山(shan)豆根(gen)PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)*

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用戶只需要提供病毒樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃(huang)保守序(xu)列設(she)計(ji)的專壹(yi)性引物，與(yu)相關病毒無交叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈敏度(du)可(ke)以(yi)達到(dao)幾百(bai)拷貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管式熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑(ji)盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系的熒光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用(yong)於(yu)科(ke)研，不能用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。

使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采集與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照樣品(pin)的采集與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照《食品(pin)衛生微(wei)生物學檢(jian)驗阪(ban)崎腸桿(gan)菌(jun)檢驗要求進行。
2、血液(ye)樣品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射(she)器(qi)抽取(qu)受(shou)檢者靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸鈉)抗(kang)凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的收集(ji)管中(zhong)送檢。
4、病(bing)竈部位樣品(pin)：取發(fa)病(bing)部(bu)位新鮮(xian)滲(shen)出物、粘(zhan)液膿血送檢。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度為例）
1. 註意：由於(yu)標(biao)準品(pin)濃度非常(chang)高，因(yin)此下(xia)列稀釋(shi)操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要在(zai)獨(du)立(li)的區域進行，千(qian)萬不能汙(wu)染(ran)樣品(pin)或(huo)本(ben)試劑(ji)盒(he)的其他(ta)成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性和(he)避免(mian)擴散(san)傳(chuan)染(ran)性病原(yuan)，本(ben)產品(pin)不提供活體(ti)樣品(pin)做陽(yang)性對照，只提供可以(yi)直(zhi)接使(shi)用(yong)的 DNA段作(zuo)為陽性對照。
2. 標記 6 個(ge)離(li)心(xin)管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶芯(xin)槍頭，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放(fang)冰上待用。
5. 換(huan)槍頭，在(zai) 6 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋(shi)所得)，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放(fang)冰上待用。
6. 換(huan)槍頭，在(zai) 5 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到(dao) 5 號管中(zhong)，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放(fang)冰上待用。
7. 重(zhong)復上面(mian)的操(cao)作(zuo)直(zhi)到(dao)得到 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)的陽性對照。放(fang)冰上待用。
註：上述(shu)樣品(pin)建議經過增(zeng)菌(jun)後，收集(ji)培養(yang)物用於(yu)檢(jian)測。 
二(er)、DNA提取：
可采用PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備的DNA抽提液，按以(yi)下(xia)說明(ming)進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉(ye)生物科技有(you)限(xian)公(gong)司生產的DNA提取試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒(ying)光配(pei)套(tao))或(huo)其他(ta)合適的商業(ye)化(hua)產品(pin)，並按(an)照(zhao)相應試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)進行操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體培養(yang)物：取液(ye)體培養(yang)物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸棄(qi)上清，加(jia)入50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
2、固體(ti)培養(yang)物：挑(tiao)取單克(ke)隆(long)菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便樣品(pin)：挑(tiao)取米粒(li)大(da)小糞便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘，棄(qi)上清，沈澱中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
4、其他(ta)液體(ti)標本(ben)：取標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清，沈澱中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
註：陽性對照和(he)陰性對照為已經抽提好(hao)的核酸(無需(xu)提取)，直(zhi)接取(qu)5μL加(jia)入到反(fan)應(ying)體(ti)系中(zhong)即(ji)可(ke)。由於(yu)陽(yang)性對照濃度較高，建議在(zai)樣品(pin)制備區域(yu)加(jia)入陽性對照。 
實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴(yan)格按(an)照本(ben)說明(ming)書(shu)要求分(fen)別(bie)在(zai)試劑(ji)準備區、樣本處(chu)理(li)區(qu)和(he)PCR擴增(zeng)區進行操(cao)作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗服、儀器(qi) 、耗(hao)材應獨(du)立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能混(hun)用(yong)；實(shi)驗用吸頭采用帶(dai)濾芯(xin)吸頭；樣本處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配有(you)生物安全(quan)櫃(gui)，樣本處(chu)理(li)在(zai)生物安全(quan)櫃(gui)中(zhong)進行操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫外(wai)線(xian)殺菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避免(mian)RNA降解(jie)，樣本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後立(li)即(ji)上機檢測(ce)；樣本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用(yong)的器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經過無核酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應(ying)該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對照。
4. 試劑(ji)盒(he)所有(you)試劑(ji)在(zai)使(shi)用(yong)前應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫下(xia)充分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻(yun)，並(bing)應瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰性和(he)陽性對照在(zai)壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前應(ying)全(quan)部轉移(yi)至(zhi)標本準備區，並(bing)單(dan)獨(du)存放。
6. 為防止(zhi)熒(ying)光幹擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手直(zhi)接接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管，並(bing)應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應(ying)管上進行任何標(biao)記(ji)。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相關參數(shu)應按照(zhao)本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相關要求進行設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批號試劑(ji)不能混(hun)用(yong)。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不選(xuan)ROX校正，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)產品(pin)的廢棄(qi)物應該(gai)進行無害(hai)化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可丟(diu)棄(qi)。
儲存條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收集(ji)、處理(li)及(ji)保存方法(fa)
1. 血(xue)清：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原和(he)內(nei)毒素的試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免(mian)任何細(xi)胞刺激(ji)，收集(ji)血液(ye)後，3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清和(he)紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速小心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或(huo)肝(gan)素抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分(fen)鐘取(qu)上清。
3. 細(xi)胞上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加(jia)入適量生理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘取(qu)上清。
5. 保存：如果樣本收集(ji)後不(bu)及(ji)時檢測，請(qing)按壹(yi)次(ci)用(yong)量分(fen)裝，凍(dong)存於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保樣品(pin)均勻(yun)地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。
HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜(jing)脈(mai)血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2(標準品(pin))Rivaroxaban質量規格：≥98%,標(biao)準品(pin)

