蛇(she)床子(zi)PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)*

特點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用戶只需要提供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃保(bao)守序列(lie)設計的(de)專(zhuan)壹性(xing)引物(wu)，與相(xiang)關病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可以達(da)到(dao)幾百拷貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹(yi)管式(shi)熒(ying)光(guang)定量 PCR 檢測，避免(mian)後(hou)續汙(wu)染(ran)。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體(ti)系(xi)的(de)熒(ying)光(guang)定量 PCR。
6. 本產(chan)品只適用於(yu)科研(yan)，不能(neng)用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)。

使(shi)用方(fang)法：
壹(yi)、樣(yang)品采集：
1、食(shi)品樣品：樣品的(de)采集與預培(pei)養按(an)照(zhao)樣(yang)品的(de)采集與預培(pei)養按(an)照(zhao)《食(shi)品衛(wei)生(sheng)微生物(wu)學(xue)檢驗(yan)阪崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要求進行。
2、血液樣品：用無(wu)菌(jun)註(zhu)射(she)器(qi)抽取受檢者(zhe)靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬酸鈉)抗(kang)凝管，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞便樣(yang)品：取糞便置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的(de)收(shou)集管中(zhong)送(song)檢。
4、病(bing)竈部(bu)位(wei)樣品：取發(fa)病(bing)部(bu)位(wei)新(xin)鮮滲(shen)出(chu)物(wu)、粘(zhan)液膿血送(song)檢。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例）
1. 註(zhu)意：由於(yu)標(biao)準(zhun)品濃度(du)非常(chang)高，因(yin)此(ci)下列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作(zuo)壹定要在(zai)獨立(li)的(de)區域(yu)進(jin)行(xing)，千萬(wan)不能(neng)汙(wu)染(ran)樣品或本試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其他成(cheng)分(fen)）。為(wei)增(zeng)加產(chan)品穩定性和避免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染性(xing)病(bing)原(yuan)，本產(chan)品不提供(gong)活(huo)體(ti)樣(yang)品做陽性對照(zhao)，只提供(gong)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)使(shi)用的(de) DNA段作(zuo)為(wei)陽性對照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離心管，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液（用帶芯槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換槍頭(tou)，在 6 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)(上(shang)步(bu)稀(xi)釋(shi)所(suo)得(de))，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換槍頭(tou)，在 5 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)到(dao) 5 號管中(zhong)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復上(shang)面的(de)操(cao)作(zuo)直到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣(yang)品建議(yi)經過增(zeng)菌(jun)後(hou)，收(shou)集培(pei)養物(wu)用(yong)於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液，按以下說明進(jin)行DNA核(he)酸的(de)粗提。也可采購上(shang)海澤葉(ye)生(sheng)物(wu)科(ke)技(ji)有限(xian)公(gong)司(si)生產(chan)的(de)DNA提取試劑(ji)盒(he)(過柱法-熒(ying)光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其他合(he)適的(de)商業(ye)化產(chan)品，並(bing)按(an)照(zhao)相(xiang)應(ying)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明進(jin)行操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培(pei)養物(wu)：取液體(ti)培(pei)養物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，8000rpm離心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物(wu)：挑(tiao)取單(dan)克(ke)隆菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞便樣(yang)品：挑取米(mi)粒大(da)小糞便於(yu)滅(mie)菌(jun)離心管中(zhong)，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
4、其他液體(ti)標(biao)本：取標(biao)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽性對照(zhao)和(he)陰性對照(zhao)為(wei)已經(jing)抽提好(hao)的(de)核酸(無(wu)需提取)，直(zhi)接(jie)取5μL加(jia)入(ru)到(dao)反應(ying)體(ti)系(xi)中即(ji)可。由(you)於(yu)陽性對照(zhao)濃度(du)較高，建議(yi)在樣(yang)品制備(bei)區域(yu)加(jia)入(ru)陽性對照(zhao)。 
實驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個檢測過程應(ying)嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)本說(shuo)明書(shu)要求分(fen)別(bie)在試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)本處理(li)區和PCR擴(kuo)增(zeng)區進(jin)行操(cao)作(zuo)，各區(qu)實驗(yan)服、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立(li)使(shi)用，不能(neng)混(hun)用(yong)；實驗(yan)用吸(xi)頭采用帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭；樣本處理(li)區應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)，樣本處理(li)在生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)中進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三個區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫外線殺(sha)菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為(wei)避免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本處理(li)過程應(ying)在(zai)0-4℃條件(jian)下操(cao)作(zuo)，且完(wan)成(cheng)實驗(yan)後(hou)立即(ji)上(shang)機(ji)檢測；樣本處理(li)過程中使(shi)用的(de)器(qi)具耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過無(wu)核(he)酶(mei)處理(li)。
3. 每(mei)次實驗(yan)應(ying)該(gai)設置陰(yin)、陽性對照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下充分(fen)融(rong)化混(hun)勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬時離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性和陽性對照(zhao)在(zai)壹次使(shi)用前(qian)應(ying)全(quan)部(bu)轉移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為(wei)防止熒(ying)光(guang)幹擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手直接接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並(bing)應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反應(ying)管上(shang)進(jin)行任何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關參(can)數(shu)應(ying)按(an)照(zhao)本說(shuo)明書(shu)相關要求進行設置；不同(tong)批(pi)號試劑(ji)不能(neng)混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定量PCR儀(yi)參(can)數(shu)設置中(zhong)不選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過程中產(chan)品的(de)廢棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化處理(li)後(hou)方(fang)可丟(diu)棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收(shou)集、處理(li)及(ji)保存(cun)方(fang)法
1. 血清(qing)：使(shi)用不含熱原(yuan)和(he)內毒素(su)的(de)試管，操(cao)作(zuo)過程中避免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收(shou)集血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和紅細胞迅(xun)速(su)小(xiao)心地(di)分(fen)離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬酸鹽或肝素(su)抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離心30 分(fen)鐘(zhong)取上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液：3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加入(ru)適量生理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)取上清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本收(shou)集後(hou)不及(ji)時檢測，請(qing)按壹(yi)次(ci)用(yong)量分(fen)裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品均勻(yun)地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。
LncaP, 人(ren)前(qian)列(lie)腺癌細胞(bao) Human（標(biao)準(zhun)品）Torasemide質(zhi)量(liang)規格：HPLC法(fa)含量測定

