山(shan)藥PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測過(guo)程應(ying)嚴格(ge)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明書(shu)要求分(fen)別(bie)在試(shi)劑(ji)準備區(qu)、樣(yang)本(ben)處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進(jin)行操作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗服(fu)、儀器(qi) 、耗(hao)材應(ying)獨立(li)使用，不(bu)能(neng)混用(yong)；實(shi)驗用(yong)吸(xi)頭(tou)采用帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣本處(chu)理區(qu)應(ying)配(pei)有生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣本處理在(zai)生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃(gui)中進行操作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避免(mian)RNA降解(jie)，樣本處理(li)過(guo)程應(ying)在0-4℃條件下(xia)操作(zuo)，且(qie)完成(cheng)實驗後立(li)即(ji)上(shang)機檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處理(li)過(guo)程中使用的器(qi)具耗(hao)材應(ying)經過(guo)無核(he)酶處理。
3. 每次(ci)實驗應(ying)該(gai)設(she)置陰、陽(yang)性對照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒(he)所(suo)有試劑(ji)在(zai)使用前應(ying)該(gai)在(zai)常溫下(xia)充(chong)分(fen)融化混(hun)勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬時離(li)心。
5. 試劑(ji)盒(he)內所(suo)配(pei)陰性和(he)陽(yang)性對照(zhao)在(zai)壹(yi)次(ci)使用前應(ying)全部(bu)轉(zhuan)移至(zhi)標本準備區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為防(fang)止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免(mian)裸手直接(jie)接觸PCR反應(ying)管，並應(ying)避免(mian)在PCR反應(ying)管上進行任(ren)何標(biao)記(ji)。
7. 儀器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關參(can)數應(ying)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明書(shu)相(xiang)關要求進(jin)行設置(zhi)；不(bu)同批號(hao)試劑(ji)不(bu)能(neng)混用(yong)。
8. ABI系列(lie)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀參(can)數設(she)置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校正(zheng)，淬滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程中產(chan)品的廢棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行無害(hai)化處(chu)理(li)後方(fang)可丟(diu)棄(qi)。

特點(dian)：
1. 即開即(ji)用(yong)，用戶(hu)只(zhi)需要提供病毒樣品。
2. 根據地(di)黃保守序(xu)列(lie)設計(ji)的專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物(wu)，與相(xiang)關病(bing)毒無交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可以達(da)到(dao)幾百(bai)拷(kao)貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹管式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後續汙(wu)染(ran)。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體系的(de)熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品只(zhi)適(shi)用(yong)於科研，不(bu)能(neng)用於臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)。
使用方(fang)法(fa)：
壹、樣(yang)品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培(pei)養按(an)照(zhao)樣(yang)品的采集與預培(pei)養按(an)照(zhao)《食(shi)品衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學檢(jian)驗阪(ban)崎腸(chang)桿菌檢(jian)驗要求進(jin)行。
2、血液(ye)樣(yang)品：用無菌註(zhu)射(she)器(qi)抽(chou)取受檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞便樣品：取糞便置於滅菌的(de)收(shou)集管中送檢(jian)。
4、病竈(zao)部(bu)位樣(yang)品：取發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲出物(wu)、粘液(ye)膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性對照(zhao)（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度為例）
1. 註意(yi)：由於標準品濃度非常高，因此(ci)下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操作(zuo)壹定(ding)要在獨立(li)的(de)區(qu)域(yu)進(jin)行，千(qian)萬(wan)不(bu)能(neng)汙(wu)染(ran)樣(yang)品或本試劑(ji)盒(he)的(de)其他(ta)成(cheng)分(fen)）。為增加(jia)產(chan)品穩定性和(he)避(bi)免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染(ran)性病(bing)原，本(ben)產(chan)品不(bu)提(ti)供活體(ti)樣(yang)品做(zuo)陽(yang)性對照(zhao)，只(zhi)提供可以直(zhi)接(jie)使用的 DNA段作(zuo)為陽(yang)性對照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)（用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在 7 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)(上步稀(xi)釋(shi)所(suo)得(de))，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)到(dao) 5 號(hao)管中，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待用。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面(mian)的(de)操作(zuo)直到(dao)得到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待用。
註：上(shang)述樣品建(jian)議經過(guo)增菌後，收(shou)集培養物(wu)用於檢(jian)測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備的DNA抽提(ti)液(ye)，按(an)以下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核(he)酸(suan)的(de)粗(cu)提。也(ye)可采購上海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科技(ji)有限(xian)公司生(sheng)產(chan)的(de)DNA提取試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒光(guang)配(pei)套)或其他(ta)合適(shi)的(de)商業化產(chan)品，並按(an)照(zhao)相(xiang)應(ying)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)進(jin)行操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培養物(wu)：取液(ye)體(ti)培養物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌離(li)心管中，8000rpm離心3min，盡量(liang)吸棄上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物(wu)：挑取單克(ke)隆(long)菌落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞便樣品：挑取米粒(li)大小糞便於滅菌離(li)心管中，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水，振蕩混(hun)勻，13000rpm離心3分(fen)鐘，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標本(ben)：取標本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
註：陽(yang)性對照(zhao)和(he)陰性對照(zhao)為已經抽(chou)提(ti)好(hao)的核(he)酸(suan)(無需提(ti)取)，直接(jie)取5μL加(jia)入到(dao)反應(ying)體系中即可。由於陽(yang)性對照(zhao)濃度較高(gao)，建(jian)議在樣(yang)品制備區(qu)域(yu)加(jia)入陽(yang)性對照(zhao)。 
CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) 酸(suan)漿(jiang)苦味素(su)L（標準品）Physalin L質量規格(ge)：供鑒(jian)別(bie)用

