柴(chai)胡(hu)染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說明書

特(te)點(dian)：
1. 即開即用，用戶(hu)只需要(yao)提供病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據地黃(huang)保守序列設(she)計(ji)的(de)專壹性引物(wu)，與(yu)相關病毒(du)無交(jiao)叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏度可以(yi)達到幾百拷貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹管式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避(bi)免後續(xu)汙(wu)染。
5. 本試劑(ji)盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品只適用於(yu)科(ke)研，不能用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。

使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹、樣(yang)品(pin)采(cai)集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照《食品(pin)衛(wei)生微(wei)生(sheng)物(wu)學檢驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸桿菌檢驗(yan)要(yao)求進行(xing)。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用無菌註(zhu)射器抽(chou)取受檢者(zhe)靜(jing)脈(mai)血2mL，註(zhu)入無菌EDTA2Na(或檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗(kang)凝(ning)管，立即混勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便(bian)置於(yu)滅(mie)菌的(de)收集管中送(song)檢。
4、病(bing)竈部位(wei)樣(yang)品(pin)：取發病部(bu)位(wei)新鮮(xian)滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿血(xue)送檢。
壹、稀釋(shi) PCR 陽性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀釋(shi)度(du)為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意：由於(yu)標準品濃度(du)非常(chang)高，因(yin)此(ci)下列(lie)稀(xi)釋操(cao)作(zuo)壹定(ding)要(yao)在獨立(li)的(de)區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬不能汙(wu)染樣(yang)品(pin)或(huo)本(ben)試劑(ji)盒(he)的(de)其(qi)他成(cheng)分）。為(wei)增加產(chan)品穩(wen)定(ding)性(xing)和避(bi)免擴散(san)傳染(ran)性(xing)病原(yuan)，本產(chan)品不(bu)提供活體樣(yang)品(pin)做陽(yang)性(xing)對(dui)照，只提供可以(yi)直接(jie)使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為(wei)陽性對(dui)照。
2. 標記 6 個(ge)離心管，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分(fen)別加入 45 μL 熒光(guang) PCR 模板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶芯槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照，充分震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上步稀釋所得(de))，充分震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照到 5 號管中，充分震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
7. 重復(fu)上(shang)面的(de)操(cao)作直到得(de)到 6 個稀釋(shi)度(du)的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
註(zhu)：上述(shu)樣(yang)品(pin)建(jian)議經(jing)過(guo)增菌後，收集培養(yang)物(wu)用於(yu)檢測(ce)。 
二、DNA提取：
可采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液(ye)，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明進行DNA核(he)酸(suan)的(de)粗(cu)提。也可(ke)采(cai)購上海澤(ze)葉(ye)生物(wu)科(ke)技(ji)有限公(gong)司生產(chan)的(de)DNA提取試(shi)劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法-熒光(guang)配套)或(huo)其他(ta)合(he)適(shi)的(de)商(shang)業化(hua)產(chan)品，並(bing)按(an)照相(xiang)應(ying)試劑(ji)盒(he)說明進行操作。
1、液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)：取液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量(liang)吸(xi)棄上(shang)清(qing)，加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培養(yang)物(wu)：挑取單(dan)克(ke)隆(long)菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑取米(mi)粒(li)大小(xiao)糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌離心管中，加入0.5mL生理(li)鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心3分鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他液(ye)體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽性(xing)對(dui)照和陰性(xing)對(dui)照為(wei)已經(jing)抽(chou)提好的(de)核(he)酸(suan)(無需提取)，直接(jie)取5μL加入到反(fan)應體(ti)系中(zhong)即可(ke)。由於(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)照濃(nong)度(du)較高，建(jian)議在樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域(yu)加入陽性對(dui)照。 
實(shi)驗流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴(yan)格按(an)照本(ben)說(shuo)明書要(yao)求分別在試劑(ji)準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區(qu)和PCR擴增區(qu)進(jin)行(xing)操(cao)作，各(ge)區(qu)實(shi)驗服(fu)、儀器 、耗(hao)材應(ying)獨立使(shi)用，不能混用；實(shi)驗用吸(xi)頭采(cai)用帶濾(lv)芯吸(xi)頭；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安(an)全櫃，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在生物(wu)安(an)全櫃中(zhong)進(jin)行操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配有(you)紫外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝置。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降解，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作，且完(wan)成實(shi)驗後(hou)立即上(shang)機(ji)檢測(ce)；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中使(shi)用的(de)器具耗(hao)材應(ying)經(jing)過(guo)無核(he)酶處(chu)理(li)。
3. 每次實(shi)驗應(ying)該(gai)設(she)置陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試劑(ji)盒(he)所有試劑(ji)在使(shi)用前應(ying)該(gai)在常溫(wen)下充分融化(hua)混勻(yun)，並(bing)應瞬時離心。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配陰性和陽性(xing)對(dui)照在壹次使(shi)用前應(ying)全(quan)部轉移至(zhi)標本準備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光(guang)幹擾(rao)，應避(bi)免裸手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管，並應(ying)避(bi)免在PCR反(fan)應管上進(jin)行任(ren)何(he)標記。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相(xiang)關參(can)數應(ying)按(an)照本(ben)說(shuo)明書相關要(yao)求進行(xing)設(she)置；不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)試(shi)劑(ji)不(bu)能混用。
8. ABI系(xi)列熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀參(can)數設(she)置中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中產(chan)品的(de)廢(fei)棄物(wu)應(ying)該(gai)進行(xing)無害化(hua)處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收集、處(chu)理(li)及保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不含(han)熱(re)原和內(nei)毒(du)素的(de)試(shi)管，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免任何(he)細(xi)胞刺激(ji)，收集血液(ye)後，3000 轉離心10 分鐘將血清(qing)和紅細(xi)胞迅(xun)速(su)小(xiao)心地(di)分離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽或(huo)肝素抗(kang)凝(ning)。3000 轉離心30 分鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉離心10 分鐘去(qu)除顆(ke)粒(li)和聚合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加入適量(liang)生理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉離心10 分鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣(yang)本(ben)收集後不及時檢測(ce)，請(qing)按(an)壹次用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融，在室溫(wen)下解凍(dong)並(bing)確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分解凍(dong)。
GH3, 大鼠垂(chui)體(ti)生長激(ji)素腺(xian)瘤莫吉司(si)坦Moguisteine質量(liang)規(gui)格：>98%,BR

