覆(fu)盆(pen)子PCR鑒(jian)定試劑盒*

儲存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及保存方法
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不(bu)含熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的(de)試管(guan)，操作過程中(zhong)避(bi)免任何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和(he)紅細(xi)胞(bao)迅速(su)小心地分離(li)。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或肝素(su)抗凝。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分鐘(zhong)取上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚合(he)物(wu)。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)取上清(qing)。
5. 保存：如(ru)果樣(yang)本(ben)收集(ji)後(hou)不(bu)及時(shi)檢(jian)測，請(qing)按壹(yi)次用量(liang)分裝(zhuang)，凍存於-20℃，避(bi)免反復(fu)凍融，在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確保樣品(pin)均勻地充分解(jie)凍。

特點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要(yao)提(ti)供(gong)病毒樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據地黃保守(shou)序列(lie)設(she)計的(de)專壹(yi)性(xing)引物(wu)，與相關病毒無(wu)交叉(cha)反應。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以(yi)達(da)到(dao)幾百(bai)拷(kao)貝/反應。
4. 壹(yi)管(guan)式熒(ying)光定量(liang) PCR 檢(jian)測，避(bi)免後(hou)續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反應體(ti)系(xi)的(de)熒光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只(zhi)適(shi)用(yong)於科研(yan)，不(bu)能用於臨床(chuang)診斷(duan)。

使(shi)用方法：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采(cai)集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與預(yu)培(pei)養按(an)照樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與預(yu)培(pei)養按(an)照《食品(pin)衛生(sheng)微生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎腸桿(gan)菌檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品(pin)：用(yong)無(wu)菌(jun)註射(she)器抽(chou)取受(shou)檢(jian)者靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入無菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉)抗凝管(guan)，立即(ji)混勻(yun)。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便置(zhi)於滅(mie)菌(jun)的(de)收集(ji)管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈部位樣品(pin)：取發病部位新鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘(zhan)液膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性(xing)對照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度(du)為例(li)）
1. 註(zhu)意：由(you)於標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非(fei)常高，因此(ci)下(xia)列(lie)稀釋操作壹(yi)定要(yao)在獨(du)立的(de)區域(yu)進(jin)行(xing)，千(qian)萬(wan)不(bu)能汙染(ran)樣(yang)品(pin)或(huo)本(ben)試劑盒的(de)其(qi)他成分）。為增(zeng)加產品(pin)穩(wen)定性(xing)和(he)避(bi)免擴散傳染(ran)性(xing)病原(yuan)，本(ben)產品(pin)不(bu)提供(gong)活體(ti)樣(yang)品(pin)做陽性(xing)對照，只(zhi)提(ti)供(gong)可以(yi)直(zhi)接(jie)使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為陽(yang)性(xing)對照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離(li)心管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭分別加入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板(ban)稀(xi)釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭，下(xia)同）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(上(shang)步(bu)稀(xi)釋所(suo)得)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面(mian)的(de)操作直(zhi)到得到 6 個(ge)稀(xi)釋度(du)的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣品(pin)建(jian)議經(jing)過增菌後(hou)，收集(ji)培(pei)養物(wu)用(yong)於檢(jian)測。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑盒配備的(de)DNA抽(chou)提液(ye)，按以(yi)下(xia)說明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的(de)粗提。也可采(cai)購上(shang)海澤葉(ye)生(sheng)物(wu)科(ke)技有(you)限公(gong)司(si)生(sheng)產的(de)DNA提(ti)取試劑盒(過柱法-熒(ying)光(guang)配套(tao))或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的(de)商業(ye)化產品(pin)，並(bing)按照相應試(shi)劑盒說明(ming)進行(xing)操作。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄上(shang)清(qing)，加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑(tiao)取單克(ke)隆(long)菌落(luo)與50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取米(mi)粒大(da)小(xiao)糞(fen)便於滅(mie)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，加入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水，振蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離(li)心3分鐘(zhong)，棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其(qi)他液體(ti)標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對照和(he)陰(yin)性(xing)對照為已經抽(chou)提好(hao)的(de)核(he)酸(suan)(無(wu)需(xu)提(ti)取)，直(zhi)接(jie)取5μL加入到反應體(ti)系(xi)中(zhong)即(ji)可。由(you)於陽性(xing)對照濃(nong)度(du)較高，建(jian)議在樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域加入陽性(xing)對照。 
SHH Protein Human 重(zhong)組(zu)人 SHH / Sonic hedgehog 蛋(dan)白 (aa 198-462, His 標(biao)簽(qian))新補骨脂(zhi)異黃(huang)酮(標(biao)準(zhun)品(pin))Neobavaisoflavone質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人皮(pi)膚成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao);CCC-HSF-1 B16-F10, 小(xiao)鼠(shu)色(se)素瘤高轉移(yi)細(xi)胞(bao) Mouse新(標(biao)準(zhun)品(pin))Neohesperidin質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

小(xiao)鼠(shu)色(se)素瘤瘤株;B16新內酯(zhi)（標(biao)準(zhun)品(pin)）Neoandrographolide質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

EDA2R Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) XEDAR / EDA2R 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 新芒(mang)果苷(gan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Neomangiferin質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)*培養基 100mL熊果苷(gan)（標(biao)準(zhun)品(pin)）Arbutin質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)
非(fei)洲綠猴(hou)腎(shen)細(xi)胞(bao);CV-1GSK2636771GSK-2636771質量(liang)規(gui)格：>97%,PI3Kβ選(xuan)擇(ze)性(xing)抑制(zhi)劑

