菟絲子(zi)PCR鑒(jian)定試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

儲存條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理(li)及(ji)保存方法(fa)
1. 血清(qing)：使用不(bu)含熱(re)原(yuan)和內(nei)毒素的試(shi)管，操(cao)作過程中(zhong)避免任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激，收(shou)集血(xue)液(ye)後(hou)，3000 轉離心10 分鐘將(jiang)血(xue)清和紅(hong)細胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或肝(gan)素抗凝(ning)。3000 轉離心30 分鐘取(qu)上(shang)清。
3. 細胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉離心10 分鐘去(qu)除(chu)顆粒和聚(ju)合(he)物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉離心10 分鐘取(qu)上(shang)清。
5. 保存：如果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集後(hou)不(bu)及時(shi)檢(jian)測(ce)，請按壹(yi)次用量分裝，凍(dong)存於-20℃，避免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地(di)充(chong)分解凍(dong)。

特點：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只需要提供病(bing)毒樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地(di)黃保守(shou)序列(lie)設(she)計的(de)專壹(yi)性引物，與相關病(bing)毒無(wu)交(jiao)叉反(fan)應。
3. 靈敏(min)度可以(yi)達到幾百拷(kao)貝/反(fan)應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒(ying)光定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避免後續(xu)汙(wu)染。
5. 本試(shi)劑盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應體(ti)系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chan)品只適用於科研，不(bu)能用於臨床(chuang)診(zhen)斷。

使用方法：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采集與(yu)預(yu)培養按照(zhao)樣(yang)品(pin)的(de)采集與(yu)預(yu)培養按照(zhao)《食品(pin)衛(wei)生微生物學檢(jian)驗(yan)阪崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗(yan)要求(qiu)進(jin)行。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射器(qi)抽取受(shou)檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸鈉(na))抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：取(qu)糞(fen)便置於滅(mie)菌(jun)的收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部位樣(yang)品(pin)：取(qu)發病部位新(xin)鮮滲出物、粘液(ye)膿血送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽性(xing)對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋度(du)為例(li)）
1. 註意：由於標準品(pin)濃(nong)度(du)非常高(gao)，因此下(xia)列(lie)稀(xi)釋操(cao)作壹(yi)定要在獨立(li)的(de)區域進(jin)行，千(qian)萬不(bu)能汙(wu)染樣(yang)品(pin)或本(ben)試(shi)劑盒(he)的(de)其(qi)他成(cheng)分）。為增(zeng)加產(chan)品穩定(ding)性(xing)和避(bi)免擴散傳染性(xing)病(bing)原，本(ben)產(chan)品不(bu)提供活(huo)體(ti)樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性對(dui)照(zhao)，只(zhi)提供可以(yi)直(zhi)接(jie)使(shi)用的 DNA段(duan)作為陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標記 6 個離心管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭(tou)分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀(xi)釋液(ye)（用帶芯槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在 7 號管中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待用。
5. 換槍(qiang)頭(tou)，在 6 號管中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)(上步稀(xi)釋所得(de))，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待用。
6. 換槍(qiang)頭(tou)，在 5 號管中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)到 5 號管中(zhong)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待用。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面(mian)的操(cao)作直到得到 6 個稀(xi)釋度(du)的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待用。
註：上述樣(yang)品(pin)建議經過增菌(jun)後，收(shou)集培(pei)養物用於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提取：
可采用PCR試(shi)劑盒(he)配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提液(ye)，按以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核酸(suan)的粗(cu)提。也可采購上海澤葉(ye)生物科技有限公(gong)司(si)生產(chan)的DNA提取試(shi)劑盒(he)(過柱(zhu)法(fa)-熒光配(pei)套)或其(qi)他合(he)適的商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品，並按照(zhao)相應試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)進(jin)行操(cao)作。
1、液(ye)體(ti)培養物：取液(ye)體(ti)培養物100μL加到1.5mL無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸棄上(shang)清(qing)，加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培養物：挑取(qu)單克(ke)隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：挑取(qu)米粒大小(xiao)糞(fen)便於滅(mie)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，加入0.5mL生理鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄(qi)上(shang)清，沈澱中(zhong)加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他液(ye)體(ti)標本(ben)：取標本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上(shang)清，沈澱中(zhong)加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應。
註：陽性對(dui)照(zhao)和陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為(wei)已經抽提好的核(he)酸(無(wu)需(xu)提取)，直接(jie)取5μL加入到反(fan)應體(ti)系中即(ji)可。由於陽性對(dui)照(zhao)濃(nong)度(du)較(jiao)高，建議在樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區域加入陽性(xing)對(dui)照(zhao)。 
IL7R Others Human 人(ren) IL7Ra / CD127 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 酯(zhi)(標準(zhun)品)Cefuroxime axetil質量規格：效(xiao)價測(ce)定

小(xiao)鼠海(hai)馬神經膠質細(xi)胞(EGFP標記)G鉀鹽(yan)Penicillin G, potassium salt 質量規格：>1500U/mg,USP,BR

LIF Others Human 人(ren) LIF 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) G鉀(標準(zhun)品)Penicillin G, potassium salt 質量規格：效(xiao)價測(ce)定

人(ren)結(jie)膜(mo)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞RNAHConF miRNA5 μgErdosteine質量規格：>98.5%

