蘆根探(tan)針法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒(he)*

儲(chu)存條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收集、處理(li)及保存方法(fa)
1. 血(xue)清：使用不(bu)含熱(re)原(yuan)和內(nei)毒素的(de)試(shi)管(guan)，操作(zuo)過程中(zhong)避(bi)免任(ren)何細胞(bao)刺(ci)激，收集血(xue)液(ye)後，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清和(he)紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心地分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或肝(gan)素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒和聚合物。
4. 組(zu)織(zhi)勻漿：將組(zu)織(zhi)加入適量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗碎。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
5. 保存：如果(guo)樣(yang)本(ben)收集後(hou)不(bu)及時(shi)檢(jian)測(ce)，請(qing)按(an)壹次用量(liang)分裝，凍存於-20℃，避(bi)免反復凍融，在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確(que)保樣品(pin)均勻地充分(fen)解(jie)凍。

特點(dian)：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只需要(yao)提(ti)供(gong)病(bing)毒樣(yang)品。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保守(shou)序(xu)列(lie)設(she)計的專壹(yi)性(xing)引(yin)物，與(yu)相(xiang)關病(bing)毒無(wu)交叉反應(ying)。
3. 靈敏度可(ke)以達到(dao)幾百(bai)拷貝/反應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑盒(he)足夠 50 次 20μL 反應(ying)體系(xi)的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)。

使用方法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采(cai)集：
1、食品樣品：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預培(pei)養(yang)按照樣品的采(cai)集與(yu)預培(pei)養(yang)按照《食品衛生微(wei)生(sheng)物學(xue)檢驗(yan)阪崎腸桿菌(jun)檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進行(xing)。
2、血(xue)液(ye)樣品：用無(wu)菌(jun)註射器抽(chou)取(qu)受(shou)檢者(zhe)靜脈(mai)血(xue)2mL，註入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞便(bian)樣品：取(qu)糞便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌(jun)的(de)收集管(guan)中(zhong)送檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位樣(yang)品：取(qu)發病(bing)部(bu)位新鮮滲出物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送(song)檢。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度(du)為(wei)例(li)）
1. 註意：由於標準品(pin)濃(nong)度非(fei)常(chang)高，因(yin)此下(xia)列(lie)稀(xi)釋操(cao)作(zuo)壹定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立(li)的(de)區(qu)域(yu)進(jin)行，千萬(wan)不(bu)能汙(wu)染(ran)樣(yang)品或本(ben)試劑盒(he)的其(qi)他成分）。為(wei)增加產品(pin)穩(wen)定性(xing)和避(bi)免擴(kuo)散傳(chuan)染(ran)性(xing)病(bing)原(yuan)，本產(chan)品不(bu)提供(gong)活(huo)體樣(yang)品(pin)做陽性對照，只提供(gong)可(ke)以直(zhi)接(jie)使用的(de) DNA段作(zuo)為(wei)陽(yang)性(xing)對照。
2. 標記(ji) 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍頭分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板(ban)稀(xi)釋液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照，充分震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
5. 換槍頭，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(上(shang)步(bu)稀(xi)釋所得)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
6. 換槍頭，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
7. 重(zhong)復上面(mian)的操(cao)作(zuo)直(zhi)到得到 6 個(ge)稀(xi)釋度(du)的陽性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
註：上述(shu)樣(yang)品(pin)建(jian)議經(jing)過增菌(jun)後(hou)，收集培(pei)養(yang)物用於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提液(ye)，按以下(xia)說明進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的(de)粗(cu)提。也(ye)可(ke)采(cai)購(gou)上海澤葉(ye)生物科(ke)技有限(xian)公司(si)生產(chan)的(de)DNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)(過柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光(guang)配(pei)套)或其(qi)他合(he)適的(de)商(shang)業(ye)化產品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應(ying)試劑盒(he)說明進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體培(pei)養(yang)物：取(qu)液(ye)體培(pei)養(yang)物100μL加到1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心管中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸棄(qi)上清，加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
2、固(gu)體培(pei)養(yang)物：挑取(qu)單(dan)克(ke)隆菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣品：挑取(qu)米(mi)粒大(da)小(xiao)糞便(bian)於滅(mie)菌(jun)離(li)心管中(zhong)，加入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水，振(zhen)蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體標本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
註：陽性(xing)對(dui)照和陰(yin)性(xing)對照為(wei)已經(jing)抽(chou)提好(hao)的核(he)酸(無(wu)需(xu)提(ti)取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加入到(dao)反應(ying)體系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由於陽(yang)性對照濃度較高，建(jian)議在(zai)樣(yang)品制(zhi)備區(qu)域(yu)加入陽(yang)性對(dui)照。 
EPD1 Others Mouse 小(xiao)鼠 CD39 / EPD1 桿狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 順(shun)式(shi)白(bai)藜(li)蘆醇cis-Resveratrol質量規格(ge)：美國進口

CL-0089H9c2(2-1) (大(da)鼠心肌(ji)細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2反式(shi)白(bai)藜(li)蘆醇-4'-硫(liu)酸(suan)鹽trans Resveratrol-4'-sulfate質量規格(ge)：美國進口

MiaPaCa-2, 人(ren)胰(yi)腺(xian)癌(ai)細胞(bao) 非(fei)雄(xiong)激(ji)素(su)依賴型前(qian)列(lie)腺(xian)癌,Tsu-Pr1細(xi)胞(bao) ZR-75-1(癌(ai)細(xi)胞(bao))順(shun)式(shi)白(bai)藜(li)蘆醇4'-O-β-D-葡(pu)萄(tao)糖苷酸cis Resveratrol 4'-O-β-D-Glucuronide質量規格(ge)：美國進口