IL17RD Others Human 人 IL17RD 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) D-葡(pu)糖(tang)糖-6-1酸(suan)二(er)鈉二(er)水D-Glucose-6-phosphate, di, dihydrate質量(liang)規(gui)格：>99%,BR

婆羅門(men)牛(niu)皮(pi)膚成纖(xian)維(wei)樣細(xi)胞(bao);BOS-3丁(ding)二(er)酸(suan)鈉(AR) succinate質量(liang)規(gui)格：AR,>99%

MAG Others Human 人 MAG / GMA / Siglec-4 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 牛(niu)血(xue)紅蛋(dan)白Hemoglobin質量(liang)規(gui)格：BR

膠(jiao)原(yuan)酶(含100mL酶解(jie)緩(huan)沖液(ye)) 10mL聚乙二(er)醇10000PEG 10000質量(liang)規(gui)格：分子(zi)量(liang)9,000~11,000
大(da)額(e)牛(niu)與婆羅門(men)牛(niu)雜(za)交F1代(dai)皮膚成纖(xian)維(wei)樣細(xi)胞(bao);BOS-6 羊(yang)膜(mo)細(xi)胞(bao)，WISH細(xi)胞(bao) 786-O [786-0](腎(shen)透明(ming)細(xi)胞(bao)腺癌(ai)細(xi)胞(bao))瓊(qiong)脂糖(美侖(lun)電(dian)泳級(ji))質量(liang)規(gui)格：美侖(lun)，電(dian)泳級(ji)Agarose

EB病毒轉(zhuan)化的(de)人B細(xi)胞(bao);KMY0903瓊(qiong)脂糖(Sigma)質量(liang)規(gui)格：Sigma原(yuan)裝(zhuang)Agarose

SPINK4 Others Human 人 SPINK4 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 普(pu)拉(la)洛芬質量(liang)規(gui)格：>97%,BRPraprofen

CM-M064小(xiao)鼠(shu)前(qian)列腺上皮細(xi)胞(bao)*培養基100mL普(pu)拉(la)洛芬(標(biao)準(zhun)品(pin))質量(liang)規(gui)格：HPLC>97%,標(biao)準(zhun)品(pin)Praprofen

SPARCL1 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) SPARCL1 / SPARC-like 1 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 牛(niu)血(xue)清(qing)白蛋(dan)白(BSA);牛(niu)血(xue)清(qing)白蛋(dan)白組分五(wu)質量(liang)規(gui)格：Purity>98%,分子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)級(ji)Albumin(bovine fraction V);BSA
覆(fu)盆(pen)子PCR鑒(jian)定試劑盒*SV-HUC-1(人膀(pang)胱上皮(pi)永生(sheng)化細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2(1S,4R)質量(liang)規(gui)格：美國進口(kou)(1S,4R) Sertraline

HCAEC-c 人冠(guan)狀(zhuang)動(dong)脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞(bao)(HCAEC) 500,000cells 滑(hua)膜(mo)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)氨(an)基他達那非(fei)質量(liang)規(gui)格：美國進口(kou)Ami Tadalafil

視(shi)網(wang)膜(mo)muller細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)質量(liang)規(gui)格：美國進口(kou)Terazosin

F
實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測過程應嚴(yan)格(ge)按(an)照本(ben)說明(ming)書要(yao)求(qiu)分別在試(shi)劑準備(bei)區(qu)、樣本(ben)處理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進行操作，各(ge)區(qu)實驗(yan)服、儀(yi)器 、耗材應獨(du)立使(shi)用，不(bu)能混用；實驗用(yong)吸頭采(cai)用帶(dai)濾芯吸頭；樣(yang)本(ben)處理(li)區應配有(you)生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃，樣本(ben)處理(li)在生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃中(zhong)進(jin)行操作；三(san)個區(qu)應該(gai)配有(you)紫外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝(zhuang)置。
2. 為避(bi)免RNA降(jiang)解(jie)，樣本(ben)處理(li)過程應在0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操作，且完成實(shi)驗(yan)後(hou)立即(ji)上機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處理(li)過程中(zhong)使(shi)用的(de)器具(ju)耗材應經(jing)過無核(he)酶處理(li)。

3. 每次實驗應該(gai)設(she)置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試(shi)劑盒所(suo)有(you)試劑在使(shi)用前(qian)應該(gai)在常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分融(rong)化混勻，並(bing)應瞬時(shi)離(li)心。
5. 試(shi)劑盒內(nei)所(suo)配陰(yin)性(xing)和(he)陽(yang)性(xing)對照在壹(yi)次使(shi)用前(qian)應全(quan)部轉移(yi)至(zhi)標(biao)本(ben)準備(bei)區，並(bing)單獨存放。
6. 為防止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾，應避(bi)免裸手直(zhi)接(jie)接觸(chu)PCR反應管(guan)，並(bing)應避(bi)免在PCR反應管(guan)上進(jin)行任何標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關參數(shu)應按(an)照本(ben)說明(ming)書相關要(yao)求(qiu)進(jin)行設(she)置；不(bu)同批(pi)號(hao)試(shi)劑不(bu)能混用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光定量(liang)PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中(zhong)產品(pin)的(de)廢棄(qi)物(wu)應該(gai)進行(xing)無害化處理(li)後(hou)方可丟棄(qi)。