香櫞探(tan)針法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說明(ming)書

實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程應(ying)嚴格按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書要(yao)求分別在試劑準備區(qu)、樣本處理(li)區和PCR擴(kuo)增區進行(xing)操作，各區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立(li)使用(yong)，不(bu)能(neng)混用(yong)；實(shi)驗(yan)用(yong)吸(xi)頭采(cai)用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭；樣本處理(li)區應(ying)配(pei)有(you)生(sheng)物(wu)安全櫃，樣本處理(li)在生(sheng)物(wu)安全櫃中(zhong)進行(xing)操作；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本處理(li)過(guo)程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操作，且完成實驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機檢(jian)測；樣本處理(li)過(guo)程中(zhong)使用(yong)的(de)器具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處理(li)。
3. 每(mei)次實驗(yan)應(ying)該(gai)設(she)置(zhi)陰、陽性對照(zhao)。
4. 試劑盒所有(you)試劑在使用(yong)前(qian)應(ying)該在(zai)常溫(wen)下充分融(rong)化(hua)混勻，並(bing)應瞬(shun)時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試劑盒內(nei)所配(pei)陰性和陽性對照(zhao)在(zai)壹次使用(yong)前(qian)應(ying)全部(bu)轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備(bei)區，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防止(zhi)熒光(guang)幹擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸手直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管(guan)，並(bing)應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反應(ying)管(guan)上(shang)進行(xing)任(ren)何(he)標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相關參數(shu)應按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書相(xiang)關要(yao)求進行(xing)設(she)置(zhi)；不同批(pi)號試劑不能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)參數(shu)設置(zhi)中不(bu)選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基因(yin)選擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)產(chan)品的(de)廢棄物(wu)應(ying)該進行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處理(li)後方(fang)可(ke)丟棄(qi)。

特點：
1. 即(ji)開即(ji)用(yong)，用(yong)戶只(zhi)需(xu)要(yao)提(ti)供病(bing)毒樣品。
2. 根(gen)據地(di)黃(huang)保(bao)守(shou)序列設計(ji)的(de)專(zhuan)壹性引(yin)物(wu)，與(yu)相關病(bing)毒無交(jiao)叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以(yi)達到幾(ji)百拷(kao)貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹(yi)管式(shi)熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後(hou)續(xu)汙染(ran)。
5. 本試劑盒足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體(ti)系(xi)的(de)熒光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本產(chan)品只(zhi)適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研，不(bu)能(neng)用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷。
使用(yong)方(fang)法：
壹(yi)、樣品采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品樣品：樣品的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培(pei)養按照(zhao)樣品的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培(pei)養按照(zhao)《食(shi)品衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢驗(yan)阪(ban)崎腸(chang)桿菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求進行(xing)。
2、血(xue)液樣品：用(yong)無(wu)菌註(zhu)射器(qi)抽取(qu)受(shou)檢者(zhe)靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞(fen)便樣品：取(qu)糞(fen)便置於滅(mie)菌的(de)收(shou)集(ji)管中(zhong)送檢。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位樣品：取(qu)發病(bing)部(bu)位新鮮滲出物(wu)、粘液膿(nong)血送檢。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽性對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度為例(li)）
1. 註(zhu)意：由(you)於標準(zhun)品(pin)濃(nong)度非常高(gao)，因(yin)此(ci)下列稀釋(shi)操作壹定(ding)要(yao)在(zai)獨立(li)的(de)區域(yu)進行(xing)，千(qian)萬(wan)不能(neng)汙染(ran)樣品或(huo)本試劑盒的(de)其(qi)他(ta)成分）。為(wei)增加(jia)產(chan)品穩定(ding)性和避(bi)免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染(ran)性病(bing)原(yuan)，本產(chan)品不提供活(huo)體(ti)樣品做(zuo)陽性對照(zhao)，只(zhi)提(ti)供可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)使用(yong)的(de) DNA段(duan)作為陽性對照(zhao)。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭分別加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板稀釋(shi)液（用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 6 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所得)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 5 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)到 5 號管(guan)中，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復上(shang)面的(de)操作直(zhi)到得到 6 個(ge)稀釋(shi)度的(de)陽性對照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣品建(jian)議(yi)經過(guo)增(zeng)菌後，收(shou)集(ji)培(pei)養物(wu)用(yong)於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試劑盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液，按以(yi)下說(shuo)明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的(de)粗提(ti)。也可(ke)采(cai)購上(shang)海(hai)澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科(ke)技有(you)限公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提(ti)取(qu)試劑盒(過(guo)柱(zhu)法-熒光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)商業(ye)化(hua)產(chan)品，並(bing)按照(zhao)相(xiang)應試劑盒說明(ming)進行(xing)操作。
1、液體(ti)培(pei)養物(wu)：取(qu)液體(ti)培(pei)養物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸(xi)棄(qi)上(shang)清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物(wu)：挑取(qu)單(dan)克(ke)隆(long)菌(jun)落與50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便樣品：挑取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞便於滅菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘(zhong)，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽性對照(zhao)和陰性對照(zhao)為(wei)已經抽(chou)提好的(de)核(he)酸(suan)(無(wu)需(xu)提(ti)取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由於(yu)陽性對照(zhao)濃(nong)度較高(gao)，建議(yi)在樣品制(zhi)備(bei)區域加(jia)入(ru)陽性對照(zhao)。 
Promocell C-27438 Adipocyte Nuition Medium, 脂(zhi)肪細(xi)胞營養培(pei)養基(即(ji)用(yong)型(xing)) 500ml維(wei)多利(li)亞藍B,堿(jian)性藍 26Victoria blue B質(zhi)量規格(ge)：BS

