HiFi One-Step RT-PCR Mix(電(dian)泳)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床診斷(duan)！

商(shang)品(pin)屬性(xing)

產(chan)品(pin)介紹(shao)：

末端轉(zhuan)移酶(mei)（TdT）是壹種(zhong)不(bu)依(yi)賴於(yu)模板(ban)的(de) DNA 聚 合(he)酶，催(cui)化(hua)脫氧(yang)核(he)苷酸(suan)結合(he)到(dao) DNA 分子(zi)的 3’羥(qiang)基端。帶(dai)有 突出、凹(ao)陷或(huo)平滑(hua)末端的(de)單(dan)雙(shuang)鏈 DNA 分子(zi)均(jun)可作(zuo)為 TdT 的 底物，加(jia)尾(wei)長(chang)度可達(da) 5~300nt。本酶經(jing)電(dian)子(zi)重構架(jia)技術(shu)篩(shai)選(xuan)， 使(shi)其(qi)可(ke)以在 45°C 高(gao)溫下(xia)反應(ying)，從而避(bi)免(mian)因 DNA 二(er)級結構造 成(cheng)的(de)加(jia)尾(wei)效(xiao)率(lv)下(xia)降。 該酶廣泛(fan)用(yong)於(yu) DNA 的 3’末端添(tian)加(jia)同(tong)聚(ju)物(wu)、利用修(xiu)飾(shi)堿 基（如(ru) ddNTP，DIGdUTP）標記 DNA 3’末(mo)端、TdT 介導(dao)的 dUTP 缺(que)口(kou)末端標記技術(shu)（細(xi)胞(bao)雕(diao)亡的原(yuan)位檢測）等試(shi)驗(yan)。

活性定義：37 ℃ 60 分鐘(zhong)內(nei)，催(cui)化(hua) 1nmol dNTP 加(jia)入(ru)到(dao)多聚核苷酸(suan) 3’羥(qiang)基末端中所(suo)需(xu)的酶(mei)量定(ding)義為(wei) 1 個(ge)活性單(dan)位(wei)
熱失(shi)活：75°C 20min。
儲存：-20℃ 可保存(cun) 3 年。
註意(yi)事項(xiang)
1、適(shi)量(liang) EDTA 可使(shi) Terminal Transferase 的(de)活性喪失(shi)。
2、金(jin)屬離(li)子(zi)螯(ao)合(he)劑，較高(gao)濃度的銨根離(li)子(zi)、氯離(li)子(zi)、碘(dian)例子(zi)和磷酸(suan)根離(li)子(zi)均(jun)對 Terminal Transferase 活性具有抑制作用(yong)。
3、DNA 末端 mol 數(shu)的(de)計算，長(chang)度為 100bp 的(de) DNA：1pmol末端 DNA=0.33ng。

