吳(wu)茱(zhu)萸(yu)染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)保(bao)存

實驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整個檢測過程(cheng)應(ying)嚴格(ge)按(an)照(zhao)本(ben)說明書要(yao)求(qiu)分別(bie)在試劑(ji)準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)本(ben)處理(li)區(qu)和PCR擴增區進(jin)行操(cao)作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立使(shi)用，不(bu)能(neng)混用；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭采用帶(dai)濾芯吸(xi)頭；樣(yang)本(ben)處理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處理(li)在生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)中(zhong)進(jin)行操(cao)作(zuo)；三(san)個區應(ying)該配(pei)有(you)紫外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本(ben)處理(li)過程(cheng)應(ying)在0-4℃條件下(xia)操(cao)作(zuo)，且完成實驗(yan)後(hou)立即(ji)上機檢(jian)測(ce)；樣(yang)本(ben)處理(li)過程(cheng)中(zhong)使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過無(wu)核酶處(chu)理(li)。
3. 每次實驗(yan)應(ying)該設(she)置(zhi)陰(yin)、陽性對照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒(he)所(suo)有(you)試劑(ji)在使用前(qian)應(ying)該在常溫下(xia)充(chong)分(fen)融化混(hun)勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬時離(li)心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配陰(yin)性和(he)陽性對照(zhao)在壹次使(shi)用前(qian)應(ying)全(quan)部轉(zhuan)移至(zhi)標本(ben)準備(bei)區(qu)，並(bing)單獨存放。
6. 為(wei)防(fang)止熒(ying)光幹擾(rao)，應(ying)避免裸(luo)手直(zhi)接接(jie)觸PCR反(fan)應(ying)管，並應(ying)避免在PCR反(fan)應(ying)管上進(jin)行任(ren)何(he)標記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應(ying)按(an)照(zhao)本(ben)說明書相(xiang)關(guan)要(yao)求(qiu)進(jin)行設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)試劑(ji)不(bu)能(neng)混用。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光定量(liang)PCR儀(yi)參數(shu)設置(zhi)中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇None。
9. 實驗(yan)過程(cheng)中(zhong)產(chan)品的(de)廢(fei)棄物應(ying)該進(jin)行無(wu)害(hai)化(hua)處(chu)理(li)後(hou)方可(ke)丟(diu)棄(qi)。

特點：
1. 即開(kai)即用，用戶(hu)只需要(yao)提供病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據地黃保(bao)守序(xu)列(lie)設(she)計的專(zhuan)壹性引(yin)物(wu)，與(yu)相(xiang)關(guan)病毒(du)無(wu)交叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈敏(min)度可(ke)以達(da)到(dao)幾(ji)百拷貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹管式(shi)熒光(guang)定量(liang) PCR 檢測，避免後(hou)續汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑(ji)盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體系的熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品只適(shi)用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。
使用方法：
壹、樣(yang)品(pin)采集：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采集與(yu)預培養(yang)按(an)照(zhao)樣(yang)品(pin)的采集與(yu)預培養(yang)按(an)照(zhao)《食(shi)品(pin)衛生微(wei)生物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿菌(jun)檢驗(yan)要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血液樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射(she)器(qi)抽(chou)取受(shou)檢者靜脈(mai)血2mL，註入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸鈉)抗凝管，立即(ji)混勻(yun)。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集管中(zhong)送(song)檢。
4、病竈部位(wei)樣(yang)品(pin)：取發病部位(wei)新鮮(xian)滲(shen)出物、粘液膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由(you)於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常高，因此(ci)下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操作(zuo)壹定要(yao)在獨立的(de)區域進(jin)行，千萬(wan)不能(neng)汙(wu)染(ran)樣(yang)品(pin)或(huo)本試劑(ji)盒(he)的(de)其他成分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產(chan)品穩定性和(he)避免擴散(san)傳染(ran)性病原，本產(chan)品不(bu)提供活(huo)體樣(yang)品(pin)做(zuo)陽性對照(zhao)，只提供可(ke)以直(zhi)接使(shi)用的(de) DNA段作(zuo)為(wei)陽性對照(zhao)。
2. 標記 6 個離(li)心(xin)管，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯槍頭分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液（用帶(dai)芯槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
5. 換槍頭，在 6 號(hao)管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)(上步稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
6. 換槍頭，在 5 號(hao)管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)到(dao) 5 號(hao)管中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
7. 重(zhong)復上面(mian)的操(cao)作(zuo)直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度的(de)陽性對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
註：上述(shu)樣(yang)品(pin)建議(yi)經(jing)過增菌(jun)後(hou)，收集培(pei)養(yang)物用於(yu)檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提取：
可(ke)采用PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提液，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核酸(suan)的(de)粗(cu)提(ti)。也可(ke)采購(gou)上海澤葉生物(wu)科(ke)技(ji)有(you)限公司生產(chan)的DNA提取試劑(ji)盒(he)(過柱法(fa)-熒光配套(tao))或(huo)其他合適(shi)的(de)商(shang)業(ye)化產(chan)品，並(bing)按(an)照(zhao)相(xiang)應(ying)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)進(jin)行操(cao)作(zuo)。
1、液體培養(yang)物：取液體培養(yang)物100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量(liang)吸(xi)棄上清，加入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體培養(yang)物：挑(tiao)取(qu)單(dan)克(ke)隆(long)菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒大(da)小(xiao)糞(fen)便於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽(yan)水，振(zhen)蕩混勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘，棄上清，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
4、其他液體標本：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
註：陽性對照(zhao)和(he)陰性對照(zhao)為(wei)已經抽提(ti)好(hao)的(de)核酸(suan)(無(wu)需提取(qu))，直(zhi)接取(qu)5μL加入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)體系中(zhong)即(ji)可(ke)。由於(yu)陽性對照(zhao)濃(nong)度(du)較高，建(jian)議(yi)在樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域加入(ru)陽性對照(zhao)。 
小(xiao)鼠樹突(tu)狀細(xi)胞肉(rou)瘤(liu)細胞;DCS腺苷-5'-二1酸三(san)鋰(li)鹽(yan)ADP.Li3質量(liang)規(gui)格：>97%,BR

