吳茱萸(yu)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說明書(shu)

實(shi)驗流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應(ying)嚴(yan)格(ge)按照本(ben)說(shuo)明書(shu)要求分別(bie)在試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣本(ben)處理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區進行操作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗材應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用，不能混用；實(shi)驗用吸頭(tou)采(cai)用帶濾芯吸頭(tou)；樣(yang)本處理(li)區應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣本(ben)處理(li)在生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃(gui)中(zhong)進(jin)行操作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫外線殺(sha)菌裝置。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解，樣(yang)本(ben)處理(li)過(guo)程(cheng)應(ying)在0-4℃條件(jian)下(xia)操作(zuo)，且完成(cheng)實(shi)驗後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本(ben)處理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗(hao)材應(ying)經過(guo)無(wu)核(he)酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次實(shi)驗應(ying)該(gai)設置陰、陽性對照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所有(you)試(shi)劑(ji)在使(shi)用前應(ying)該(gai)在常(chang)溫下(xia)充分(fen)融化混勻，並(bing)應(ying)瞬時(shi)離心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰性和(he)陽性對照(zhao)在壹(yi)次使(shi)用前應(ying)全(quan)部(bu)轉(zhuan)移至標(biao)本(ben)準(zhun)備(bei)區，並單(dan)獨(du)存放。
6. 為防止(zhi)熒光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並(bing)應(ying)避(bi)免(mian)在PCR反應(ying)管上(shang)進行任何標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關參(can)數(shu)應(ying)按照本(ben)說(shuo)明書(shu)相關要求進行設置；不(bu)同批(pi)號試(shi)劑(ji)不(bu)能混用。
8. ABI系(xi)列熒光定(ding)量PCR儀(yi)參(can)數(shu)設置中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正，淬(cui)滅基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產(chan)品(pin)的(de)廢(fei)棄物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行無(wu)害化處理(li)後方可丟棄。

特點(dian)：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶只需要提供病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地(di)黃(huang)保(bao)守(shou)序列(lie)設計(ji)的(de)專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物，與相關病毒(du)無(wu)交(jiao)叉反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏(min)度可以(yi)達(da)到(dao)幾(ji)百(bai)拷貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管式熒(ying)光定(ding)量 PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續(xu)汙染(ran)。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體系(xi)的(de)熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本產(chan)品只適(shi)用於科研，不能用於臨床診(zhen)斷。
使(shi)用方法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采(cai)集：
1、食品(pin)樣(yang)品：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與預(yu)培養按照樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與預(yu)培養按照《食品(pin)衛(wei)生微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要求進行。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌註射器(qi)抽(chou)取受(shou)檢(jian)者(zhe)靜脈血(xue)2mL，註(zhu)入無(wu)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉(na))抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌的(de)收(shou)集管中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈部(bu)位樣(yang)品：取發(fa)病部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘液(ye)膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽性對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀釋度為例）
1. 註意：由(you)於標(biao)準(zhun)品(pin)濃度非(fei)常(chang)高(gao)，因(yin)此(ci)下(xia)列稀釋操作(zuo)壹(yi)定(ding)要在獨(du)立(li)的(de)區(qu)域進行，千(qian)萬不能汙染樣品(pin)或(huo)本試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其他成(cheng)分(fen)）。為增加(jia)產(chan)品穩(wen)定(ding)性和(he)避(bi)免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染(ran)性病原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不提供活體(ti)樣(yang)品(pin)做陽性對照(zhao)，只提供可以(yi)直接(jie)使(shi)用的(de) DNA段作(zuo)為陽性對照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離(li)心(xin)管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭分別(bie)加入 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板(ban)稀釋液（用帶芯槍(qiang)頭，下(xia)同）。
4. 在 7 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)(上(shang)步稀釋所得)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對照(zhao)到(dao) 5 號管中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面(mian)的(de)操(cao)作(zuo)直到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀釋度的(de)陽性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待用。
註(zhu)：上(shang)述樣品(pin)建(jian)議(yi)經過(guo)增菌後，收集培養(yang)物用於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提取：
可采用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提液，按以下(xia)說明進(jin)行DNA核酸的(de)粗(cu)提。也可采(cai)購(gou)上(shang)海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物科技有(you)限公司(si)生(sheng)產的(de)DNA提取試(shi)劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒光配(pei)套(tao))或(huo)其他合(he)適(shi)的(de)商業(ye)化產(chan)品，並按照相應(ying)試(shi)劑(ji)盒(he)說明進(jin)行操作(zuo)。
1、液體(ti)培養物：取液體培養物100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌離心(xin)管中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄上(shang)清，加入50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養物：挑(tiao)取單克隆(long)菌落與50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取米粒(li)大小糞(fen)便(bian)於滅菌離心(xin)管中(zhong)，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽水，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
4、其他液(ye)體(ti)標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽性對照(zhao)和(he)陰性對照(zhao)為已經抽提好的(de)核(he)酸(無(wu)需(xu)提取)，直接(jie)取5μL加入到(dao)反應(ying)體系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由(you)於陽性對照(zhao)濃度較(jiao)高(gao)，建(jian)議(yi)在樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區域加(jia)入陽性對照(zhao)。 
H4(人腦(nao)神經膠質(zhi)瘤細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0328CEM/C1(人急性細(xi)胞白血(xue)病細(xi)胞)5×106cells/瓶×2 小耳豬肺細(xi)胞;SEP-L1戊(wu)基尼泊金(jin)Pentyl Paraben質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

