山(shan)楂染料(liao)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說(shuo)明(ming)書

儲(chu)存條(tiao)件：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收(shou)集(ji)、處理(li)及(ji)保存方法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素(su)的試管，操作(zuo)過(guo)程中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集(ji)血液後，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘將血清(qing)和(he)紅細(xi)胞(bao)迅速小(xiao)心地分(fen)離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝(gan)素抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合物(wu)。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將組織(zhi)加入(ru)適(shi)量(liang)生理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本收(shou)集(ji)後不(bu)及(ji)時檢測，請按(an)壹次(ci)用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍存於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復(fu)凍融，在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。

特點(dian)：
1. 即開(kai)即用(yong)，用(yong)戶只需(xu)要提供(gong)病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃保守(shou)序(xu)列設計(ji)的(de)專(zhuan)壹性(xing)引物(wu)，與相(xiang)關(guan)病毒(du)無交(jiao)叉(cha)反應。
3. 靈(ling)敏度(du)可以達(da)到幾(ji)百(bai)拷貝(bei)/反應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒光定量(liang) PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後續(xu)汙(wu)染。
5. 本(ben)試劑盒足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應體(ti)系(xi)的(de)熒光定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研，不能(neng)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷。

使(shi)用(yong)方法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培養按(an)照樣品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培養按(an)照《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢(jian)驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血液樣品(pin)：用(yong)無菌(jun)註射(she)器抽(chou)取(qu)受檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血2mL，註(zhu)入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸鈉(na))抗(kang)凝管，立即混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：取(qu)糞便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集(ji)管中送檢。
4、病竈(zao)部位樣品(pin)：取(qu)發(fa)病部位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿血送檢。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意(yi)：由於(yu)標準品(pin)濃(nong)度(du)非常高，因(yin)此下(xia)列稀(xi)釋(shi)操作(zuo)壹定(ding)要(yao)在(zai)獨立(li)的區(qu)域(yu)進(jin)行(xing)，千(qian)萬(wan)不(bu)能(neng)汙(wu)染樣品(pin)或(huo)本試劑盒的(de)其他(ta)成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加產(chan)品(pin)穩定(ding)性(xing)和避(bi)免(mian)擴散(san)傳(chuan)染性(xing)病原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活(huo)體(ti)樣品(pin)做(zuo)陽性(xing)對照(zhao)，只提(ti)供(gong)可以直(zhi)接使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。
2. 標記 6 個(ge)離(li)心(xin)管，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別加入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板稀(xi)釋(shi)液(ye)（用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)，充分震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 6 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)(上(shang)步稀(xi)釋(shi)所(suo)得(de))，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 5 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)到 5 號(hao)管中，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面的操作(zuo)直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣品(pin)建議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集(ji)培養物用(yong)於(yu)檢(jian)測。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可采(cai)用(yong)PCR試劑盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液，按(an)以下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核(he)酸的粗(cu)提。也可采(cai)購上海(hai)澤葉(ye)生(sheng)物科技有限公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提(ti)取(qu)試劑盒(過(guo)柱法(fa)-熒光配套(tao))或(huo)其他(ta)合適(shi)的商業(ye)化產(chan)品(pin)，並按(an)照相(xiang)應(ying)試劑盒說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培養物：取(qu)液體(ti)培養物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌(jun)離心(xin)管中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量(liang)吸棄(qi)上(shang)清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固(gu)體(ti)培養物：挑取(qu)單克(ke)隆菌(jun)落與50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞便(bian)樣品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒(li)大(da)小(xiao)糞便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離心(xin)管中，加入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘，棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對照(zhao)和陰(yin)性(xing)對照(zhao)為(wei)已(yi)經(jing)抽(chou)提好的核(he)酸(無需(xu)提取(qu))，直(zhi)接取(qu)5μL加(jia)入(ru)到(dao)反應體(ti)系(xi)中(zhong)即可。由於(yu)陽(yang)性(xing)對照(zhao)濃度較(jiao)高(gao)，建議(yi)在(zai)樣品(pin)制備(bei)區(qu)域(yu)加入(ru)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。 
96-C細(xi)胞(bao)，低(di)轉移肺(fei)癌細(xi)胞(bao) 人前列腺癌細(xi)胞(bao),PC-3細(xi)胞(bao) 人膀胱基質(zhi)成纖(xian)維細(xi)胞(bao)總RNAHBdSF NA替(ti)卡(ka)格雷Ticagrelor質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,II晶型(xing)

非洲(zhou)綠猴(hou)腎(shen)細(xi)胞(bao)系/HCV-p7;Vero-HCV-p7替(ti)卡(ka)格雷(標準品(pin))Ticagrelor質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,光(guang)學(xue)度(du)>97%,標準品(pin)

AHSG Others Mouse 小(xiao)鼠 Fetuin-A / AHSG 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) Ramosetron HCl質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BR

小(xiao)鼠網(wang)織(zhi)細(xi)胞(bao)肉瘤(liu);M5076鹽(yan)酸(suan)司(si)維(wei)拉(la)姆(mu)Sevelamer HCl質(zhi)量(liang)規(gui)格：BR

IL5 Others Canine 狗(gou) IL5 桿(gan)狀病毒(du)-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 碳(tan)酸(suan)司(si)維(wei)拉(la)姆(mu)Sevelamer carbonate質(zhi)量(liang)規(gui)格：BR;Binding of  Phosphate 4.0~7.0mmo1/g
人細(xi)胞(bao);Hela S3 [HeLaS3] 大(da)鼠大(da)隱靜脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)*培養基 100mL5-乙(yi)酰(xian)水(shui)楊酸(suan)5-Acetylsalicylic acid質(zhi)量(liang)規(gui)格：美國(guo)進(jin)口(kou)