CD300LG Others Human 人 CLM-9 / EM4 / CD300LG 人細(xi)胞裂解液 (陽性對照(zhao)) 赤蘚醇(chun);赤蘚糖(tang)醇(chun)Erythritol質量(liang)規(gui)格：>99%,BR

SK-N-BE(2)人神經母細胞瘤(liu)細胞 SK-N-BE (2) in human neuroblastoma cell MEM 45%+/F12 45%+10% FBS5ˊ-二1酸腺苷鋇(bei)鹽(yan)ADP.Ba質量(liang)規(gui)格：>98%,BR

TG-905細胞，人腦(nao)膠(jiao)質(zhi)母細胞瘤(liu)細胞 熒光假單(dan)胞菌(jun) 人滋(zi)養(yang)層絨(rong)毛(mao)細胞總RNAHVT NA二1酸腺苷單(dan)鉀鹽(yan)ADP.K質量(liang)規(gui)格：>97%,BR

RM1(大(da)鼠肌(ji)肉(rou)成(cheng)纖維樣(yang)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2-5'-二1酸二鈉鹽(yan)IDP.Na2質量(liang)規(gui)格：>98%,BR
人癌(ai)細(xi)胞;MDA-MB-231頭孢克(ke)1Cefixime質量(liang)規(gui)格：>98%,BR

KLK3 Others Human 人 KLK3 / PSA / Kallikrein-3 人細(xi)胞裂解液 (陽性對照(zhao)) NDSB 256(>98%,BR)NDSB 256質量(liang)規(gui)格：>98%,BR

MT-4 人急(ji)性母細胞白(bai)血(xue)病細胞NDSB-211NDSB-211質量(liang)規(gui)格：BR

A-673 人橫紋(wen)肌(ji)瘤(liu)細胞 A-673 rhabdomyoma cells DMEM培養(yang)基+10%FBS中(zhong)性紅(hong)染(ran)色液Neutral red solution(1X)質量(liang)規(gui)格：Ind Grade

TDGF1 Protein Human 重(zhong)組人 Cripto / TDGF1 蛋白 (His 標簽)鎳粉(>99.5%,SP)Nickel powder質量(liang)規(gui)格：>99.5%,SP
盤羊皮膚(fu)細(xi)胞;ASHS3 卵巢細胞，Lec1細胞 L7712細胞，615小(xiao)鼠T細胞性白(bai)血(xue)病瘤(liu)株Fmoc-L-質量(liang)規(gui)格：>98%,BRFmoc-Val-OH

SV40T轉(zhuan)化的(de)人胚(pei)腎細胞;293TFmoc-N-三(san)苯甲基-L-天冬酰(xian)胺質量(liang)規(gui)格：>98%,BRFmoc-Asn(Trt)-OH

HA Others H5N1 甲型流(liu)感(gan) H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xi)胞裂解液 (陽性對照(zhao)) N'-芴(wu)甲(jia)氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴氨(an)酸(suan)質量(liang)規(gui)格：≥98%,BRFmoc-Lys(Z)-OH

CL-03142V6.11(人胚(pei)腎細胞)5×106cells/瓶×2E-64d,蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji),阿洛(luo)司他(ta)丁質量(liang)規(gui)格：>98%,BRE64d,E-64d

HA Others H7N7 甲型流(liu)感(gan) H7N7 (A/chicken/Netherlands/1/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂解液 (陽性對照(zhao)) 2’-脫氧胞苷(gan)-5‘-1酸二鈉鹽(yan)質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%，BRdCMP,2Na
吳茱萸染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)保(bao)存人胰(yi)腺腺泡(pao)上皮癌(ai);HPAC1-溴-4-癸基苯(>88.0%(GC))質量(liang)規(gui)格：>88.0%(GC)1-Bromo-4-decylbenzene

IL18R1 Others Human 人 IL18R1 / CD218a 人細(xi)胞裂解液 (陽性對照(zhao)) 1-溴-4-十(shi)二烷(wan)基苯(>90.0%(GC))質量(liang)規(gui)格：>90.0%(GC)1-Bromo-4-dodecylbenzene

人細(xi)胞;Hela S3 [HeLaS3]1-溴-4-十(shi)二烷(wan)基苯(>95.0%(GC))質量(liang)規(gui)格：>95.0%(GC)1-Bromo-4-
儲存條件：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收集、處(chu)理(li)及保(bao)存方法
1. 血清：使用不(bu)含(han)熱(re)原和內(nei)毒(du)素的(de)試管，操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避免任何(he)細胞刺(ci)激，收集血(xue)液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘將血(xue)清和紅(hong)細胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地分離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或(huo)肝素抗凝。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘去(qu)除顆(ke)粒和聚(ju)合物(wu)。
4. 組織勻(yun)漿(jiang)：將組(zu)織加入(ru)適(shi)量(liang)生理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘取上清。
5. 保(bao)存：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收集後(hou)不及時檢(jian)測，請(qing)按(an)壹次用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免反(fan)復凍(dong)融，在室溫下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻(yun)地充分解凍(dong)。