本試劑采用(yong)穩(wen)定(ding)高(gao)效的(de) RT-PCR 預混體(ti)系(xi)，是(shi)以(yi) RNA 為模板(ban)進(jin)行壹步(bu)法 RT-PCR 的專用(yong)試劑。其(qi)原(yuan)理(li)為用(yong)基因特(te) 異(yi)性引物(wu)進(jin)行反轉(zhuan)錄反應(ying)，獲得(de)第(di)壹鏈(lian) cDNA（不(bu)可使(shi)用(yong) Oligo（dT）或(huo) Random Rimer 合(he)成第(di)壹鏈(lian) cDNA），再(zai)使(shi) 用(yong)基因特(te)異(yi)性正向引物(wu)和(he)反向引物(wu)進(jin)行 PCR 擴(kuo)增(zeng)，在(zai)同壹 反應(ying)體(ti)系(xi)中壹步(bu)完(wan)成(cheng)從反轉(zhuan)錄到(dao) PCR 的(de)全(quan)部過(guo)程。反應(ying)體(ti) 系(xi)中已(yi)含(han)有電(dian)泳所需(xu)的指試劑（藍(lan)色和(he)黃(huang)色(se)），反應(ying)後可(ke)以 直(zhi)接進(jin)行電(dian)泳。 在本試劑盒中，將(jiang)耐熱 M-MLV 反轉(zhuan)錄酶(mei)、Rnase Inhibitor、 Hotstart 高(gao) 保 真(zhen) DNA 聚(ju)合(he)酶以(yi)及(ji)穩定(ding)劑等配(pei)制成 50×One-Step Enzyme Mix 預混液(ye)；反應(ying) Buffer、dNTP 以及(ji) 電(dian)泳指示(shi)染(ran)料(liao)配(pei)制成 5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因(yin)此 使(shi)得(de)操(cao)作(zuo)更(geng)加(jia)簡(jian)單(dan)便(bian)，擴增(zeng)產(chan)物(wu)可用於(yu)平端克(ke)隆(long)和(he) DNA 測 序。
主要優勢(shi)：
 耐熱M-MLV反轉(zhuan)錄酶(mei)可在(zai)55℃反應(ying)能(neng)更(geng)好(hao)的(de)打(da)開(kai)復(fu)雜(za)二(er)級結構，只(zhi)需(xu) 10min 即(ji)可(ke)完(wan)成(cheng)逆(ni)轉(zhuan)錄。
 DNA 聚(ju)合(he)酶為(wei)熱啟動型(xing)高(gao)保真(zhen)酶(mei)，能(neng)夠(gou)有效的(de)抑制非特異(yi)性反應(ying)且(qie)具(ju)有較高(gao)的校(xiao)正活性，酶激活僅需(xu) 2min。
 具(ju)有寬(kuan)泛(fan)的(de)模板(ban)量(liang)兼容性，10 ng~1μg 都(dou)可有效擴(kuo)增(zeng)。
 反應(ying)過(guo)程中無需開(kai)蓋，避免(mian)了操(cao)作(zuo)過(guo)程中的(de)汙(wu)染(ran)危(wei)害。
組(zu)分
名(ming)稱 250T
50×One-Step Enzyme Mix 100 μl
5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer 1 ml
RNase Free H2O 1 ml×3
儲(chu)存(cun)：請置於(yu)-20°C，可保存(cun) 2 年；避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)。
註意(yi)：
1.50×One-Step Enzyme Mix 粘度高(gao)，第(di)壹次(ci)使(shi)用(yong)之(zhi)前(qian)要離(li)心收(shou)集(ji)至反應(ying)管底(di)部，吸取時(shi)應(ying)緩慢小(xiao)心(xin)。
2.由於(yu)使(shi)用(yong)了 Hotstart 高(gao)保真(zhen) DNA 聚(ju)合(he)酶，反應(ying)配(pei)制可在(zai)常溫進(jin)行，但各(ge)組(zu)分應(ying)-20°C 保存(cun)。
實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)和(he)反應(ying)條件(jian)：
1. 按(an)以(yi)下(xia)組(zu)分配(pei)制反應(ying)液(ye)
RNA（病毒(du) DNA/RNA 樣品(pin)直(zhi)接使(shi)用(yong) 2~10μl） 10 ng~1 μg
5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer 4 μl
50×HiFi One-Step RT-PCR Enzyme Mix 0.4 μl
基因特(te)異(yi)性上遊引物(wu)（10μM） 0.8 μl
基因特(te)異(yi)性下遊引物(wu)（10μM） 0.8 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
註意(yi)：超過(guo) 1 μg 的 RNA 模(mo)板(ban)量(liang)會(hui)抑制 PCR 反應(ying)，建議(yi)第(di)壹次(ci)可(ke)使(shi)用(yong) 200 ng 的 RNA 模(mo)板(ban)，然(ran)後根據(ju)結果進(jin)行優(you)化(hua)。
2. 在 PCR 儀(yi)上按(an)以(yi)下(xia)條(tiao)件(jian)進(jin)行 RT-PCR 反應(ying):
55°C， 10min 逆(ni)轉(zhuan)錄反應(ying)
95°C， 2min 失活 M-MLV，並(bing)激活高(gao)保真(zhen)聚(ju)合(he)酶
95°C， 20s 30~40 cycles
TM°C， 20s
72°C ，
2Kb/min
72°C， 2min 末(mo)端延(yan)伸
3. PCR 反應(ying)結束(shu)後，可(ke)取(qu) 5 μl 產(chan)物(wu)直(zhi)接進(jin)行電(dian)泳檢測(ce)。預混液(ye)中已(yi)經(jing)包含綠(lv)色染(ran)料(liao)，無需再(zai)加(jia)入(ru) DNA Loading Buffer。1% Agarose 電(dian)泳時(shi)，藍(lan)色指(zhi)示(shi)劑指示 3~5 kb，黃色指示(shi)劑指示<50 bp。

公(gong)司(si)正在出售(shou)的產(chan)品(pin)：