AtT20 小(xiao)鼠垂體(ti)瘤(liu)細(xi)胞(bao)N-芐(bian)基N-Benzylglycine質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98.0%,BR

VSIG4 Others Human 人 VSIG4 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) Zanamivir質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BR,壹(yi)水(shui)物(wu)

人癌細(xi)胞(bao);MDA-MB-435S(標準品(pin))Zanamivir質(zhi)量(liang)規(gui)格：HPLC≥98.0%,標準品(pin)

IL2RA Others Cymolgus 食(shi)蟹猴(hou) IL2RA 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) /5'-脫氧-5-氟(fu)核(he)苷(gan)Doxifluridine/5-Fluoro-5′-deoxyuridine質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,BR
平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)生長添(tian)加物(wu)-無血清(qing)SMCGS-sf滅(mie)草隆(long)（標準品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析(xi)標準品(pin)Monuron

TE 353.Sk細(xi)胞(bao)，人正常皮(pi)膚(fu)細(xi)胞(bao) 人胚腎(shen)上皮(pi)包裝細(xi)胞(bao),GP2-293細(xi)胞(bao) 原(yuan)代滑膜(mo)皮(pi)細(xi)胞(bao)培養特制添(tian)加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml煙(yan)嘧(mi)磺隆（標準品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析(xi)標準品(pin)Nicosulfuron

山(shan)羊(yang)腎(shen)上皮(pi)樣細(xi)胞(bao);DG-K1鈮(ni)標準溶液(ye)(1000μg/ml)質(zhi)量(liang)規(gui)格：1000μg/mlNiobium standard

REN Others Human 人 RENIN 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 鎳標準溶液(ye)(100μg/mL，基體(ti):1%H3)質(zhi)量(liang)規(gui)格：100μg/mL，基體(ti):1%H3Nickel Standard

CM-M125小(xiao)鼠牙(ya)細(xi)胞(bao)*培養基100mL鉀(jia)標準溶液(ye)(500mg/L,溶(rong)劑：水(shui))質(zhi)量(liang)規(gui)格：500mg/L,溶(rong)劑：水(shui)Potassium standard
山(shan)楂染料(liao)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說(shuo)明(ming)書Hut-78細(xi)胞(bao)，皮(pi)膚(fu)T細(xi)胞(bao)瘤(liu) 人血管平滑肌(ji),T/G細(xi)胞(bao) 人低(di)侵襲性(xing)脈絡(luo)膜色(se)素素(su)瘤(liu)細(xi)胞(bao);OCM-1ASulfo NHS;N-羥(qiang)基硫代琥(hu)珀質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,BRsulfo-NHS

A9(小(xiao)鼠皮(pi)下(xia)結(jie)締組織(zhi)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2亞(ya)甲(jia)蘭(lan),亞(ya)甲(jia)基藍質(zhi)量(liang)規(gui)格：BSMethylene Blue

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 鹽(yan)酸(suan)沃尼妙(miao)林(lin)質(zhi)量(liang)規(gui)格：>97%,BRValnemulin HCl

水(shui)牛皮(pi)膚(fu)成纖(xian)維樣細(xi)胞(bao);WB
實驗(yan)流(liu)程：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測過(guo)程應(ying)嚴(yan)格按(an)照本(ben)說明書要求(qiu)分(fen)別在試劑準備(bei)區(qu)、樣本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操作(zuo)，各(ge)區(qu)實驗(yan)服(fu)、儀器 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用(yong)，不能(neng)混(hun)用(yong)；實驗(yan)用(yong)吸頭采(cai)用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸頭；樣本處理(li)區(qu)應(ying)配有生(sheng)物(wu)安(an)全櫃，樣本處理(li)在(zai)生物安(an)全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該配有(you)紫(zi)外線(xian)殺菌(jun)裝置。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本處理(li)過(guo)程應(ying)在0-4℃條(tiao)件下(xia)操作(zuo)，且完成實驗(yan)後立(li)即上機(ji)檢(jian)測；樣本處理(li)過(guo)程中(zhong)使用(yong)的器具耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無核(he)酶處理(li)。

3. 每次實驗(yan)應(ying)該設置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對照(zhao)。
4. 試劑盒所(suo)有試劑在(zai)使(shi)用(yong)前應(ying)該在常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻(yun)，並應瞬時離(li)心(xin)。
5. 試劑盒內(nei)所(suo)配陰(yin)性(xing)和陽(yang)性(xing)對照(zhao)在壹次使用(yong)前應(ying)全部轉移至(zhi)標本準備(bei)區(qu)，並單獨存(cun)放。
6. 為(wei)防止熒光幹(gan)擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直(zhi)接接觸PCR反應管，並應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反應管上進(jin)行(xing)任(ren)何(he)標記。
7. 儀(yi)器 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參(can)數應按(an)照本(ben)說明書相(xiang)關(guan)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)設(she)置；不(bu)同批(pi)號(hao)試劑不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒光定量(liang)PCR儀(yi)參(can)數設置中(zhong)不選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因(yin)選擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過(guo)程中(zhong)產(chan)品(pin)的(de)廢(fei)棄(qi)物應該進(jin)行(xing)無害(hai)化(hua)處理(li)後方(fang)可丟(diu)棄(qi)。