雷(lei)丸(wan)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

儲存條件：
14℃或－20℃樣(yang)品收集、處理(li)及保存方法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集血(xue)液(ye)後(hou)，3000 轉離心(xin)10 分鐘將血(xue)清(qing)和紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小心地分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸鹽或(huo)肝(gan)素抗凝。3000 轉離心(xin)30 分鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉離心(xin)10 分鐘去除(chu)顆粒(li)和聚合物(wu)。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將組(zu)織(zhi)加入適(shi)量生理鹽水(shui)搗碎。3000 轉離心(xin)10 分鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保存：如(ru)果樣(yang)本收集後(hou)不(bu)及時(shi)檢測(ce)，請(qing)按壹次(ci)用(yong)量分裝，凍(dong)存於-20℃，避免反(fan)復凍(dong)融，在(zai)室溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確保樣(yang)品均勻(yun)地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。

特(te)點：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要提供(gong)病(bing)毒樣(yang)品。
2. 根據地黃(huang)保守(shou)序列(lie)設計的專(zhuan)壹(yi)性(xing)引(yin)物(wu)，與相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無(wu)交叉(cha)反(fan)應。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達到(dao)幾(ji)百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹管式熒(ying)光定(ding)量 PCR 檢測(ce)，避免後(hou)續(xu)汙染。
5. 本試(shi)劑(ji)盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系(xi)的熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本產(chan)品只適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)。

使用(yong)方法(fa)：
壹、樣(yang)品采集(ji)：
1、食品樣(yang)品：樣(yang)品的采集(ji)與預培(pei)養(yang)按照(zhao)樣(yang)品的采集(ji)與預培(pei)養(yang)按照(zhao)《食品衛(wei)生微生物(wu)學檢驗阪(ban)崎腸(chang)桿菌檢驗要求進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品：用(yong)無(wu)菌註(zhu)射器(qi)抽取受檢者靜脈(mai)血(xue)2mL，註入無(wu)菌EDTA2Na(或檸檬(meng)酸鈉)抗凝管，立即混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便樣(yang)品：取糞(fen)便置於(yu)滅(mie)菌的收集管中(zhong)送(song)檢。
4、病竈部(bu)位(wei)樣(yang)品：取發(fa)病(bing)部(bu)位(wei)新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物(wu)、粘液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀釋 PCR 陽性(xing)對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋度(du)為例(li)）
1. 註意：由(you)於(yu)標(biao)準品濃度(du)非(fei)常(chang)高，因(yin)此下(xia)列(lie)稀釋操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要在(zai)獨立的區(qu)域(yu)進(jin)行(xing)，千萬不(bu)能(neng)汙染樣(yang)品或本試(shi)劑(ji)盒的其他(ta)成分）。為增加產(chan)品穩(wen)定(ding)性(xing)和避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳(chuan)染性(xing)病原(yuan)，本產(chan)品不(bu)提供(gong)活(huo)體(ti)樣(yang)品做陽性(xing)對照(zhao)，只(zhi)提供(gong)可(ke)以(yi)直接使(shi)用(yong)的 DNA段作為陽性(xing)對照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分別加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板(ban)稀釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
5. 換槍(qiang)頭，在(zai) 6 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)(上步(bu)稀釋所(suo)得(de))，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
6. 換槍(qiang)頭，在(zai) 5 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)到(dao) 5 號(hao)管中(zhong)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
7. 重復上面(mian)的操(cao)作(zuo)直到得(de)到 6 個稀釋度(du)的陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
註：上述(shu)樣(yang)品建議(yi)經過(guo)增菌後(hou)，收集培養(yang)物(wu)用(yong)於(yu)檢測(ce)。 
二、DNA提取(qu)：
可(ke)采用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒配備的DNA抽提液(ye)，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明進(jin)行(xing)DNA核(he)酸的粗提。也(ye)可(ke)采購上(shang)海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科(ke)技有(you)限(xian)公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的DNA提取(qu)試(shi)劑(ji)盒(過柱法(fa)-熒(ying)光配套(tao))或其他(ta)合適的商(shang)業化(hua)產(chan)品，並按(an)照(zhao)相應試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培養物(wu)：取液(ye)體(ti)培養物(wu)100μL加到1.5mL無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清(qing)，加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培養物(wu)：挑(tiao)取單(dan)克隆菌落與50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便樣(yang)品：挑(tiao)取米粒大(da)小糞(fen)便於(yu)滅(mie)菌離(li)心管中(zhong)，加入0.5mL生理鹽(yan)水(shui)，振蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心3分鐘，棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
4、其他(ta)液體(ti)標本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
註：陽性(xing)對照(zhao)和陰(yin)性(xing)對照(zhao)為已經(jing)抽(chou)提好(hao)的核(he)酸(無(wu)需提取(qu))，直接取(qu)5μL加入到(dao)反(fan)應體(ti)系(xi)中(zhong)即可(ke)。由(you)於陽性(xing)對照(zhao)濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao)，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品制(zhi)備(bei)區域(yu)加入陽性(xing)對照(zhao)。 
HCMEC-c 人(ren)類心臟(zang)微血(xue)管內皮(pi)細胞(bao)(HCMEC) 500,000cells 腦靜脈(mai)血(xue)管平(ping)滑肌細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)（標準品）Hydrocortisone質量規(gui)格：HPLC>98%,標準品