LRRTM4 Others Human 人(ren) LRRTM4 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) Naftopidil di質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

小(xiao)鼠(shu)小腦星形膠質(zhi)細胞(bao)MA-c（標(biao)準(zhun)品）Naftopidil di質(zhi)量(liang)規格：含量測定

KITLG Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) SCF / C-kit ligand 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對照(zhao)) （標(biao)準(zhun)品）Irbesartan質(zhi)量(liang)規格：含量測定

人(ren)胚(pei)皮(pi)膚(fu)成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao);CCC-ESF-1馬(ma)來(lai)酸替加色羅(luo)（標(biao)準(zhun)品）Tegaserod maleate質(zhi)量(liang)規格：UV法(fa)含量測定
QBC-939, 人(ren)膽(dan)管癌細胞(bao) Human柚(you)皮(pi)素(su)-4'-O-β-D-葡(pu)萄(tao)糖苷(gan)酸Naringenin-4'-O-beta-D-Glucuronide質(zhi)量(liang)規格：美國(guo)進(jin)口(kou)

SFTPD Others Cymolgus 食(shi)蟹(xie)猴(hou) SFTPD / COLEC7 / Collectin-7 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) N-羥(qiang)基丁(ding)二(er)(>98%,BR)N-Hydroxysuccinimide質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

人(ren)鼻咽癌細胞(bao);CNE-2Z沒(mei)食子(zi)酸壹水(shui)物(wu)(標(biao)準(zhun)品)Gallic acid mohydrate質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品

IL25 Others Rat 大(da)鼠(shu) Ierleukin 25 / IL25 / IL17E 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 沒(mei)食子(zi)酸壹水(shui)物(wu)Gallic acid mohydrate質(zhi)量(liang)規格：>98%,AR

SD大(da)鼠(shu)骨髓(sui)間質幹細胞(bao) SD rat bone marrow mesenchymal stem cells1-酮(tong)戊(wu)二(er)酸二(er)鈉(na)鹽(yan)(>98%,BR)a-Ketoglutaric acid, di salt, dihydrate質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR
人(ren)表(biao)皮(pi)內(nei)管皮(pi)細(xi)胞(HDLEC)(5×105) 人(ren)星形膠質(zhi)細胞(bao) Human化鉀溶(rong)液(100g/L)質(zhi)量(liang)規格：100g/LPotassium iodide solution

CM-H028人(ren)血管內(nei)皮(pi)細胞*培(pei)養基100mL化鉀溶(rong)液(1/60mol/L(0.1N))質(zhi)量(liang)規格：1/60mol/L(0.1N)Potassium iodide solution

AGA Others Human 人(ren) AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 潮(chao)黴素(su)B(羅(luo)氏原(yuan)裝)質(zhi)量(liang)規格：羅(luo)氏原(yuan)裝,濃度(du)50mg/mlHygromycin B

支(zhi)氣(qi)管上(shang)皮(pi)細胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)芹菜苷(gan); 芹黃苷(gan)質量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品Apiin

293001B細(xi)胞(bao)，Sars蛋白表(biao)達(da)株(zhu) 人(ren)導(dao)管癌細胞(bao),MDA-MB-453細(xi)胞(bao) 口(kou)腔(qiang)角(jiao)質(zhi)細胞培(pei)養基OKM-prf柯伊利(li)素(su)-7-O-葡(pu)萄(tao)糖苷(gan),野(ye)決明苷(gan)質量(liang)規格：HPLC≥97%，標(biao)準(zhun)品Chrysoeriol 7-O-glucoside
蛇(she)床子(zi)PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)*人(ren)整(zheng)合(he)SV40基因(yin)的(de)上皮(pi)細(xi)胞(bao);HBL-100 [HBL100]N-苯基-9-蒽(en)胺(an)(>98.0%(GC))質(zhi)量(liang)規格：>98.0%(GC)N-Phenyl-9-anthramine

LAYN Others Rat 大(da)鼠(shu) Layilin / LAYN 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao))  1-萘(nai)(>98.0%(GC))質(zhi)量(liang)規格：>98.0%(GC)1-Iodonaphthalene

CM-H042人(ren)肝(gan)內(nei)膽(dan)管上(shang)皮(pi)細胞*培(pei)養基100mL苯並(bing)[a]蒽(en)(>98.0%(GC))質(zhi)量(liang)規格：>98.0%(GC)Benz[a]ant