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動物(wu)血清:內皮(pi)細(xi)胞(bao)血清、GIBCO胎牛清(qing)、HyClone。動物(wu)血清:內皮(pi)細(xi)胞(bao)血清、GIBCO胎牛清(qing)、HyClone。
細(xi)胞(bao):*細(xi)胞(bao)、正常細(xi)胞(bao)、腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)、腫瘤(liu)耐(nai)藥(yao)細(xi)胞(bao)。細(xi)胞(bao):*細(xi)胞(bao)、正常細(xi)胞(bao)、腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)、腫瘤(liu)耐(nai)藥(yao)細(xi)胞(bao)。
註意事(shi)項(xiang)
1.試(shi)劑盒(he)從(cong)冷藏環(huan)境(jing)中(zhong)取出應(ying)在(zai)室(shi)溫平衡(heng) 15-30 分鐘(zhong)後方(fang)可使(shi)用(yong),酶標包被板開封後如(ru)未(wei)用(yong)完(wan),板條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入(ru)密(mi)封袋中(zhong)保(bao)存(cun)。
2.濃(nong)洗滌(di)液可能(neng)會有結晶(jing)析出,稀釋時可在水(shui)浴中加(jia)溫助(zhu)溶(rong),洗滌(di)時不(bu)影響結果。
3.各(ge)步(bu)加(jia)樣(yang)均(jun)應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi),並(bing)經常(chang)校(xiao)對其(qi)準確性,以避免(mian)試(shi)驗(yan)誤(wu)差。壹次加(jia)樣(yang)時間控(kong)制(zhi)在 5 分鐘(zhong)內(nei),如(ru)標本(ben)數量多(duo),使(shi)用(yong)排(pai)槍(qiang)加(jia)樣(yang)。
4.請每次(ci)測定的同(tong)時做(zuo)標準曲(qu)線,做(zuo)復(fu)孔(kong)。如(ru)標本(ben)中待(dai)測物質含量過(guo)高(樣(yang)本(ben)OD 值大於標準品孔*孔(kong)的OD 值(zhi)),請(qing)先用(yong)樣(yang)品稀釋液稀釋壹定倍(bei)數(n 倍(bei))後再(zai)測定(ding),計(ji)算時請後(hou)乘(cheng)以總稀釋倍(bei)數(×n×5)。
5.封板膜只限壹次性(xing)使(shi)用(yong),以避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。
6.底物請避光(guang)保(bao)存(cun)。
7.嚴格(ge)按(an)照(zhao)說明(ming)書的操作(zuo)進行(xing),試(shi)驗(yan)結(jie)果判(pan)定必須(xu)以酶標儀讀數(shu)為(wei)準(zhun).
8.所(suo)有樣(yang)品,洗滌(di)液和各(ge)種(zhong)廢棄物(wu)都應(ying)按(an)傳染物(wu)處(chu)理。
人單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)趨化蛋(dan)白(bai)3elisa試劑盒(he)哪(na)個牌(pai)子(zi)好操作(zuo)步(bu)驟
1.標準品的稀釋:本(ben)試劑盒(he)提供原(yuan)倍(bei)標準品壹支(zhi),用(yong)戶(hu)可按(an)照(zhao)下(xia)列(lie)圖(tu)表在小試管(guan)中(zhong)進行(xing)稀釋。
2.加(jia)樣(yang):分別(bie)設空白孔(kong)(空白對(dui)照(zhao)孔不(bu)加(jia)樣(yang)品及酶標試劑,其(qi)余各(ge)步(bu)操作(zuo)相同)、標準孔、待(dai)測樣(yang)品孔(kong)。在酶標包被板上標準品準確(que)加(jia)樣(yang) 50µl,待(dai)測樣(yang)品孔(kong)中先加(jia)樣(yang)品稀釋液 40µl,然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣(yang)品 10µl(樣(yang)品終(zhong)稀釋度為(wei) 5 倍(bei))。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加(jia)於(yu)酶標板孔(kong)底部(bu),盡量不(bu)觸及孔壁,輕(qing)輕(qing)晃動混勻。
3.溫育(yu):用(yong)封板膜封板後(hou)置(zhi) 37℃溫育(yu) 30 分(fen)鐘。
4.配液:將(jiang) 30 倍(bei)濃縮(suo)洗滌(di)液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui) 30 倍(bei)稀釋後備(bei)用(yong)
5.洗滌(di):小心(xin)揭(jie)掉(diao)封板膜,棄去(qu)液(ye)體,甩幹,每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液,靜置(zhi) 30 秒(miao)後(hou)棄去(qu),如(ru)此(ci)重復(fu) 5 次(ci),拍(pai)幹。
6.加(jia)酶:每孔(kong)加(jia)入(ru)酶標試劑 50µl,空白孔(kong)除(chu)外。
7.溫育(yu):操作(zuo)同(tong) 3。
8.洗滌(di):操作(zuo)同(tong) 5。
9.顯(xian)色(se):每孔(kong)先加(jia)入(ru)顯色(se)劑 A50µl,再(zai)加(jia)入(ru)顯色(se)劑 B50µl,輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻,37℃避光(guang)顯(xian)色(se)
15 分(fen)鐘.
10.終(zhong)止(zhi):每孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye) 50µl,終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)(此(ci)時藍色(se)立(li)轉黃色)。
11.測(ce)定(ding):以空白空調零(ling),450nm 波長依序測量各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度(du)(OD 值(zhi))。 測(ce)定應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後 15 分(fen)鐘(zhong)以內進行(xing)。
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