SK-RC-42細胞，人(ren)腎(shen)癌(ai)細(xi)胞 鼠肝(gan)癌細(xi)胞系,MM45T.Li細胞 人(ren)間(jian)充(chong)質幹細(xi)胞-臍帶鹽(yan)酸藥根堿(標準(zhun)品）Jatrorrhizine 質量規格：HPLC>98.0%,標準(zhun)品
FCGR4 Others Mouse 小(xiao)鼠 CD16-2 / FCGR4 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) D-果糖(tang)-1,6-二1酸三(san)鈉鹽(yan)D-Fructose 1,6-bisphosphate  salt質量規格：>98%,BR

平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞培(pei)養基(ji)SMCM-sfD-果糖(tang)(標準(zhun)品)D-Fructose質量規格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

GADD45A Others Human 人(ren) GADD45A / DDIT-1 桿(gan)狀病毒-昆蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 果糖(tang)(標準(zhun)品)Fructose質量規格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

;HEL哈巴(ba)俄苷(標準(zhun)品)Harpagoside質量規格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細胞，骨(gu)髓瘤細(xi)胞 人(ren)結(jie)腸癌細(xi)胞,SW620細胞 CM-H053人(ren)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞*培(pei)養基(ji)100mL哈巴(ba)苷(標準(zhun)品）Harpagide質量規格：HPLC≥98%，標準(zhun)品
表達SV40T和EBNA1的人(ren)胚(pei)腎(shen)細(xi)胞;293ET5-O-去(qu)甲(jia)多奈哌(pai)齊(qi)質(zhi)量規格：美國(guo)進(jin)口5-O-Desmethyl Donepezil

KC細胞，人(ren)腎(shen)癌(ai)細(xi)胞 小(xiao)鼠腦神經瘤細(xi)胞,Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]細胞 CL-0373KiMA(人(ren)胚(pei)腎(shen)上(shang)皮細胞系)5×106cells/瓶×2二氫多奈哌(pai)齊(qi)（非對(dui)映(ying)）質(zhi)量規格：美國(guo)進(jin)口Dihydro Donepezil (Mixture of Diastereomers)

BGC-803(人(ren)胃(wei)癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2Dehydrodeoxy多奈哌(pai)齊(qi)（多奈哌(pai)齊(qi)雜(za)質）質(zhi)量規格：美國(guo)進(jin)口Dehydrodeoxy Donepezil (Donepezil Impurity)

HWP-c subcutaneous 人(ren)類(lei)白前脂(zhi)肪細胞(HWP)皮下(xia) 500,000cells 人(ren)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞HLF脫(tuo)氧質(zhi)量規格：美國(guo)進(jin)口Deoxy Donepezil

615小(xiao)鼠狀肺腺(xian)癌瘤株(zhu);P615鹽(yan)酸地(di)芬(fen)尼多雜(za)質（1化合(he)物)（標準(zhun)品）質量規格：供檢(jian)查(zha)用Alkene
菟絲(si)子PCR鑒(jian)定試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)HBZY-1(大鼠腎(shen)小(xiao)球系膜細胞) 5×106cells/瓶×2矽膠(jiao)板H500毫(hao)克(ke)2～8℃

ASGR1 Others Mouse 小(xiao)鼠 ASGPR1 / ASGR1 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 5-溴-4-錄-3-吲(yin)哚(duo)鱗(lin)醋酯(zhi)隊(dui)本(ben)安鹽(yan) (BCIP)(-20℃) 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphctq p-toluidinq sclt 6278-6-9

人(ren)胚(pei)胎(tai)，皮膚，肌(ji)肉(rou);M-22FMOC-L-谷酰胺(an)25克(ke)

PPARG Others Human 人(ren) PPARG / Nr1c3
實(shi)驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個檢(jian)測(ce)過程應嚴格按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)要求(qiu)分別在試(shi)劑準備區、樣(yang)本(ben)處理(li)區和PCR擴增區進行操(cao)作，各(ge)區實(shi)驗服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材應獨立(li)使(shi)用，不(bu)能混(hun)用；實(shi)驗用吸頭(tou)采用帶濾芯吸頭(tou)；樣(yang)本(ben)處理(li)區應配(pei)有(you)生物安全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處理(li)在(zai)生物安全櫃(gui)中(zhong)進(jin)行操(cao)作；三個區應該配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝置。
2. 為避(bi)免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本(ben)處理(li)過程應在0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作，且完成(cheng)實(shi)驗後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機檢(jian)測(ce)；樣(yang)本(ben)處理(li)過程中(zhong)使用的器(qi)具(ju)耗(hao)材應經過無(wu)核(he)酶(mei)處理(li)。

3. 每次實(shi)驗應該設(she)置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑盒(he)所有(you)試(shi)劑在使用前應該在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分融(rong)化混勻，並應瞬時(shi)離(li)心。
5. 試(shi)劑盒(he)內(nei)所配(pei)陰(yin)性(xing)和陽(yang)性對(dui)照(zhao)在(zai)壹(yi)次使(shi)用前應全部轉移(yi)至標(biao)本(ben)準備(bei)區，並單獨存放。
6. 為防止(zhi)熒(ying)光幹擾(rao)，應避免裸(luo)手(shou)直接接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管，並應避免在PCR反(fan)應管上(shang)進(jin)行任(ren)何標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增相(xiang)關(guan)參數(shu)應按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)相關要求(qiu)進(jin)行設(she)置；不(bu)同批號試(shi)劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒光定量PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置中不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正，淬(cui)滅(mie)基因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過程中(zhong)產(chan)品的廢(fei)棄(qi)物應該進(jin)行無(wu)害(hai)化(hua)處理(li)後(hou)方(fang)可丟棄。