青蒿(hao)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定試(shi)劑(ji)盒(he)*

儲存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集、處理(li)及保(bao)存方(fang)法
1. 血(xue)清(qing)：使用不含熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管(guan)，操作過程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集血(xue)液後(hou)，3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心地(di)分離(li)。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000 轉離(li)心(xin)30 分鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液：3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘去除(chu)顆粒(li)和聚(ju)合物。
4. 組織勻漿：將(jiang)組(zu)織加入(ru)適(shi)量生理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎。3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存：如(ru)果樣本(ben)收(shou)集後(hou)不及時(shi)檢(jian)測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次用量(liang)分裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫下(xia)解(jie)凍並(bing)確保(bao)樣品(pin)均(jun)勻地(di)充(chong)分解(jie)凍。

特點：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只(zhi)需要提供(gong)病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃(huang)保(bao)守(shou)序列設計的專壹(yi)性(xing)引物，與相(xiang)關病(bing)毒(du)無(wu)交叉(cha)反應。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達(da)到(dao)幾(ji)百(bai)拷貝/反應。
4. 壹(yi)管(guan)式熒(ying)光定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避免後(hou)續汙(wu)染(ran)。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反應體系的(de)熒(ying)光定量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適(shi)用於科(ke)研(yan)，不能用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)。

使用方(fang)法：
壹(yi)、樣品(pin)采(cai)集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采集(ji)與預培(pei)養(yang)按(an)照樣品(pin)的(de)采集(ji)與預培(pei)養(yang)按(an)照《食(shi)品(pin)衛(wei)生微(wei)生物學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿菌檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣品(pin)：用無(wu)菌註(zhu)射器抽取受(shou)檢(jian)者靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉)抗(kang)凝管(guan)，立即(ji)混勻。
3、糞便樣品(pin)：取糞(fen)便置於滅菌(jun)的收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部位(wei)樣品(pin)：取發病(bing)部位(wei)新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性(xing)對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為(wei)例）
1. 註意(yi)：由於標(biao)準品(pin)濃(nong)度非(fei)常高，因此(ci)下列(lie)稀釋(shi)操(cao)作壹(yi)定要在(zai)獨(du)立的區(qu)域進(jin)行(xing)，千(qian)萬不能汙染(ran)樣品(pin)或(huo)本試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其他成分）。為增(zeng)加(jia)產(chan)品(pin)穩定性(xing)和避免擴(kuo)散傳染(ran)性(xing)病原，本產(chan)品(pin)不提供(gong)活(huo)體樣品(pin)做(zuo)陽性(xing)對照，只(zhi)提供(gong)可以(yi)直接(jie)使(shi)用的(de) DNA段作為(wei)陽(yang)性(xing)對照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍頭分(fen)別加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍頭，下(xia)同）。
4. 在 7 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
5. 換槍頭，在(zai) 6 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照(上步(bu)稀釋(shi)所得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
6. 換槍頭，在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照到(dao) 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
7. 重復(fu)上面(mian)的操(cao)作直(zhi)到(dao)得到 6 個稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)陽性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
註：上(shang)述樣品(pin)建議經(jing)過增菌後(hou)，收(shou)集培(pei)養(yang)物用於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提取：
可采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的DNA抽提(ti)液，按(an)以(yi)下說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核酸(suan)的粗提。也(ye)可采(cai)購上海(hai)澤葉生物科(ke)技(ji)有限(xian)公司(si)生產的(de)DNA提取試(shi)劑(ji)盒(he)(過柱法-熒(ying)光配(pei)套)或其(qi)他合(he)適(shi)的商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)操作。
1、液體培(pei)養(yang)物：取液(ye)體培(pei)養(yang)物100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
2、固(gu)體培(pei)養(yang)物：挑(tiao)取單(dan)克隆(long)菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
3、糞便樣品(pin)：挑(tiao)取米粒大小糞便於滅菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
4、其他(ta)液體標本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
註：陽(yang)性(xing)對照和(he)陰性(xing)對照為(wei)已(yi)經抽(chou)提好(hao)的核酸(suan)(無(wu)需提取)，直接(jie)取5μL加入(ru)到反(fan)應體系中(zhong)即(ji)可。由(you)於陽(yang)性(xing)對照濃(nong)度較(jiao)高，建議在(zai)樣品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域加(jia)入(ru)陽性(xing)對照。 
BxPC-3, 人原(yuan)位(wei)胰(yi)腺腺癌細(xi)胞(bao)株水(shui)楊酸(suan)-4-辛基苯(ben)酯(zhi)(>95.0%(GC))4-Octylphenyl Salicylate質量(liang)規格(ge)：>95.0%(GC)

人類原(yuan)巨(ju)核(he)細(xi)胞(bao)型(xing)白血(xue)病細(xi)胞(bao);UT-7 大鼠(shu)膀胱(guang)上皮(pi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基 100mL氧(yang)化(hua)偶(ou)氮(dan)苯(ben)-4,4'-二羧酸(suan)二乙(yi)酯(zhi)(>97.0%(GC))Diethyl Azoxybenzene-4,4'-dicarboxylate質量(liang)規格(ge)：>97.0%(GC)

LM-8 小鼠骨(gu)肉(rou)瘤(liu)4,4'-雙(己(ji)氧(yang)基)氧(yang)化(hua)偶(ou)氮(dan)苯(ben)(>96.0%(N))4,4'-Bis(hexyloxy)azoxybenzene質量(liang)規格(ge)：>96.0%(N)

FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照) 4,4'-二戊氧(yang)基氧(yang)化(hua)偶(ou)氮(dan)苯(ben)(>95.0%(N))4,4'-Diamyloxyazoxybenzene質量(liang)規格(ge)：>95.0%(N)

小鼠B細(xi)胞(bao)雜(za)交瘤細(xi)胞(bao);SH24,4'-二丁氧(yang)基氧(yang)化(hua)偶(ou)氮(dan)苯(ben)4,4'-Dibutoxyazoxybenzene質量(liang)規格(ge)：
小鼠細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病;L1210Nα-BOC-D-鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)壹(yi)水(shui)合物Nalpha-BOC-D-Arginine  hydrate質量(liang)規格(ge)：BR

HELF細(xi)胞(bao)，人(ren)胚肺成纖維細(xi)胞(bao) 鼠胚成骨(gu)細(xi)胞(bao),3T3-E1細(xi)胞(bao) CL-0146LTEP-a-2(人肺(fei)腺癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2Boc-Arg(Mts)-OH·CHABoc-Arg(Mts)-OH·CHA質量(liang)規格(ge)：BR

TM3(小鼠間質細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2BOC-L-Boc-Val-OH質量(liang)規格(ge)：>99%,BR

HPF-c 人類肺(fei)成纖維細(xi)胞(bao)(HPF) 500,000cells 腮(sai)腺細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)BOC-L-天(tian)冬酰(xian)胺Boc-Asn-OH質量(liang)規格(ge)：≥98.5%,BR

腦(nao)膜細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)Boc-L-Boc-Gln-OH質量(liang)規格(ge)：>98.5%,BR
TIMP2 Others Human 人 TIMP2 / TIMP-2 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照) 2‘-脫氧(yang)胞(bao)苷(gan)質量規格(ge)：>98%,BR2'-Deoxycytidine;2'-dC

CL-0167NCI-H292(人肺(fei)癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×22‘-脫氧(yang)胞(bao)苷(gan)(標準(zhun)品(pin))質量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)2'-Deoxycytidine;2'-dC

CD8B Others Human 人 CD8B / P37 / LEU2 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照) 2’-脫氧(yang)腺苷(gan)質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,BR2'-Deoxyadesine mohydrate

小鼠腸(chang)靜脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基 100mL魚精DNA質量(liang)規格(ge)：進(jin)分(fen)，Sigma74782,蛋(dan)白(bai)小於1%DNA, Fishsperm

marc-145猴胚胎(tai)腎(shen)上皮細(xi)胞(bao) Marc-145 monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM+10% FBS2,5-二苯(ben)基惡唑(>98%,BC)質量(liang)規格(ge)：>98%,BCPPO
青蒿(hao)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定試(shi)劑(ji)盒(he)*人神(shen)經(jing)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao);SH-SY5Y1,4-二羥基醌shēng huà shì jì容量(liang)：RT25克

21. 臍帶(dai)細(xi)胞(bao)系統四正(zheng)丁基化銨 Tetrabutylammonium chloride.≥97.0 1112-67-0 5G 通(tong)用試(shi)劑(ji)

CM-H104成纖維細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基100mLα-異十三烷基-ω-羌基-聚(ju)(氧(yang)-1,2-亞基) GqNcPOL(R) X-080 9043-30-2

小鼠胚胎(tai)成纖維細(xi)胞(bao);PA317 小鼠小腸(chang)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基 100mLN-Hexadecane正(zheng)十六烷高級(ji)無(wu)色液(ye)體RT
實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測(ce)過程(cheng)應嚴格按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)要求(qiu)分(fen)別在(zai)試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區(qu)、樣本(ben)處理(li)區(qu)和PCR擴增(zeng)區(qu)進行(xing)操作，各區(qu)實驗服(fu)、儀器 、耗材(cai)應獨立使用，不能混用；實驗用吸(xi)頭采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭；樣本(ben)處理(li)區(qu)應配(pei)有生物安全櫃，樣本(ben)處理(li)在生物安全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三(san)個(ge)區(qu)應該配(pei)有紫外線(xian)殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避(bi)免RNA降解(jie)，樣本(ben)處理(li)過程(cheng)應在0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作，且(qie)完(wan)成實驗後(hou)立即(ji)上機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本(ben)處理(li)過程(cheng)中(zhong)使(shi)用的(de)器具耗材(cai)應經過無(wu)核酶處理(li)。

3. 每(mei)次實驗應該設置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所有試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用前應該在常溫(wen)下(xia)充(chong)分融(rong)化混勻，並(bing)應瞬(shun)時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰性(xing)和陽性(xing)對照在(zai)壹(yi)次使用前應全部轉移至標(biao)本(ben)準(zhun)備(bei)區(qu)，並單(dan)獨存放。
6. 為防(fang)止(zhi)熒(ying)光幹(gan)擾，應避免裸手直(zhi)接接(jie)觸(chu)PCR反應管(guan)，並應避免在PCR反應管(guan)上進行(xing)任何標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴增(zeng)相(xiang)關參(can)數應按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相(xiang)關要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)設置；不同批號(hao)試(shi)劑(ji)不能混用。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光定量PCR儀參數設置中(zhong)不選(xuan)ROX校正(zheng)，淬滅基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過程(cheng)中(zhong)產(chan)品(pin)的(de)廢(fei)棄(qi)物應該進行(xing)無(wu)害化(hua)處理(li)後(hou)方可(ke)丟棄(qi)。