佛(fo)手(shou)探(tan)針法PCR鑒(jian)定試劑盒(he)*

實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個(ge)檢測過(guo)程(cheng)應嚴格按照(zhao)本(ben)說(shuo)明書要求分(fen)別(bie)在試劑準(zhun)備(bei)區、樣(yang)本(ben)處(chu)理區和(he)PCR擴(kuo)增區進(jin)行操作，各區實驗服(fu)、儀(yi)器 、耗材(cai)應獨立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能混用；實驗用(yong)吸頭采用(yong)帶(dai)濾芯吸頭；樣(yang)本(ben)處(chu)理區應配(pei)有生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃，樣(yang)本(ben)處(chu)理在(zai)生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃中(zhong)進(jin)行操作；三個(ge)區應該配(pei)有紫(zi)外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解，樣(yang)本(ben)處(chu)理過(guo)程(cheng)應在0-4℃條件下操作，且完成實驗後立(li)即上(shang)機檢測；樣(yang)本(ben)處(chu)理過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)器(qi)具耗材(cai)應經過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理。
3. 每(mei)次實驗應該設置陰(yin)、陽性對(dui)照(zhao)。
4. 試劑盒(he)所(suo)有試劑在(zai)使(shi)用(yong)前應該在常溫(wen)下充分(fen)融化混勻(yun)，並應瞬時(shi)離(li)心。
5. 試劑盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰性和(he)陽性對(dui)照(zhao)在壹(yi)次使(shi)用(yong)前應全(quan)部(bu)轉移(yi)至(zhi)標本(ben)準(zhun)備(bei)區，並單獨存放。
6. 為防(fang)止熒光(guang)幹擾，應避免裸(luo)手(shou)直(zhi)接接觸(chu)PCR反應管，並應避免在(zai)PCR反應管上(shang)進行任何標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參數(shu)應按照(zhao)本(ben)說(shuo)明書相(xiang)關(guan)要求進(jin)行設置；不(bu)同批號試劑不(bu)能混用。
8. ABI系列(lie)熒光(guang)定量(liang)PCR儀(yi)參數(shu)設置中(zhong)不(bu)選ROX校正，淬(cui)滅基因選擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產品(pin)的(de)廢(fei)棄物(wu)應該進行無(wu)害(hai)化處(chu)理後方可丟(diu)棄。

