)酸(suan)(無(wu)需(xu)提(ti)取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入到(dao)反(fan)應體(ti)系中(zhong)即可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)濃(nong)度(du)較高，建議在(zai)樣品(pin)制(zhi)備區(qu)域(yu)加入陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。 
實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個檢測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴格按(an)照本說(shuo)明(ming)書要(yao)求(qiu)分(fen)別在(zai)試劑(ji)準備區(qu)、樣本處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴增區(qu)進(jin)行操(cao)作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器 、耗(hao)材(cai)應獨(du)立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能混(hun)用(yong)；實驗用(yong)吸頭采(cai)用(yong)帶(dai)濾芯(xin)吸頭(tou)；樣本處(chu)理區(qu)應配(pei)有(you)生(sheng)物安全(quan)櫃(gui)，樣本處(chu)理在(zai)生(sheng)物安全(quan)櫃(gui)中(zhong)進(jin)行操(cao)作(zuo)；三個區應該(gai)配(pei)有(you)紫外(wai)線殺(sha)菌裝置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降解(jie)，樣本處(chu)理過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條件下操作(zuo)，且完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後立(li)即上機檢(jian)測；樣本處(chu)理過(guo)程(cheng)中使(shi)用(yong)的器具耗(hao)材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理。
3. 每次(ci)實(shi)驗(yan)應該(gai)設置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒所(suo)有(you)試劑(ji)在使(shi)用(yong)前應該(gai)在常溫下充(chong)分(fen)融化(hua)混(hun)勻，並(bing)應瞬(shun)時(shi)離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒內所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)在壹次(ci)使(shi)用(yong)前應全(quan)部轉移(yi)至標(biao)本準(zhun)備區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光(guang)幹擾(rao)，應避(bi)免裸(luo)手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管，並(bing)應避(bi)免在PCR反(fan)應管上進(jin)行任(ren)何(he)標記(ji)。
7. 儀器 擴增(zeng)相關參(can)數應按(an)照本說(shuo)明(ming)書相(xiang)關(guan)要(yao)求進(jin)行設置(zhi)；不(bu)同(tong)批號試劑(ji)不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系列(lie)熒光(guang)定(ding)量PCR儀參數設置(zhi)中不(bu)選ROX校正(zheng)，淬滅(mie)基因(yin)選擇(ze)None。
9. 實驗過程(cheng)中產(chan)品(pin)的廢(fei)棄物(wu)應該(gai)進(jin)行無(wu)害(hai)化處(chu)理後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄。
儲存(cun)條件：
14℃或－20℃樣品(pin)收集、處(chu)理及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免任(ren)何(he)細(xi)胞刺(ci)激，收集血液(ye)後，3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘將血清(qing)和(he)紅細(xi)胞迅(xun)速小心地(di)分(fen)離。
2. 血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽或肝(gan)素抗(kang)凝。3000 轉離心(xin)30 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
3. 細(xi)胞上清(qing)液(ye)：3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織勻漿：將組織加入適量生(sheng)理鹽水(shui)搗碎。3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣本收(shou)集後不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測，請按壹次(ci)用(yong)量分(fen)裝，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。
HA Others H1N1 甲(jia)型流感(gan) H1N1 (A/New York/18/2009) HA 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 麗春紅SPonceau S質(zhi)量規格：BS

IEC-6 大(da)鼠小腸引(yin)窩上皮細(xi)胞環(huan)丙貝特(te)Ciprofibrate質(zhi)量規格：>98%,BR

CM-H115人(ren)腦動脈(mai)血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞*培養基100mL曙(shu)紅Y(水(shui)溶)Eosin Y water solution質(zhi)量規格：BS

U266B1 [U266], 人(ren)多發(fa)性(xing)骨(gu)髓(sui)瘤細(xi)胞偶氮(dan)胭脂(zhi)紅BAzocarmine B質(zhi)量規格：IND

人(ren)細(xi)胞;Hela 人(ren)晶狀(zhuang)體(ti)上皮細(xi)胞*培養基 100mL偶氮(dan)胭脂(zhi)紅GAzocarmine G質(zhi)量規格：BS
IL6ST Others Cymolgus 食(shi)蟹(xie)猴 IL6ST / gp130 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 二甲(jia)基(ji)碸(feng)(核(he)磁共振(zhen)定(ding)量標準品(pin))質(zhi)量規格：核(he)磁共振(zhen)定(ding)量標準品(pin)Dimethyl sulfone

人(ren)類成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞系;CNLMG-B5538SKIN1,3-(標準(zhun)品(pin))質(zhi)量規格：分(fen)析標準品(pin)1,3-Propanediol

F2-2細(xi)胞，5-8轉基(ji)因(yin)鼻咽癌細(xi)胞系 小鼠色(se)素瘤細(xi)胞,B16BL6細(xi)胞 CM-H047人(ren)肝(gan)竇(dou)內(nei)皮細(xi)胞*培養基100mL溴夫定(ding)質(zhi)量規格：度≥99.0%，含量≥98.5%Brivudine

NRK-52E(大(da)鼠腎小管導(dao)管上皮細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2溴夫定(ding)(標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量規格：HPLC≥98%,標準(zhun)品(pin)Brivudine

Promocell C-26502 Follicle Dermal Papilla CellGrowth Medium KIT, 細(xi)胞生(sheng)長培養基套裝 500ml卡(ka)巴他(ta)賽(sai)質(zhi)量規格：≥99%Cabazitaxel
FKBP14 Others Human 人(ren) FKBP14 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) CAPSCAPS高級白(bai)色(se)粉(fen)末(mo)RTsigma

尿(niao)道(dao)上皮細(xi)胞生(sheng)長添(tian)加物UCGS磺(huang)隆 Chlorsulfuron 64902-72-3 100MG 通用(yong)試劑(ji)

HEC-1-A細(xi)胞，人(ren)內膜(mo)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞 鼠雜(za)交(jiao)骨(gu)髓(sui)瘤細(xi)胞,K6H6/B5細(xi)胞 新(xin)生(sheng)兒(er)表皮角(jiao)化(hua)細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)十(shi)六烷(wan)二醋 HqXcDqCcNqDIOIC cCID 202-24-4

FC33(人(ren)胚(pei)胎(tai)腎細(xi)胞(Asp-2基(ji)因(yin)修飾(shi))) 5×106cells/瓶(ping)×2PTA對(dui)酞(tai)酸(suan)50毫克(ke)高，99%

HWP subcutaneous Pellet 人(ren)類皮下白(bai)前(qian)脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞團(tuan)塊(kuai) > 1 mio.cells 人(ren)少(shao)突膠質(zhi)前體(ti)細(xi)胞(懸(xuan)浮生(sheng)長)總(zong)RNAHOPC-os NA3767-28-0對(dui)硝(xiao)基本-α-D-葡(pu)萄糖苷(-20℃)4-nitpxenYL-ALPHA-D-GLUCOPYRASIDE
銀柴(chai)胡PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒說明(ming)書IL13RA1 Others Human 人(ren) IL13Ra1 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) DL-蘋果(guo)酸(suan)25克(ke)

犬腎細(xi)胞;MDCK(NBL-2)5-基(ji)-2-基(ji);2-基(ji)-5-基 5-qthyl-2-Mqthylpyridinq;2-Mqthyl-5-qthylpyridinq;5-qthyl-2-picolinq;cldqhydq collidinq;cldqhydinq;5-qthyl-α-picolinq;3-qthyl-6-Mqthylpyridinq;MqP 104-90-2

OPCML Other