神(shen)經膠(jiao)質細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)富(fu)馬(ma)酸伊布(bu)利特(te)Ibutilide fumarate 質量規(gui)格：>99%,BR

SORCS1 Others Human 人(ren) SORCS1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 富(fu)馬(ma)酸伊布(bu)利特(te)(標準品)Ibutilide fumarate 質量規(gui)格：HPLC≥98%,標準品

Oregon vole 俄勒岡地鼠硫(liu)酸異帕(pa)米星(xing)Isepamicine Sulphate質量規(gui)格：含量≥670µg/mg

豬(zhu)腎細胞(bao);PK(15)蓓(bei)薩(sa)羅丁;貝(bei)沙羅汀(ting)Bexarotene質量規(gui)格：>99%
RK2 Others Human 人(ren) RK2 / k-B / KB 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 2-(4-甲氧苯(ben)基(ji))-4,6-雙(shuang)(三氯(lv)甲(jia)基(ji)) -1,3,5-三嗪(qin)(>98.0%(GC))2-(4-Methoxyphenyl)-4,6-bis(trichloromethyl)-1,3,5-triazine質量規(gui)格：>98.0%(GC)

恒河猴胚(pei)腎細胞(bao);FRhK-4 [FRhK4]三苯(ben)基(ji)溴化(hua)鋶(>98.0%(T))Triphenylsulfonium Bromide質量規(gui)格：>98.0%(T)

AFM Others Human 人(ren) AFM / Afamin 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 2-溴咪(mi)唑(zuo)並[1,2-a]吡嗪(qin)6-Bromoimidazo[1,2-a]pyrazine質量規(gui)格：>98%

小腸平(ping)滑肌細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)1,2-1,2-Propanediol質量規(gui)格：AR,分析

NCI-H209細胞(bao)，人(ren)小細胞(bao)肺(fei)癌(ai) 人(ren)癌抗雌(ci)激(ji)素(su)耐(nai)藥(yao)株,LCC9細胞(bao) 上皮(pi)細胞(bao)生(sheng)長(chang)添加物(wu)MEpiCGSTBB(4,5,6,7-四溴-1H-苯並三唑(zuo))TBBT;NSC 231634質量規(gui)格：>98%,蛋(dan)白(bai)激酶抑制(zhi)劑(ji)
NCI-H716(人(ren)結直腸腺(xian)癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 MDA-MB-231(癌細胞(bao))/氨(an)芐(bian)(標準品)質量規(gui)格：含量測(ce)定(ding)Ampicillin Trihydrate

CL-0424RK1(大(da)鼠腎細胞(bao))5×106cells/瓶×2阿替美(mei)唑(zuo)鹽酸鹽質量規(gui)格：>99%,BRAtipamezole HCl