特點(dian)：
1. 即開(kai)即用，用戶(hu)只(zhi)需(xu)要提供病毒(du)樣品(pin)。
2. 根據地(di)黃(huang)保(bao)守序列設(she)計的(de)專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物(wu)，與相(xiang)關(guan)病毒(du)無(wu)交叉(cha)反(fan)應。
3. 靈敏度(du)可以(yi)達(da)到(dao)幾百拷貝(bei)/反應。
4. 壹(yi)管式熒光(guang)定量(liang) PCR 檢測，避(bi)免後續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反應體系的(de)熒光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用於科(ke)研，不(bu)能用於臨床診(zhen)斷(duan)。
使(shi)用(yong)方法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采集(ji)：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采集(ji)與預培養按照(zhao)樣品(pin)的(de)采集(ji)與預培養按照(zhao)《食品(pin)衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學檢驗阪(ban)崎腸(chang)桿菌(jun)檢驗要求進(jin)行。
2、血液樣品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射器抽(chou)取(qu)受檢者靜(jing)脈(mai)血2mL，註入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗(kang)凝管，立即混勻(yun)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：取糞(fen)便(bian)置於滅菌(jun)的(de)收集(ji)管中(zhong)送(song)檢。
4、病竈(zao)部位樣品(pin)：取發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出物(wu)、粘液膿血送(song)檢。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀釋(shi)度為例）
1. 註意(yi)：由(you)於標準(zhun)品(pin)濃度(du)非(fei)常高，因此下列稀(xi)釋(shi)操作壹(yi)定要在獨立(li)的(de)區域進(jin)行，千(qian)萬(wan)不(bu)能汙染(ran)樣品(pin)或本(ben)試劑盒(he)的(de)其(qi)他成分）。為增加(jia)產品(pin)穩定性和(he)避(bi)免擴(kuo)散傳(chuan)染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產品(pin)不提(ti)供(gong)活(huo)體樣(yang)品(pin)做陽性對(dui)照(zhao)，只提(ti)供(gong)可以(yi)直接(jie)使(shi)用(yong)的(de) DNA段(duan)作為陽性對(dui)照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個(ge)離(li)心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭(tou)分(fen)別加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模板稀(xi)釋(shi)液（用帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)，下同）。
4. 在 7 號管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)(上(shang)步稀釋(shi)所(suo)得(de))，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)到 5 號管中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
7. 重復(fu)上(shang)面(mian)的(de)操(cao)作直到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀釋(shi)度的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
註：上(shang)述(shu)樣品(pin)建議經過(guo)增菌(jun)後，收集(ji)培養物用(yong)於檢測。 
二、DNA提取：
可采用(yong)PCR試劑盒(he)配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提液，按以(yi)下說(shuo)明進行DNA核(he)酸(suan)的(de)粗(cu)提。也可采購(gou)上(shang)海(hai)澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科技有限公(gong)司(si)生(sheng)產的(de)DNA提取試劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒光(guang)配(pei)套(tao))或其(qi)他合適的(de)商(shang)業(ye)化產品(pin)，並按照(zhao)相(xiang)應試劑盒(he)說(shuo)明進行操作。
1、液體培(pei)養物：取(qu)液體培(pei)養物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心管中(zhong)，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸棄上(shang)清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上(shang)清5μL進行PCR反應。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物：挑(tiao)取(qu)單克(ke)隆菌(jun)落與50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上(shang)清5μL進行PCR反應。
3、糞便(bian)樣品(pin)：挑取(qu)米粒大小糞(fen)便(bian)於滅菌(jun)離(li)心管中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混勻(yun)，13000rpm離(li)心3分鐘(zhong)，棄上(shang)清，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上(shang)清5μL進行PCR反應。
4、其(qi)他液體標本(ben)：取標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄上(shang)清，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上(shang)清5μL進行PCR反應。
註：陽性對(dui)照(zhao)和陰(yin)性對(dui)照(zhao)為已(yi)經抽(chou)提(ti)好的(de)核(he)酸(suan)(無(wu)需(xu)提取)，直接取(qu)5μL加(jia)入(ru)到(dao)反應體系中(zhong)即可。由(you)於陽性對(dui)照(zhao)濃度(du)較(jiao)高，建議在樣(yang)品(pin)制備(bei)區域加(jia)入(ru)陽性對(dui)照(zhao)。 
HEH 人(ren)胚(pei)胎心臟(zang)組(zu)織來(lai)源(yuan)細(xi)胞群(qun)勃(bo)龍(long)醋(cu)酸酯 Revalor-H Trenbolone acetate質量(liang)規格(ge)：>98%,BR,可用(yong)於細(xi)胞培(pei)養

CM-R083大鼠(shu)滑膜(mo)細(xi)胞*培(pei)養基100mL(標準(zhun)品(pin))Silibinin質量(liang)規格(ge)：HPLC>97%，標準(zhun)品(pin)

NCI-N87 [N87]人(ren)胃(wei)癌(ai)細胞Silibinin質量(liang)規格(ge)：>97%,BR

EB病毒(du)轉化的(de)人(ren)B細胞;KMY0928 人(ren)前脂肪細胞*培(pei)養基 100mL依澤(ze)替(ti)米貝(bei);依折麥(mai)布Ezetimibe質量(liang)規格(ge)：>99%

小鼠(shu)星形膠(jiao)質細(xi)胞MA依澤(ze)替(ti)米貝(bei);依折麥(mai)布(標準(zhun)品(pin))Ezetimibe質量(liang)規格(ge)：HPLC>99%,標準(zhun)品(pin)
L W-3A 小鼠(shu)皮下結締組(zu)織細(xi)胞羥(qiang)基Hydroxy Bosentan質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

