幹(gan)姜染料法(fa)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒說明書

實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測過程(cheng)應(ying)嚴格按照本說明書要(yao)求(qiu)分別在(zai)試劑(ji)準(zhun)備區、樣(yang)本處理(li)區和(he)PCR擴增(zeng)區進行操作(zuo)，各區實驗服(fu)、儀器(qi) 、耗材(cai)應(ying)獨立使用(yong)，不(bu)能(neng)混用(yong)；實驗用(yong)吸頭采用(yong)帶濾(lv)芯吸頭；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區應(ying)配有生(sheng)物安(an)全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在(zai)生(sheng)物安(an)全櫃(gui)中(zhong)進行操作(zuo)；三個(ge)區應(ying)該(gai)配有紫(zi)外(wai)線(xian)殺菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避(bi)免RNA降解(jie)，樣(yang)本處(chu)理(li)過程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條件(jian)下操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實驗後(hou)立即上(shang)機(ji)檢測；樣本(ben)處(chu)理(li)過程(cheng)中(zhong)使用(yong)的器(qi)具耗材(cai)應(ying)經(jing)過無核酶處理(li)。
3. 每次(ci)實驗應(ying)該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽性對照。
4. 試劑(ji)盒所有試劑(ji)在(zai)使用(yong)前應(ying)該(gai)在(zai)常溫下(xia)充(chong)分融(rong)化(hua)混勻，並(bing)應(ying)瞬(shun)時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試劑(ji)盒內(nei)所(suo)配陰(yin)性和(he)陽性對照在(zai)壹次(ci)使用(yong)前應(ying)全部轉(zhuan)移至(zhi)標本準(zhun)備區，並(bing)單獨存(cun)放(fang)。
6. 為防止熒(ying)光幹(gan)擾，應(ying)避(bi)免裸(luo)手直(zhi)接(jie)接(jie)觸PCR反應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避(bi)免在(zai)PCR反應(ying)管(guan)上進行任何標(biao)記。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參(can)數應(ying)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明書相(xiang)關(guan)要(yao)求(qiu)進行設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批號試劑(ji)不(bu)能(neng)混用(yong)。
8. ABI系列熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀參(can)數設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實驗過程(cheng)中(zhong)產品的廢棄物應(ying)該(gai)進行無害(hai)化(hua)處理(li)後方(fang)可(ke)丟(diu)棄。

特點：
1. 即開(kai)即(ji)用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要提供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根據地黃保(bao)守序列設(she)計(ji)的(de)專壹性(xing)引(yin)物，與(yu)相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無交叉反應(ying)。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達(da)到幾百(bai)拷貝/反應(ying)。
4. 壹管(guan)式熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避(bi)免後(hou)續(xu)汙染。
5. 本試劑(ji)盒足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體(ti)系的熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品只(zhi)適用(yong)於科(ke)研，不(bu)能(neng)用(yong)於臨床診(zhen)斷。
使用(yong)方(fang)法：
壹、樣(yang)品采集(ji)：
1、食品樣品：樣品的采集(ji)與(yu)預培(pei)養按照(zhao)樣品的采集(ji)與(yu)預培(pei)養按照(zhao)《食品衛生(sheng)微生(sheng)物學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿菌(jun)檢驗(yan)要求進行。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品：用(yong)無菌(jun)註射(she)器抽取受(shou)檢者靜脈血(xue)2mL，註入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管(guan)，立即混勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌(jun)的收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部(bu)位樣(yang)品：取發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮滲出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍稀(xi)釋(shi)度(du)為例(li)）
1. 註意(yi)：由於標準(zhun)品濃度非(fei)常高，因(yin)此下列稀釋(shi)操(cao)作壹定(ding)要在(zai)獨立的區域(yu)進行，千萬不(bu)能(neng)汙染樣品或本試劑(ji)盒的其他(ta)成(cheng)分）。為增(zeng)加(jia)產(chan)品穩定(ding)性和(he)避免擴散傳染性病(bing)原，本(ben)產品不(bu)提供(gong)活體(ti)樣品做(zuo)陽性對照，只(zhi)提供可(ke)以(yi)直接(jie)使用(yong)的 DNA段作為陽性對照。
2. 標記 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍頭分(fen)別加入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板稀釋液(ye)（用(yong)帶芯(xin)槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充(chong)分震蕩 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換槍頭，在(zai) 6 號管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀(xi)釋(shi)所得(de))，充(chong)分震蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換槍頭，在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分震蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上(shang)面的(de)操(cao)作(zuo)直到得(de)到 6 個(ge)稀(xi)釋度的(de)陽性對照。放(fang)冰上(shang)待(dai)用(yong)。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品建(jian)議(yi)經(jing)過增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集培養物用(yong)於檢測(ce)。 
二、DNA提取：
可(ke)采用(yong)PCR試劑(ji)盒配備的DNA抽提液(ye)，按(an)以(yi)下說明進行DNA核酸(suan)的粗提。也可(ke)采購上(shang)海(hai)澤(ze)葉(ye)生(sheng)物科(ke)技(ji)有限公(gong)司生(sheng)產的(de)DNA提取試劑(ji)盒(過柱(zhu)法-熒(ying)光配套)或其他(ta)合(he)適的(de)商業(ye)化(hua)產品，並(bing)按照(zhao)相應(ying)試劑(ji)盒說明進行操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養物：取液(ye)體(ti)培(pei)養物100μL加到1.5mL無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量(liang)吸棄上清，加入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行PCR反應(ying)。
2、固體培(pei)養物：挑(tiao)取單克(ke)隆(long)菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑取米粒大小(xiao)糞(fen)便(bian)於滅菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，加入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振蕩(dang)混勻，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清，沈澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行PCR反應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標(biao)本：取標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清，沈澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行PCR反應(ying)。
註：陽性對照和(he)陰(yin)性對(dui)照(zhao)為已(yi)經(jing)抽提好的核酸(suan)(無需提取)，直接(jie)取5μL加入(ru)到反應(ying)體(ti)系中(zhong)即可(ke)。由於陽性對照濃度較高，建(jian)議(yi)在(zai)樣品制(zhi)備區域(yu)加入陽性對照。 
HCCC-9810人膽(dan)管(guan)細(xi)胞型肝(gan)癌(ai)細(xi)胞 HCCC-9810 human cholangiocarcinoma cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS酸(suan)棗仁皂苷(gan)B1(標準(zhun)品)Jujuboside B1質量(liang)規格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