CM-R114大鼠(shu)視網(wang)膜微(wei)血(xue)管內皮(pi)細(xi)胞*培養基100mL1-甲基(ji)海因（標(biao)準品）1-METHYLHYDANTOIN質量規格(ge)：供鑒(jian)別(bie)用

KYSE70細(xi)胞，人食管鱗癌(ai) 神經膠(jiao)質瘤細(xi)胞,SHG-44細(xi)胞 豬腎(shen)傳(chuan)代(dai)細(xi)胞;IBRS-2古倫(lun)賓(bin)（標(biao)準品）Columbin質量規格(ge)：供含量(liang)測定(ding)用(yong)

CFPAC-1(人胰(yi)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2安五(wu)脂(zhi)素（標(biao)準品）Anwuligan質量規格(ge)：鑒(jian)別(bie)

TNFSF8 Others Human 人 CD30 Ligand / TNFSF8 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) 絡(luo)石(shi)苷（標準品）tracheloside質量規格(ge)：含量(liang)測定(ding)
IGFBP3 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴 IGFBP3 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) DL-DL-Arginine質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品

肝實(shi)質細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)L-鼠(shu)李糖(tang)(標準品)L(+)-Rhamnose monohydrate質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品

MOLT-4細(xi)胞，人急性T母細(xi)胞白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞 大鼠(shu)卵巢(chao)癌(ai)細(xi)胞株,NUTU-19細(xi)胞 人外(wai)根殼(ke)細(xi)胞cDNAHHORSC cDNAL-鼠(shu)李糖(tang)；鼠(shu)李糖(tang)壹水L(+)-Rhamnose monohydrate質量規格(ge)：≥98%，BR

NCTC 1469(小鼠(shu)正(zheng)常肝細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2鼠(shu)尾(wei)草酚(fen)(標準品)Carnosol質量規格(ge)：HPLC≥95%，標準品

COLO 205(人結(jie)腸癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0158MGC80-3(人胃(wei)癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠(shu)肝細(xi)胞;BRL鼠(shu)尾(wei)草酸(suan)（標(biao)準品）Carnosic acid質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品
家(jia)貓腎(shen)細(xi)胞;CATK1BAEE;N-苯甲酰(xian)基-L-乙(yi)酯鹽酸(suan)鹽質量規格(ge)：>98%,BRBAEE

HA Others H3N2 甲型(xing)流感 H3N2 (A/Brisbane/10/2007) 血凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) ATEE；N-乙(yi)酰-L-乙(yi)酯質量規格(ge)：>98%,BRN-Acetyl-L-tyrosine ethyl ester monohydrate

CL-0378MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠(shu)顱(lu)頂前骨(gu)細(xi)胞亞克(ke)隆(long)14)5×106cells/瓶×2β-D-葡糖(tang)糖-6-1酸(suan)鈉(na)鹽質量規格(ge)：98%，美國進口D-Glucose 6-phosphate  salt

EFNA5 Others Rat 大鼠(shu) Ephrin-A5 / EFNA5 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) NADPH;還(hai)原輔(fu)酶(mei)Ⅱ四(si)鈉鹽;(美侖)質量規格(ge)：>97%,國產(chan)美(mei)侖Coenzyme II reduced tetra salt(NADPH)

小鼠(shu)肺(fei)成(cheng)纖維細(xi)胞*培養基 100mL葡萄(tao)糖氧化酶(mei)質量規格(ge)：BR,>200U/mgGlucose oxidase
山藥(yao)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)Promocell C-25110 Hepatocyte Growth MediumKIT, 肝細(xi)胞生(sheng)長(chang)培養基套裝(zhuang) 500ml9,9'-螺(luo)二[9H-芴(wu)](>98.0%(HPLC))質量規格(ge)：>98.0%(HPLC)9,9'-Spirobi[9H-fluorene]

人心肌(ji)細(xi)胞-心房(fang)總(zong)RNAHCF-aa NA2-氨基(ji)蒽(>98.0%(GC)(T))質量規格(ge)：>98.0%(GC)(T)2-Aminoanthracene

CD38 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴 SCARB3 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對
儲存(cun)條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理(li)及保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使用不(bu)含熱(re)原和(he)內毒素的(de)試(shi)管，操作(zuo)過(guo)程中避免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激，收(shou)集血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘將(jiang)血清(qing)和(he)紅細(xi)胞迅速(su)小心地(di)分(fen)離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽或肝素抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分(fen)鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞上清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘去除顆粒和聚(ju)合物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿(jiang)：將組(zu)織加(jia)入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘取上清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集後不(bu)及時檢(jian)測，請(qing)按(an)壹次(ci)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣品均勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。