ELISA是(shi)酶聯接(jie)免疫吸附劑測定(ding)( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的(de)簡(jian)稱。它(ta)是(shi)繼(ji)免疫熒光和放射(she)免疫技(ji)術之(zhi)後發展起來(lai)的(de)壹種免疫酶技(ji)術。ELISA實(shi)驗(yan)測定(ding)條(tiao)件分(fen)述(shu)：
 

　　1、標(biao)本因(yin)素(su)
 

　　血清(qing)標(biao)本可(ke)按(an)常規方(fang)法采(cai)集(ji)，應留意避免溶血(xue)，紅細(xi)胞溶解(jie)時(shi)會開(kai)釋(shi)出具有(you)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶活(huo)性的(de)物質，以(yi)HRP為(wei)標記(ji)的ELISA測定(ding)中，溶血(xue)標本可(ke)能(neng)會增(zeng)加非特異性(xing)顯色。
 

　　如(ru)在(zai)冰箱(xiang)中保留過久，其(qi)中的可(ke)發生聚合(he)，在(zai)間(jian)接(jie)法ELISA中可(ke)使(shi)本底加深。本文將敘(xu)述(shu)板(ban)式ELISA各(ge)個(ge)操(cao)縱(zong)步驟的留意要點(dian)，珠式、管(guan)式及(ji)磁(ci)性(xing)球ELSIA，國(guo)外(wai)試劑(ji)均與特殊(shu)儀(yi)器配(pei)合(he)應用，嚴格(ge)遵(zun)照(zhao)劃(hua)定(ding)操(cao)縱(zong)，必能(neng)得出正確的結(jie)果(guo)。
 

　　加樣時(shi)應將所(suo)加物加在(zai)LEISA板(ban)孔(kong)的底部(bu)，避免加在(zai)孔壁上(shang)部(bu)，並留意不可(ke)濺(jian)出，不可(ke)產氣(qi)憤泡。有(you)此測定(ding)需(xu)用(yong)稀(xi)的(de)血清(qing)，可(ke)在(zai)試管(guan)中按劃(hua)定(ding)的(de)稀(xi)釋(shi)度(du)稀(xi)釋後再加樣.
 

　　2、ELISA加樣步驟
 

　　在(zai)ELISA中壹般有(you)3次加樣步聚，即加標本，加酶結合(he)物，加底物。凍(dong)結血(xue)清(qing)融(rong)解(jie)後，蛋(dan)白質(zhi)局部(bu)濃(nong)縮，分(fen)布不均，應充分(fen)混(hun)勻(yun)宜(yi)輕緩(huan)，避免氣(qi)泡，可(ke)上(shang)下倒(dao)置混和(he)，不(bu)要在(zai)混勻(yun)器上(shang)強烈振蕩。
 

　　制備(bei)血(xue)漿(jiang)標(biao)本需借(jie)助(zhu)於(yu)抗(kang)凝(ning)劑(ji)，而血清(qing)標(biao)本只要待(dai)血清(qing)天(tian)然(ran)凝固、血(xue)kuai收縮後即可(ke)取(qu)得。也可(ke)在(zai)板(ban)孔(kong)中加入稀(xi)釋(shi)液(ye)，再在(zai)其加入血(xue)清(qing)標(biao)本，然(ran)後在(zai)微(wei)型震蕩器上(shang)震蕩1分(fen)鐘以(yi)保證(zheng)混(hun)和(he)。
 

　　壹般說(shuo)來(lai)，在(zai)5天內測定(ding)的(de)血(xue)清(qing)標(biao)本可(ke)放(fang)置於(yu)4℃，超(chao)過(guo)壹周(zhou)測定(ding)的(de)需(xu)低(di)溫(wen)冰存(cun)。可(ke)用(yong)作ELISA測定(ding)的(de)標(biao)本十分(fen)廣(guang)泛，體(ti)液(ye)、分(fen)泌(mi)物和排(pai)泄(xie)物等均可(ke)作(zuo)標本以(yi)測定(ding)其(qi)中某(mou)種抗(kang)體(ti) 或(huo)抗原(yuan)成(cheng)份，elisa試(shi)劑盒(he)中本次試驗(yan)不(bu)需用(yong)的(de)部(bu)分(fen)應及(ji)時(shi)放回(hui)冰箱(xiang)保(bao)留。
 

　　3、固相載體(ti)
 

　　ELISA的(de)操(cao)縱(zong)因(yin)固(gu)相載體(ti)的(de)形成(cheng)不同(tong)而(er)有(you)所(suo)差(cha)異，海(hai)內醫(yi)學(xue)檢(jian)修壹般均用板(ban)式點(dian)。除特殊(shu)情(qing)況外(wai)，在(zai)醫(yi)學(xue)檢(jian)修中均以(yi)血清(qing)作(zuo)為(wei)檢(jian)測標本。
 

　　加酶結合(he)物應用液(ye)和底物用液(ye)時(shi)可(ke)用(yong)定(ding)量(liang)多(duo)道(dao)加液(ye)器，使加液(ye)過程迅(xun)速(su)完(wan)成(cheng)。如有(you)細(xi)菌(jun)汙(wu)染，菌(jun)體(ti)中可(ke)能(neng)含有(you)內源性HRP，也(ye)會(hui)產生假陽性(xing)反(fan)應。每次加標本應更(geng)換吸嘴，以(yi)發生交(jiao)叉(cha)汙(wu)染，也(ye)可(ke)用(yong)壹次性的定(ding)量(liang)塑料管(guan)加樣。
 

　　良(liang)好的儀(yi)器和準確的操(cao)縱(zong)是(shi)保(bao)證(zheng)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)檢(jian)測結果(guo)正確(que)可(ke)靠(kao)的(de)必要條(tiao)件。ELISA頂(ding)用(yong)的(de)蒸(zheng)餾 水或(huo)去離子水，包(bao)括用於(yu)洗(xi)滌(di)的(de)，應為(wei)新鮮的和(he)高(gao)質量的(de)。有(you)些標(biao)本可(ke)直接進行測定(ding)，有(you)些則(ze)需經預處理(li)。