RAPA3G植物組(zu)織(zhi)直擴(kuo)PCR試(shi)劑盒(he)

公司產(chan)品僅(jin)供科(ke)研(yan)研究使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨床(chuang)診斷(duan)！

商品屬(shu)性(xing)

RAPA3G DNA 聚(ju)合酶(mei)為經電(dian)子重(zhong)構架的(de)第(di)三代 Taq DNA 聚(ju)合酶(mei)，第(di)三代 DNA 聚(ju)合酶(mei)具有(you)高度(du)的(de)雜質耐(nai)受(shou)性(xing)、 長片段(duan)擴(kuo)增(zeng)能(neng)力(li)、高擴(kuo)增(zeng)成功率(lv)、高(gao)產(chan)量(liang)，這些(xie)特(te)點使(shi)得(de) RAPA3G 系(xi)列(lie)產(chan)品可用於粗(cu)制樣(yang)品的直接(jie)擴(kuo)增(zeng)，無(wu)需核(he)酸(suan)純(chun) 化(hua)步(bu)驟。該(gai) PCR Mix 具有(you) 5’-3’的聚(ju)合酶(mei)活(huo)性(xing)、5’-3’的外切(qie) 酶(mei)活(huo)性(xing)、3’-5’的外切(qie)酶(mei)活(huo)性(xing)，產(chan)物部分(fen)帶(dai)有"A“尾(wei)巴，部 分(fen)為(wei)平(ping)末(mo)端，因此(ci)產(chan)物可用(yong)於 TA 克(ke)隆或平(ping)端(duan)克隆。 