Promocell C-22022 Endothelial Cell GrowthMedium MV2, 內(nei)皮細(xi)胞生長培養(yang)基(ji)MV2(即(ji)用(yong)型) 500ml阿哌沙班(ban)Apixaban質量規格：>98.5%,選(xuan)擇性活化(hua)Ⅹ因(yin)子(zi)抑制劑(ji)

人生發基(ji)質細(xi)胞裂解(jie)物HHGMCL哌立(li)福新(KRX-0401)Perifosine質量規格：>98%,蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(mei)B(Akt)信(xin)號通路(lu)阻斷劑(ji)

IL17RB Others Human 人 IL17RB / IL-17 Receptor B 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 鹽(yan)酸阿那格雷(lei)Anagrelide  質量規格：>98%

人低分(fen)化(hua)肺(fei)腺(xian)癌細(xi)胞;SK-LU-1甲磺酸沙奎(kui)拉(la)韋Saquinavir mesylate質量規格：>98%
VEGFA Protein Human 重(zhong)組人 / 食蟹猴(hou) VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋(dan)白(bai)剛(gang)果紅(hong)(AR)質量規格：ARCongo red

大(da)鼠(shu)腎(shen)臟管狀(zhuang)上皮細(xi)胞(RRTEpiC)(5×105) RL95-2, 人內(nei)膜腺(xian)癌細(xi)胞系 Human鈣(gai)羧酸指示劑(ji)(AR)質量規格：ARCalconcarboxylic acid

成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞生長添(tian)加(jia)物-2FGS-2溴化(hua)乙錠(EB)質量規格：>95%Ethidium bromide(EB)

PRDX2 Others Human 人 Peroxiredoxin 2 / PRDX2 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 貝西沙(sha)星鹽(yan)酸鹽(yan)質量規格：>99%,BRBesifloxacin HCl

EB病(bing)毒轉化的人B細(xi)胞;HH-16甜菜(cai)堿(jian)（標(biao)準品(pin)）質量規格：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)Betaine
FOLH1 Others Mouse 小鼠(shu) FOLH1 / GCPII / PSMA / NAALAD1 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 己定(ding)（標準品(pin)）質量規格：HPLC法(fa)含(han)量測(ce)定(ding)Chlorhexidine

小腸粘(zhan)膜上皮細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)鹽(yan)酸甲氧(yang)那明(ming)（標(biao)準品(pin)）質量規格：含(han)量測(ce)定(ding)Methoxyphenamine HCl

SERPINA1A Others Mouse 小鼠(shu) Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) （標準品(pin)）質量規格：供HPLC法(fa)含(han)量測(ce)定(ding)用Potassium guaiacolsulfonate hemihydrate

大(da)鼠(shu)胸大(da)動脈(mai)平滑肌細(xi)胞;A7r5（標準品(pin)）質量規格：含(han)量測(ce)定(ding)Propyl gallate

中(zhong)國倉鼠(shu)卵(luan)巢細(xi)胞(亞系克(ke)隆(long));CHO-HCV-p7 表皮癌細(xi)胞，A-431細(xi)胞 H22-H8D8細(xi)胞，鼠(shu)肝(gan)癌細(xi)胞丹參(can)酮(tong)I質量規格：HPLC≥95%,BRTanshine I
山(shan)豆根(gen)PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)*人前列(lie)腺(xian)平滑肌細(xi)胞(HPSMC)(5×105)直(zhi)鏈(lian)澱粉(fen)5克(ke)RT

CL-0115Hs 746T(人胃癌細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2相關物質B cllopuril Rqlctqd CoMpound B;5-(forMylcMi)-1H-pyrczolq-4-ccrboxcMidq 407-0-1

小鼠(shu)源(yuan)細(xi)胞 大(da)鼠(shu)晶(jing)狀體上皮細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL2-安言醋(cu)鹽(yan) Cystqcminq xy7chloridq 126-27-0

HCT-8/V? 人結(jie)腸癌長春(chun)新堿(jian)耐藥(yao)株(zhu)四乙(yi)基錄(lu)化(hua)5克(ke)

INHBA Oth