ICOSLG Others Human 人(ren) ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 阿替美(mei)唑(zuo)鹽酸鹽(標準品)質量規(gui)格：>98%,標準品Atipamezole HCl

人(ren)內根殼細胞(bao)RNAHHIRSC miRNA5 μg阿糖胞(bao)苷(gan)（標(biao)準(zhun)品）質量規(gui)格：HPLC>99%,標準品Cytarabine

QBC939細胞(bao)，人(ren)膽(dan)管癌細胞(bao) 褐鼠胰(yi)島(dao)素(su)瘤上(shang)皮(pi)細胞(bao),RIN-m細胞(bao) NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xi)胞(bao)系(xi)質量規(gui)格：>98.5%,USP31,BR,可(ke)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)Dacarbazine
雷(lei)丸(wan)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)人(ren)羊(yang)膜上皮(pi)細胞(bao)RNAHAmEpiC miRNA5 μg雌激素(su)酮硫酸鹽，去(qu)氫表(biao)雄(xiong)酮硫酸鈉質量規(gui)格：>98%Dehydroepiandrosterone-3-sulfate

SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 纈(xie)鹽酸鹽 質量規(gui)格：>99%,USPValganciclovir

SV40轉化(hua)的非(fei)洲綠(lv)猴(hou)腎細胞(bao);COS-1肌醇質量規(gui)格：>99%,BRIsitol

CL187/CCL187細胞(bao)，人(ren)大(da)腸癌(ai)細(xi)胞(bao) 人(ren)色(se)素(su)
實驗流程(cheng)：
1. 整個檢測(ce)過程應(ying)嚴(yan)格按照(zhao)本說(shuo)明書(shu)要求分別在(zai)試(shi)劑(ji)準備(bei)區(qu)、樣(yang)本處理(li)區和PCR擴(kuo)增區進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各區(qu)實驗服、儀(yi)器(qi) 、耗材應(ying)獨立使(shi)用(yong)，不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)；實驗用(yong)吸頭采用(yong)帶(dai)濾(lv)芯吸頭；樣(yang)本處理(li)區應配有(you)生物(wu)安(an)全櫃(gui)，樣(yang)本處理(li)在(zai)生物(wu)安(an)全櫃(gui)中(zhong)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三個區應該配有(you)紫(zi)外線殺(sha)菌裝(zhuang)置。
2. 為避免(mian)RNA降解(jie)，樣(yang)本處理(li)過程應在(zai)0-4℃條件下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完成(cheng)實驗後(hou)立(li)即上(shang)機(ji)檢測(ce)；樣(yang)本處理(li)過程中(zhong)使(shi)用(yong)的器(qi)具耗材應(ying)經過(guo)無(wu)核(he)酶處理(li)。

3. 每次(ci)實驗應該(gai)設(she)置陰(yin)、陽性(xing)對照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)在(zai)使用(yong)前應(ying)該在(zai)常溫(wen)下(xia)充(chong)分融化(hua)混勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬時離(li)心。
5. 試(shi)劑(ji)盒內(nei)所(suo)配陰性(xing)和陽性(xing)對照(zhao)在(zai)壹次(ci)使用(yong)前應(ying)全部(bu)轉移至(zhi)標本準(zhun)備(bei)區，並(bing)單獨存放。
6. 為防止熒(ying)光幹擾，應(ying)避(bi)免裸手(shou)直接接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管，並應避免(mian)在(zai)PCR反(fan)應管上進(jin)行(xing)任(ren)何標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴(kuo)增相關(guan)參數(shu)應按(an)照(zhao)本說(shuo)明書(shu)相(xiang)關(guan)要求進(jin)行(xing)設(she)置；不(bu)同批(pi)號(hao)試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光定(ding)量PCR儀參數(shu)設置中(zhong)不(bu)選ROX校正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過程(cheng)中(zhong)產(chan)品的廢(fei)棄(qi)物(wu)應該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處理(li)後(hou)方可(ke)丟(diu)棄(qi)。