小(xiao)鼠骨(gu)髓(sui)細(xi)胞(bao);FDC-P1順(shun)式(shi)白(bai)藜(li)蘆醇3-O-β-D-葡(pu)萄(tao)糖苷酸cis Resveratrol 3-O-β-D-Glucuronide質量規格(ge)：美國進口

SERPINA7 Others Human 人(ren) SerpinA7 / TBG 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 反式(shi)白(bai)藜(li)蘆醇-3,5-硫(liu)酸(suan)氫(qing)鹽trans Resveratrol-3,5-disulfate質量規格(ge)：美國進口
CNDP2 Others Human 人(ren) CNDP2 / CPGL / PEPA 桿狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 雙(shuang)酚芴(>98%,BR)9,9-Bis(4-hydroxyphenyl) fluorine質量規格(ge)：>98%,BR

小(xiao)鼠胚(pei)胎成(cheng)骨(gu)細(xi)胞(bao)前(qian)體細(xi)胞(bao);MC3T3-E1酸(suan)性(xing)藍(lan)29(>50%，Ind Grade)Acid blue 29質量規格(ge)：>50%，Ind Grade

AAV-293細(xi)胞(bao)，胚(pei)腎(shen)細胞(bao) 人(ren)肝癌(ai)細(xi)胞(bao),HCC-9724細(xi)胞(bao) CL-0168Neuro-2a/N2a(小(xiao)鼠腦(nao)神經(jing)瘤(liu)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×27－氨(an)基(ji)去(qu)乙(yi)酰(xian)氧(yang)基(ji)頭(tou)孢(bao)烷酸(suan)（7-ADCA）（標準品(pin)）7-ADCA質量規格(ge)：雜質檢查(zha)

中(zhong)國倉(cang)鼠卵巢(chao)細(xi)胞(bao);CTLA4 Ig-24（標準品(pin)）Piperacillin質量規格(ge)：HPLC含量(liang)測(ce)定

IL13RA2 Others Mouse 小(xiao)鼠 IL13RA2 / CD213A2 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) Piperacillin質量規格(ge)：>95%,BR
SF-295(人(ren)XG惡性膠(jiao)質瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2甘(gan)氨(an)酰(xian)-L-；甘(gan)洛(luo)二(er)肽質量規格(ge)：>98%,BR,水合(he)物Glycyl-L-tyrosine

HAoEC Pellet 人(ren)主動脈(mai)內(nei)皮細胞(bao)團(tuan)塊 > 1 mio.cells 尿(niao)道(dao)上(shang)皮細(xi)胞(bao)生(sheng)長添(tian)加物UCGSD-質量規格(ge)：>98%,BRD-Leucine

CL-0296MX-1(人(ren)癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2D-賴(lai)氨(an)酸(suan)鹽酸(suan)鹽質量規格(ge)：>99%,BRH-D-Lys-OH·HCl

MBL1 Others Rat 大(da)鼠 MBL1 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) D-甘(gan)露(lu)糖(tang)(標準品(pin))質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)D-Mannose

成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)cDNAHMF cDNAN-辛酰基(ji)-N-甲(jia)基(ji)葡(pu)糖胺(an)(MEGA-8)質量規格(ge)：≥97% ,進(jin)分(fen)N-Octanoyl-N-methylglucamine
蘆根探(tan)針法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)*EFNA3 Others Human 人(ren) EphrinA3 / EFNA3 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 6-姜酚（標準品(pin)）質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)6-gingerol

人(ren)胃(wei)腺癌(ai)細(xi)胞(bao);BGC-8238-姜酚（標準品(pin)）質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)8-Gingerol

IL1R1 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴(hou) IL1R1 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 姜酮(tong)(標準品(pin))質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)Zingerone

CM-H130人(ren)視(shi)網膜微血管(guan)內(nei)皮細胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji)100mL姜酮(tong)(標準
實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測(ce)過程應(ying)嚴格(ge)按照本說明書要(yao)求(qiu)分別(bie)在試劑準備(bei)區(qu)、樣本(ben)處理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增區進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀器 、耗材(cai)應(ying)獨立(li)使用，不(bu)能混(hun)用；實(shi)驗用吸頭采(cai)用帶(dai)濾芯(xin)吸頭；樣(yang)本處理(li)區應(ying)配有生物安(an)全(quan)櫃，樣(yang)本(ben)處理(li)在生(sheng)物安(an)全(quan)櫃中(zhong)進行(xing)操作(zuo)；三個(ge)區(qu)應(ying)該配有紫外(wai)線(xian)殺(sha)菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處理(li)過程應(ying)在0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作(zuo)，且完成(cheng)實驗後立(li)即(ji)上機檢測；樣本處理(li)過程中(zhong)使用的(de)器具耗材(cai)應(ying)經(jing)過無核(he)酶(mei)處理(li)。

3. 每(mei)次實驗應(ying)該設置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試(shi)劑盒(he)所有試劑在使用前(qian)應(ying)該在常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融化混(hun)勻，並應(ying)瞬時離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑盒(he)內所配(pei)陰(yin)性(xing)和陽(yang)性對照在壹次使用前(qian)應(ying)全部(bu)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標本(ben)準備(bei)區(qu)，並單(dan)獨存放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免裸手(shou)直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並應(ying)避(bi)免在(zai)PCR反應(ying)管上進(jin)行(xing)任(ren)何標記(ji)。
7. 儀器 擴(kuo)增相(xiang)關參(can)數(shu)應(ying)按照本說明書相(xiang)關要(yao)求(qiu)進行(xing)設置(zhi)；不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)試(shi)劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀參數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中(zhong)產品(pin)的廢(fei)棄(qi)物應(ying)該進行(xing)無(wu)害化處理(li)後方可(ke)丟(diu)棄(qi)。