TGFB1 Protein Human 重組人 Late TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白(bai) (His 標簽)AProsapogenin A質量(liang)規格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

人髓(sui)核(he)細(xi)胞(HNPC)(5×105) NIH/3T3, 小(xiao)鼠(shu)成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞系 MouseRocilinostat (ACY-1215)ACY1215質量(liang)規格：>98%,選擇(ze)性(xing)組蛋白(bai)脫(tuo)乙(yi)酰酶(mei)(HDAC6)抑制(zhi)劑

小(xiao)鼠(shu)肺(fei)腺癌(ai)低轉(zhuan)移細(xi)胞(VAP33-GFP融(rong)合(he)蛋白(bai)穩(wen)定(ding)過表(biao)達(da));LA1-VAP33-GFP肉(rou)豆蔻酸(suan),十四(si)烷酸(suan)(標準(zhun)品)Myristic acid質量(liang)規格：GC≥98%，標準(zhun)品

TNFRSF13C Others Rat 大鼠(shu) BAFFR / TNFRSF13C 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 肉(rou)豆蔻酸(suan),十四(si)烷酸(suan)Myristic acid質量(liang)規格：≥98%，BR
LL-PK1細(xi)胞，豬(zhu)腎(shen)細(xi)胞 人卵巢癌(ai)細(xi)胞,A2780細(xi)胞 人表(biao)皮(pi)角(jiao)質(zhi)細(xi)胞-裂解(jie)物(wu)HEK-a LDL-天冬(dong)酰胺(an)，壹水(shui)DL-Asparagine monohydrate質量(liang)規格：>99%

非(fei)洲綠(lv)猴(hou)腎(shen)細(xi)胞;VERODL-乳酸(suan)(USP)DL-Lactic acid質量(liang)規格：88~92%，USP

IGFBP4 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) IGFBP4 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 檸檬(meng)酸(suan)三銨(an)Ammonium , tribasic質量(liang)規格：> 98%,AR

牛陀(tuo)螺狀細(xi)胞;BT鉻天青(qing)S(Ind Grade)CAS, Chrome azurol S質量(liang)規格：Ind Grade

MSR1 Others Rat 大鼠(shu) MSR1 / SCARA1 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 5'-三1酸(suan)胞苷(gan)二鈉(na)鹽Cytidine-5'-triphosphate (CTP), di salt質量(liang)規格：>98%,分子(zi)生(sheng)物學(xue)級(ji)
VRK1 Others Human 人 VRK1 桿狀病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 羥(qiang)基(ji)特比(bi)萘(nai)芬質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口Hydroxy Terbinafine

CL-0049CA46(人Butts瘤細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2羥(qiang)基(ji)特比(bi)萘(nai)芬β-D-葡萄(tao)糖(tang)苷(gan)酸(suan)質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口Hydroxy Terbinafine β-D-Glucuronide

Hep G2, 人肝(gan)癌(ai)細(xi)胞系 胰腺(xian)導管(guan)上皮(pi)癌(ai)細(xi)胞,PAN-1細(xi)胞 A3(細(xi)胞白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞)質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口Thymopentin

小(xiao)鼠(shu)胚胎成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(來自(zi)NIH3T3);PA121酸(suan)鹽質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口Tilmicosin phosphate salt

IL1RAP Others Human 人 IL1R3 / IL1RAP 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照) 酞(tai)菁(jing)銅(tong)(II)(β-型)(>90.0%(T))質量(liang)規格：>90.0%(T)Copper(II) Phthalocyanine (β-form)
幹(gan)姜染料法(fa)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒說明書Tca-8113人舌(she)鱗癌(ai)細(xi)胞 Tca-8113 human tongue squamous cell carcinoma 1640+10% FBS酸(suan)性紅(hong)92，英文(wen)名(ming)或(huo)英(ying)文(wen)縮(suo)寫：Phloxine B，級(ji)別：超，規(gui)格：100克(ke)

IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白(bai) (His 標簽)4.4’異亞(ya)炳(bing)基(ji)聯本酚，99+% Bisphqnol c 1980-2-7

NCI-H2452(人間皮(pi)瘤(liu)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 L1210(白(bai)血(xue)病(bing)
儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或－20℃樣品收(shou)集、處理(li)及保(bao)存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清：使用(yong)不(bu)含(han)熱原和(he)內(nei)毒(du)素(su)的(de)試管(guan)，操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避免任(ren)何細(xi)胞刺激(ji)，收(shou)集血(xue)液(ye)後(hou)，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清和(he)紅細(xi)胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地分離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘(zhong)取上清。
3. 細(xi)胞上清液(ye)：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒和(he)聚合(he)物。
4. 組織(zhi)勻漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加入(ru)適量(liang)生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)取上清。
5. 保存(cun)：如果樣(yang)本收(shou)集後不(bu)及時(shi)檢測(ce)，請按壹次(ci)用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍存於-20℃，避免反復(fu)凍融(rong)，在(zai)室溫下(xia)解(jie)凍並(bing)確保(bao)樣品均勻地充(chong)分解(jie)凍。