小鼠樹(shu)突(tu)狀(zhuang)細(xi)胞肉(rou)瘤低(di)轉(zhuan)移細(xi)胞(VAP33-GFP融合(he)蛋白穩(wen)定(ding)過(guo)表(biao)達(da));DG6-VAP33-GFP尼泊金(jin)丁酯(zhi)-d9Butyl-d9 Paraben質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

人視網(wang)膜(mo)色素(su)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(HRPEpiC)(5×105 )尼泊金(jin)乙酯(zhi)-d5Ethyl-d5 Paraben質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

CM-M051小鼠頸上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培養(yang)基100mL尼泊金(jin)甲(jia)酯-d4Methyl Paraben-d4質量規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

小鼠肥大細(xi)胞瘤細(xi)胞;P815 小鼠胰腺(xian)導管上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培養(yang)基 100mL尼泊金(jin)芐酯Benzyl Paraben質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)
人臍(qi)靜(jing)脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞;HUV-EC 人胰(yi)腺(xian)星狀(zhuang)細(xi)胞*培養(yang)基 100mL耐(nai)爾(er)藍A(>65%,BS)Nile blue A質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>65%,BS

人癌(ai)細(xi)胞;MDA-MB-157N-CBZ-beta-Z-β-Ala-OH質量(liang)規(gui)格(ge)：0.98

TYRP1 Others Human 人 P1 / TYRP1 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照(zhao)) CBZ-D-α-芐酯(zhi)Z-Glu-OBzl質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%

CM-H134人角膜(mo)內(nei)皮(pi)細(xi)胞*培養(yang)基100mLN-芐(bian)氧(yang)羰(tang)基-L-Z-Tyr-OH質量規(gui)格(ge)：0.98

CNE1, 人鼻咽(yan)癌(ai)細(xi)胞系 草(cao)魚(yu)吻(wen)端(duan)細(xi)胞,ZC-7901細(xi)胞 SW480 [SW-480](人結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞)Z-L-甲(jia)酯Z-Tyr-OMe質量規(gui)格(ge)：>98%,BR
牛(niu)源細(xi)胞 肝癌(ai)細(xi)胞，HCCLM3細(xi)胞 C3細(xi)胞，小鼠白血(xue)病細(xi)胞重樓(lou)皂(zao)苷(gan)VI（標(biao)準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Polyphyllin VI

人胚腎細(xi)胞(SV40T基因修(xiu)飾(shi));293T/17重樓(lou)皂(zao)苷(gan)VII（標(biao)準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Polyphyllin VII

COCH Others Human 人 COCH / Cochlin 人(ren)細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照(zhao)) 質量(liang)規(gui)格(ge)：≥97%,BRHyodeoxycholic acid

CL-0112HMy2.CIR(人B母(mu)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2(標(biao)準(zhun)品(pin))質量規(gui)格(ge)：含(han)量測(ce)定(ding)Hyodeoxycholic acid

DDC Others Human 人 DOPA Decarboxylase / DDC 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照(zhao)) （標(biao)準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規(gui)格(ge)：效(xiao)價(jia)測(ce)定(ding)Nystatin
吳茱萸(yu)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說明書(shu)SC-1(小鼠胚胎(tai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×23，4-二羥基shēng huà shì jì容量：RT5克

HCC1937(人(ren)癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0377LLC-WRC 256(大鼠腹水(shui)癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴(hou)腎(shen)細(xi)胞;LLC-MK24,4-二叔丁基-2,2-聯(lian) 98% 4 4'-DI-TqRT-BUTYL-2 2'-DIPYRIDYL 98 7914-19-3

人侵襲性脈絡膜(mo)色素(su)瘤細(xi)胞;M6192,9-二甲(jia)基-4,7-二本基-1,10-啰(luo)啉(lin)shēng
儲存條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收集、處理(li)及保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血清：使(shi)用不含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的(de)試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺激，收(shou)集血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘將血(xue)清和(he)紅細(xi)胞迅速(su)小心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或(huo)肝素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分(fen)鐘取上(shang)清。
3. 細(xi)胞上(shang)清液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒(li)和(he)聚合(he)物。
4. 組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)：將組(zu)織(zhi)加(jia)入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘取上(shang)清。
5. 保(bao)存(cun)：如果樣(yang)本(ben)收(shou)集後不(bu)及時檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹(yi)次用量分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在室(shi)溫下(xia)解凍(dong)並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地(di)充(chong)分(fen)解凍(dong)。