谷(gu)芽(ya)染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

儲存條(tiao)件：
14℃或－20℃樣品(pin)收集、處(chu)理(li)及保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使用不含(han)熱(re)原(yuan)和內毒(du)素(su)的(de)試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中(zhong)避(bi)免任何(he)細胞(bao)刺(ci)激，收集血液(ye)後(hou)，3000 轉離心(xin)10 分鐘將(jiang)血清(qing)和紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速小心(xin)地(di)分離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000 轉離心(xin)30 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉離心(xin)10 分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)和聚(ju)合物。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加入適量(liang)生理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉離心(xin)10 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣本(ben)收集後(hou)不及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)，請按(an)壹(yi)次(ci)用量(liang)分裝，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反復凍(dong)融(rong)，在室溫下解凍(dong)並確(que)保樣品(pin)均勻(yun)地(di)充(chong)分解凍(dong)。

特(te)點：
1. 即開(kai)即用，用戶(hu)只(zhi)需要(yao)提供病毒(du)樣品(pin)。
2. 根據(ju)地黃(huang)保守(shou)序(xu)列設計(ji)的(de)專(zhuan)壹(yi)性(xing)引(yin)物，與相關病毒(du)無(wu)交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
3. 靈敏度(du)可以達(da)到幾百拷貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹管式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避(bi)免後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本試(shi)劑盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反應(ying)體系的(de)熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只適用於科研(yan)，不能(neng)用於臨床(chuang)診(zhen)斷。

使用方(fang)法(fa)：
壹、樣品(pin)采(cai)集：
1、食(shi)品樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采(cai)集與預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)樣品(pin)的(de)采(cai)集與預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)《食(shi)品衛生微生物學檢驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸桿(gan)菌檢驗(yan)要(yao)求進行。
2、血液(ye)樣品(pin)：用無菌註射(she)器抽取(qu)受檢(jian)者靜(jing)脈(mai)血2mL，註入(ru)無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混勻(yun)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置於滅菌的收集管中(zhong)送(song)檢。
4、病竈(zao)部位樣品(pin)：取(qu)發(fa)病部(bu)位新鮮(xian)滲出物、粘液(ye)膿(nong)血送檢(jian)。
壹、稀釋(shi) PCR 陽性(xing)對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例）
1. 註意(yi)：由(you)於(yu)標準品(pin)濃(nong)度(du)非常高(gao)，因此(ci)下列稀釋(shi)操(cao)作壹定要(yao)在獨立(li)的(de)區域進(jin)行，千(qian)萬(wan)不能(neng)汙(wu)染(ran)樣品(pin)或本(ben)試(shi)劑盒的其他成分）。為增加產(chan)品(pin)穩定性和(he)避(bi)免擴散(san)傳染(ran)性(xing)病原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不提供活(huo)體樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，只提供可以(yi)直(zhi)接使用的 DNA段(duan)作(zuo)為陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個離心(xin)管，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍(qiang)頭分別(bie)加入 45 μL 熒光(guang) PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶芯(xin)槍(qiang)頭，下同(tong)）。
4. 在 7 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)，充分震(zhen)蕩 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所(suo)得(de))，充分震(zhen)蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)到 5 號管中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面的操(cao)作直(zhi)到得(de)到 6 個稀釋(shi)度(du)的陽性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
註：上(shang)述(shu)樣品(pin)建議經過(guo)增菌後(hou)，收集培(pei)養物(wu)用於檢測(ce)。 
二、DNA提取：
可采(cai)用PCR試劑(ji)盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提液(ye)，按(an)以(yi)下說(shuo)明進行DNA核(he)酸(suan)的粗提。也可采(cai)購上(shang)海(hai)澤(ze)葉生物科技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司(si)生產(chan)的(de)DNA提取試(shi)劑盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒光(guang)配(pei)套(tao))或其(qi)他合(he)適的商(shang)業化產(chan)品(pin)，並按(an)照(zhao)相(xiang)應(ying)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明進行操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體培養(yang)物：取(qu)液(ye)體培養(yang)物100μL加到1.5mL無菌離心(xin)管中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量(liang)吸棄上(shang)清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
2、固體培養(yang)物：挑(tiao)取(qu)單(dan)克隆(long)菌落與50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒(li)大小(xiao)糞便於(yu)滅菌離心(xin)管中(zhong)，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
4、其他液(ye)體標本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
註：陽(yang)性對(dui)照(zhao)和陰(yin)性對(dui)照(zhao)為已(yi)經抽(chou)提好的(de)核(he)酸(suan)(無需提取)，直(zhi)接取(qu)5μL加入(ru)到反應(ying)體系中(zhong)即可(ke)。由(you)於(yu)陽性對(dui)照(zhao)濃度(du)較高(gao)，建議在樣品(pin)制(zhi)備(bei)區域加(jia)入陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。 
HFL1人(ren)胚肺(fei)成纖維細胞(bao) HFL1 in human embryo lung fibroblasts F12K培養(yang)基+10%FBS鋅試(shi)劑(≥85%（HPLC）)Zincon質(zhi)量(liang)規(gui)格：≥85%（HPLC）