特(te)點和用(yong)途(tu)：
（1）高雜質耐(nai)受(shou)性(xing)：該 PCR Mix 可(ke)直接(jie)使(shi)用(yong)多糖多酚(fen)含量(liang)的葉(ye)片等(deng)材料進行(xing) PCR 擴(kuo)增(zeng)，無(wu)需基(ji)因組(zu)提取(qu)。
（2）高效(xiao)的(de)快(kuai)速 DNA 釋放劑(ji)：盡(jin)管(guan)該 PCR Mix 可(ke)以直接(jie)使(shi)用(yong)葉片進行(xing)擴(kuo)增(zeng)，但(dan)我(wo)們(men)仍(reng)然(ran)推(tui)薦(jian)采用 DNA 釋放劑(ji)進行(xing)樣本(ben)的快(kuai)速前(qian)處理(li)（約(yue)需要(yao) 5min，可高(gao)通(tong)量(liang)操作）。DNA 釋放劑(ji)的前處理(li)，使(shi)得(de)制備的 DNA 模板可(ke)以(yi)進行(xing)多次、多(duo)基因擴(kuo)增(zeng)，並(bing)長期保存植物 DNA，經 DNA 釋放劑(ji)處理(li)的(de)樣本(ben)，在室(shi)溫條(tiao)件(jian)下放(fang)置(zhi) 1 個月(yue)，無(wu)任(ren)何(he)後(hou)續影(ying)響，-20 可(ke)長期保存。
（3） 快(kuai)速 PCR：該(gai)酶(mei)具有(you) 6kb/min 以上(shang)的(de)擴(kuo)增(zeng)速度(du)，可(ke)顯(xian)著(zhu)的縮(suo)短 PCR 的擴(kuo)增(zeng)時間，在常規測試(shi)條(tiao)件(jian)下，10s 的(de)延(yan)伸時間可完(wan)成 1kb 的基因組(zu) DNA 擴(kuo)增(zeng)。
（4）粗(cu)制樣(yang)品的擴(kuo)增(zeng)能(neng)力(li)：擴(kuo)增(zeng)能(neng)力(li)>1.7kb。
（5） 高保(bao)真性(xing)能(neng)：該制品包(bao)含壹(yi)定(ding)比例(li)的(de) RAPA HiFi 超(chao)保(bao)真 DNA 聚(ju)合酶(mei)，因此(ci)其具有(you)壹(yi)定(ding)的保(bao)真性(xing)能(neng)（經藍白(bai)斑(ban)測(ce)試(shi)，其保(bao)真性(xing)能(neng)約(yue)為 Taq DNA 聚(ju)合酶(mei)的 56 倍(bei)）。
（6）熱啟(qi)動(dong)，防(fang)止非特(te)異性(xing)擴(kuo)增(zeng)：RAPA3G 系(xi)列(lie)產(chan)品均采用 專有的(de)熱(re)啟(qi)動(dong)技術(shu)，確(que)保 50 度(du)以(yi)下無(wu)活(huo)性(xing)，僅(jin)有(you) 95 度(du)加(jia)熱 5min 以(yi)後(hou)才能(neng)恢復(fu)其(qi)活(huo)性(xing)，因此(ci)可限(xian)度(du)的(de)提高(gao)擴(kuo)增(zeng)的(de)特異性(xing)，減少(shao)非特(te)異性(xing)產(chan)物的產(chan)生(sheng)。
包(bao)裝：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 1mlX2
快(kuai)速 DNA 釋放劑(ji) A 20 ml
快(kuai)速 DNA 釋放劑(ji) B 20 ml
儲存：長期儲存置(zhi)於(yu)-20°C 以(yi)下(xia)，可保(bao)存 2 年(nian)；短期使(shi)用(yong)置於(yu) 4°C（3 個月(yue)）保(bao)存。
使(shi)用(yong)方法
1. DNA 釋放
（1）采(cai)用加熱(re)法：取(qu) 2-3mm 直徑(jing)葉(ye)片（白(bai) Tip 頭上(shang)沿(yan)大(da)小）、1-10mg 果實等(deng)材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快(kuai)速 DNA 釋放劑(ji) A，於 PCR 儀中 98°C 加熱 5min，加熱(re)完(wan)畢(bi)後(hou)加入 50 μl 快(kuai)速 DNA 釋放劑(ji) B，混合均勻，即可使(shi)用(yong)。
（2）采用(yong)鋼(gang)珠研磨法：取(qu) 2-3mm 直徑(jing)葉(ye)片、1-10mg 果(guo)實等(deng)材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快(kuai)速 DNA 釋放劑(ji) A 和 2-3 粒鋼(gang)珠，研磨 1-2min 成漿(jiang)體裝(zhuang)。研磨完畢(bi)後(hou)加入 250 μl 快(kuai)速 DNA 釋放劑(ji) B，混合均勻，即可使(shi)用(yong)。
2. 按下(xia)表(biao)配制 PCR 反(fan)應體系(xi)並(bing)混合均勻：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 25 μl
上(shang)遊(you)引(yin)物(10 μM) 2 μl
下遊引(yin)物(10 μM) 2 μl
步驟 1 制備的模板 DNA 2 μl
ddH2O 19 μl
註(zhu)意：當擴(kuo)增(zeng)片段(duan)>5kb 時，引(yin)物用量(liang)調整(zheng)為(wei) 0.25-0.5μl。
3. PCR 擴(kuo)增(zeng)循(xun)環參(can)數(shu)
循環數 溫度(du) 時間
預變(bian)性(xing) 95°C 5min
25-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 4-6kb/min
末(mo)延伸 72°C 2min
請註意：（1）該制品為熱啟(qi)動(dong)制品預變(bian)性(xing)步驟(zhou) 5min 不(bu)可(ke)縮(suo)短，否(fou)則 DNA 聚(ju)合酶(mei)無法恢復(fu)活(huo)性(xing)。（2）當擴(kuo)增(zeng)片段(duan)<1kb時，延伸時間使(shi)用(yong) 15s；擴(kuo)增(zeng)片段(duan) 1-2kb 時,延伸時間使(shi)用(yong)45s，擴(kuo)增(zeng)片段(duan) 2-3kb 時,延伸時間使(shi)用(yong) 1min，當擴(kuo)增(zeng)片段(duan)>3kb 時，請按照 2kb/min 的(de)延(yan)伸時間進行(xing)設置。(3)盡(jin)管(guan)該酶(mei)具有(you) 6kb/min 的延(yan)伸速度(du)，但(dan)按照 2kb/min 設(she)置(zhi)延伸時間的條(tiao)件(jian)下，能(neng)獲得(de)的(de)產(chan)量(liang)。
3. 註意事項(xiang)：(1) 當模(mo)板 GC 含(han)量(liang)>70%時，請添加(jia)5× Q-Solution（Cat. No.: A3002）。(2)當采(cai)用(yong)全血(xue)、血漿(jiang)等(deng)蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)的樣(yang)本(ben)時，擴(kuo)增(zeng)完(wan)畢後(hou)可能(neng)會有(you)變(bian)性(xing)的蛋(dan)白(bai)沈澱(dian)，請離心(xin)後(hou)再進行(xing)點樣和電(dian)泳。

公司正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：