小鼠心(xin)肌細(xi)胞MCM考(kao)馬斯亮藍R250Brilliant Blue R質(zhi)量規格(ge)：BS

CD8B Others Human 人(ren) CD8B / P37 / LEU2 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao)) 考(kao)馬斯亮藍G250Brilliant Blue G質(zhi)量規格(ge)：BS

人(ren)肺(fei)細(xi)胞;HLF-a溴(xiu)酚(fen)藍Bromophel blue質(zhi)量規格(ge)：IND

大(da)鼠肝(gan)細(xi)胞;BRL 膽(dan)囊(nang)癌(ai)細(xi)胞，GBC-SD細(xi)胞 CBRH7919細(xi)胞，大(da)鼠肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(wistar大(da)鼠)固(gu)藍BFast Blue B Salt質(zhi)量規格(ge)：BS
CDH4 Others Human 人(ren) R-Cadherin / CDH4 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao)) 半鈣鹽Oxytetracycline hemicalcium salt質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進口(kou)

人(ren)扁(bian)桃體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞HTEpiCN-羥(qiang)乙酰神(shen)經氨(an)酸(suan)N-Glycolylneuraminic Acid質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進口(kou)

HA Others H5N9 甲(jia)型(xing)流(liu)感(gan) H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血(xue)凝素(su) (Hemagglutinin / HA) 桿狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao)) N,N-二(er)去甲(jia)基(ji)鹽酸(suan)曲(qu)美布汀(ting)-d5N,N-Didesmethyl Trimebutine-d5 質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進口(kou)

雪(xue)羊皮(pi)膚細(xi)胞;SSHS1N,N-二(er)去甲(jia)基(ji)鹽酸(suan)曲(qu)美布汀(ting)N,N-Didesmethyl Trimebutine 質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進口(kou)

倉鼠源細(xi)胞 管(guan)癌細(xi)胞，T-47D細(xi)胞 B6YH4細(xi)胞，雜交(jiao)瘤細(xi)胞支(zhi)原體(ti)陽性N-去(qu)甲(jia)基(ji)鹽酸(suan)曲(qu)美布汀(ting)N-Demethyl Trimebutine 質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進口(kou)
人(ren)表皮(pi)色素(su)細(xi)胞-淺(qian)色素(su)(HEM)( 5×105 ) mCF, 小鼠心(xin)臟成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞 Mouse醫用(yong)凡(fan)士林(lin)質(zhi)量規格(ge)：BRVaseline

CM-H017人(ren)上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養基100mL原(yuan)釩(fan)酸鈉質(zhi)量規格(ge)：>96%,BR orthovanadate

ICOS Others Rat 大(da)鼠 ICOS / AILIM / CD278 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao)) 蝙蝠(fu)葛(ge)諾林(lin)堿(jian)(標(biao)準品)質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品Dauriline

主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)氯化(hua)木蘭花堿(jian)質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品Magflorine chloride

NB4細(xi)胞，人(ren)急性早幼粒(li)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞 綠(lv)色熒光(guang)蛋白(bai)標(biao)記(ji)小鼠前(qian)胃(wei)癌細(xi)胞,MFC-GFP細(xi)胞 成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞培(pei)養基FM-sf-prf木蘭花堿(jian)質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品Magflorine
香櫞探(tan)針法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說明(ming)書人(ren)內(nei)皮(pi)細(xi)胞裂(lie)解物(wu)HDLECL千(qian)金(jin)子(zi)素(su)L1（標(biao)準品）質(zhi)量規格(ge)：供含量測定(ding)用(yong)Euphorbiasteroid

GFRA1 Others Rat 大(da)鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao)) 異(yi)型(xing)南(nan)五(wu)味子(zi)丁素(su)（標準(zhun)品）質(zhi)量規格(ge)：含量測定(ding)heteroclitin D

人(ren)侵(qin)襲性脈(mai)絡(luo)膜色素(su)瘤細(xi)胞;MuM-2C紫(zi)蘇(su)醛（標準(zhun)品）質(zhi)量規格(ge)：含量測定(ding)(-)-PERILLALDEHYDE

9204細(xi)胞，人(ren)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞 大(da)鼠嗜堿(jian)性細(xi)胞白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞,RBL-2H3細(xi)胞 山(shan)羊腎上(shang)皮(pi)樣細(xi)胞;DG-K1相(xiang)思(si)子(zi)堿
儲(chu)存條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品收(shou)集(ji)、處理(li)及保(bao)存方(fang)法
1. 血(xue)清：使用(yong)不(bu)含熱原(yuan)和內(nei)毒素(su)的(de)試管，操作過(guo)程中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收(shou)集(ji)血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)將血清(qing)和紅細(xi)胞迅(xun)速小心(xin)地(di)分離(li)。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
3. 細(xi)胞上(shang)清液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)去除顆粒(li)和聚合物(wu)。
4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將組(zu)織加(jia)入(ru)適(shi)量生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
5. 保(bao)存：如果樣本收(shou)集(ji)後不(bu)及時檢測，請按壹(yi)次用(yong)量分裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下解凍並(bing)確保(bao)樣品均(jun)勻地(di)充(chong)分解(jie)凍。