CM-H067人(ren)腎(shen)系膜(mo)細(xi)胞*培(pei)養基100mLN-去甲(jia)基N-Desmethyl Clarithromycin質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

B16-F10, 小鼠(shu)色(se)素瘤高轉移(yi)細胞阿(e)糖胞苷(gan) 5‘-單1酸鹽Cytarabine 5'-Mophosphate質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

人(ren)卵(luan)巢(chao)畸(ji)胎瘤細胞;PA-1 人(ren)視網膜(mo)muller細胞*培(pei)養基 100mL-d6Dacarbazine-d6質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

人(ren)表(biao)皮色(se)素細(xi)胞-淺色(se)素cDNAHEM-l cDNAβ-D-葡(pu)萄(tao)糖苷Dasatinib β-D-Glucuronide質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)
人(ren)表(biao)皮色(se)素細(xi)胞-中(zhong)色(se)素(HEM)( 5×105 ) MN-c, 小鼠(shu)皮質神(shen)經元(yuan) Mouse質量(liang)規格(ge)：>98.0%,可用(yong)於細(xi)胞培(pei)養Riimin

CM-H008人(ren)氣管上(shang)皮細胞*培(pei)養基100mL(標準(zhun)品(pin))質量(liang)規格(ge)：>98%,標準(zhun)品(pin)Riimin

ADAM17 Others Rat 大鼠(shu) ADAM17 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) （標準(zhun)品(pin)）質量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)Bicalutamide

原(yuan)代神(shen)經膠(jiao)質細(xi)胞特(te)制基礎培(pei)養基Many types of cells包裝(zhuang)：500/250/100ml質量(liang)規格(ge)：>98.5%,USP,可用(yong)於細(xi)胞培(pei)養Busulfan/Myleran

6T-CEM細胞，人(ren)T細胞白(bai)血病(bing)細(xi)胞 綠色(se)熒光(guang)蛋(dan)白(bai)標記(ji)小鼠(shu)子細(xi)胞,U14-GFP細胞 前脂肪細胞分(fen)化培養基PADM-prf（標準(zhun)品(pin)）質量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)Busulfan/Myleran
佛(fo)手(shou)探(tan)針法PCR鑒定試劑盒(he)*人(ren)成纖維(wei)細(xi)胞-胎兒(er)總(zong)RNAHDF-f NA絞股(gu)藍皂(zao)苷(gan)XLIX(標準(zhun)品(pin))質量(liang)規格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品(pin)Gypeside XLIX

KIT Others Rat 大鼠(shu) KIT / c-KIT 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) YM-201636質量(liang)規格(ge)：>98%,PIKfyve抑制劑YM201636

微血管內皮細胞*培(pei)養基 100mL金石蠶(can)苷(gan)（標準(zhun)品(pin)）質量(liang)規格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品(pin)Poliumoside

VERO E6細胞，猴腎(shen)細(xi)胞系 Lec1(卵(luan)巢(chao)細(xi)胞) 小鼠(shu)結締組(zu)織L細胞株(zhu)929克(ke)隆;L-9
儲存條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理及(ji)保(bao)存方法(fa)
1. 血清：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素的(de)試管，操作過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免任何細胞刺(ci)激，收集(ji)血液後，3000 轉離(li)心10 分鐘(zhong)將(jiang)血清和紅(hong)細胞迅(xun)速小心地分(fen)離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)或肝素抗(kang)凝。3000 轉離(li)心30 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
3. 細胞上(shang)清液：3000 轉離(li)心10 分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒和聚(ju)合物。
4. 組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加(jia)入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000 轉離(li)心10 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
5. 保存：如(ru)果樣本(ben)收集(ji)後不(bu)及(ji)時(shi)檢測，請(qing)按壹(yi)次用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍存於-20℃，避免反(fan)復(fu)凍融，在室溫(wen)下解凍並確(que)保樣(yang)品(pin)均勻(yun)地充(chong)分(fen)解(jie)凍。