大鼠主動脈(mai)平滑(hua)肌細胞莫吉司(si)坦(標準品)Moguisteine質量(liang)規(gui)格：HPLC>98%,標準品

人惡(e)性(xing)非霍(huo)奇金(jin)瘤患(huan)者(zhe)的(de)自(zi)然殺(sha)傷細胞(bao);NK-92 [NK92] 人(ren)胰(yi)島β細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL糠酸(suan)莫米Mometasone furoate質量(liang)規(gui)格：>98%,USP31

人永生(sheng)化(hua)細(xi)胞(bao);CNLMG-B5537LC糠酸(suan)莫米(標準品)Mometasone furoate質量(liang)規(gui)格：HPLC>98%,標準品

GDNF Others Rat 大鼠 GDNF 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 納他(ta)黴(mei)素,匹馬黴(mei)素,,遊黴素Natamycin,Pimaricin質量(liang)規(gui)格：>90%,BR
斑馬(ma)魚尾鰭(qi)細(xi)胞;AB.9 人肝癌細(xi)胞，SNU-182細(xi)胞(bao) HEp-2(喉表皮(pi)樣(yang)癌(ai)細(xi)胞(bao))硫(liu)酸(suan)鈰(shi)四水(>99%，BR)Cerium(IV) sulfate tetrahydrate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,BR

人腦瘤細(xi)胞(bao);SF126碳(tan)酸(suan)銫(se)(>99%，BR)Cesium carbonate質量(liang)規(gui)格：>99%,BR

TLR3 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) TLR3 / CD283 人(ren)細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 1,1-環丙基(ji)乙(yi)二羧(suo)酸(suan)1,1-Cyclopropanedicarboxylic acid質量(liang)規(gui)格：>98%

非洲綠猴腎(shen)細(xi)胞;VEROTAPS；N-三(san)(羥甲(jia)基(ji))甲(jia)基(ji)-3-氨(an)基(ji)丙磺酸(suan)TAPS質量(liang)規(gui)格：>99%,細胞(bao)培(pei)養(yang)級(ji)

ACVR1B Others Rat 大鼠 ACVR1B / ALK-4 人細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) PI3K 抑(yi)制劑(ji)LY294002質量(liang)規(gui)格：>98.5%,進分(fen)
IL2RA Others Human 人(ren) IL2Ra / CD25 人細胞裂解液(ye) (陽性對(dui)照) （標準品）質量(liang)規(gui)格：含量(liang)測定(ding)S-Carboxymethyl-L-cysteine

脂肪細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)AdM（標準品）質量(liang)規(gui)格：含量(liang)測定(ding)Isosorbide dinitrate

CLEC1A Others Rat 大鼠 CLEC1A / CLEC-1 人細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) ;氮(dan)酮質量(liang)規(gui)格：>97%Laurocapram

大鼠胰(yi)島細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL（標準品）質量(liang)規(gui)格：含量(liang)測定(ding)Oxymetazoline

MLE-12小(xiao)鼠(shu)肺(fei)上(shang)皮(pi)細胞(bao)株 MLE-12 mouse lung epithelial cell lines DMEM/F12+2%FBS雙壁(bi)碳(tan)納(na)米管(>50%) 小(xiao)於(yu)5nm(直徑),5-15μm(長(chang)度)質(zhi)量(liang)規(gui)格：Carbon Natube Double-walled (>50%) below 5nm(diam.), 5-15µm(length)
柴(chai)胡(hu)染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說明書DDR2 Others Cymolgus 食蟹(xie)猴 DDR2 Kinase 人細胞裂解液(ye) (陽性對(dui)照) BariumChorideDihydrate錄(lu)化(hua)鋇(bei)二水ACS級(ji)白色晶(jing)體粉末(mo)RT不sigma

貓(mao)腎細胞(bao);F813-基(ji)-2-肖基(ji)本(ben)加醋 3-Mqthyl-2-nitbqnzoic ccid

LTPEP-a-2細胞(bao)，人(ren)肺(fei)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao) 非洲綠猴腎(shen)細(xi)胞,VERO C1008 (E6)細胞(bao) CM-M042小(xiao)鼠(shu)直腸平滑(hua)肌細胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mLGUANIDINExy7CHLORIDE鹽酸(suan)胍(gua)技(ji)術級(ji)白色至(zhi)微(wei)黃(huang)色顆(ke)粒(li)結晶(jing)粉末(mo)R