SCGB1A1 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白(bai) (His 標簽(qian))1,3-二甲(jia)基-5-吡唑(zuo)酮1,3-Dimethyl-5-pyrazolone質(zhi)量(liang)規(gui)格：0.96

人(ren)胚腎(shen)二(er)倍(bei)體細胞(bao);CCC-HEK-1 人(ren)氣(qi)管上(shang)皮(pi)細胞(bao)*培(pei)養基 100mL氟(fu)啶(ding)胺(an)（標準品(pin)）Fluazinam質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析標準品(pin)

小鼠(shu)骨髓(sui)瘤(liu)細胞(bao);Sp2/0-Ag14氟(fu)節胺(an)（標準品(pin)）Flumetralin質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析標準品(pin)

CD300A Others Human 人(ren) CD300A 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 氯吡(bi)脲（標準品(pin)）Forchlorfenuron質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析標準品(pin)
大鼠(shu)腎(shen)系(xi)膜細胞(bao);RMC 骨肉瘤(liu)細胞(bao)，U-2 OS細胞(bao) Walker-256細胞(bao)，大(da)鼠肝(gan)癌細胞(bao)(癌細胞(bao)接(jie)種(zhong)到肝(gan)臟成瘤)D-賴氨酸(suan)鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)H-D-Lys-OH·HCl質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,BR

HCT116, 人(ren)結(jie)直(zhi)腸癌細胞(bao) HumanD-甘露(lu)糖(標準品(pin))D-Manse質(zhi)量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標準品(pin)

MSTN Others Mouse 小鼠(shu) MSTN / GDF8 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) N-辛酰基-N-甲(jia)基葡(pu)糖(tang)胺(an)(MEGA-8)N-Octayl-N-methylglucamine質(zhi)量(liang)規(gui)格：≥97% ,進分

平(ping)衡(heng)鹽(yan)溶(rong)液(ye)HBSSN-癸(gui)酰基-N-甲(jia)基葡(pu)糖(tang)胺(an)(MEGA-10)N-Decayl-N-methylglucamine 質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BR

IL17RA Others Rat 大鼠(shu) IL17RA / IL17R 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 辛基-β-D-硫(liu)代吡喃(nan)葡萄糖(tang)苷n-Octyl-β-D-Thioglucopyraside質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BR
白(bai)細胞(bao)介(jie)素(su)-17超家(jia)族(zu)非(fei)草隆(long)(標準品(pin))質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析標準品(pin)Fenuron

人(ren)腦血管周(zhou)細胞(bao) (HBVP) ( 5×105 ) 人(ren)臍靜(jing)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌細胞(bao) MDA-MB-231(ATCC來源(yuan)), 人(ren)癌細胞(bao)丁(ding)(B9)(標準品(pin))質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析標準品(pin)Damizide

CM-R041大鼠(shu)肝(gan)星(xing)形(xing)細胞(bao)*培(pei)養基100mL麗絲(si)胺(an)羅(luo)丹明B/酸(suan)性紅(hong)52/磺(huang)酰羅丹明B 質(zhi)量(liang)規(gui)格：BSSulforhodamine B

IFNGR1 Others Rat 大鼠(shu) IFNGR / IFNGR1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 麗絲(si)胺(an)羅(luo)丹明B/酸(suan)性紅(hong)52/磺(huang)酰羅丹明B 質(zhi)量(liang)規(gui)格：BS Sulforhodamine B

人(ren)脊柱(zhu)間(jian)充質(zhi)幹細胞(bao)HVMSC氯化羅(luo)丹明110；羅丹明110質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%Rhodamine 110 chloride
谷(gu)芽(ya)染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書小鼠(shu)中腦(nao)縫(feng)神(shen)經細胞(bao)(腦脊(ji))(MN-r)(1×106) HT-29, 人(ren)結(jie)腸癌細胞(bao) HumanLGD-4033 質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BRLGD4033

兔主(zhu)動脈(mai)平(ping)滑(hua)肌細胞(bao);SMC5-溴嘧(mi)啶(ding)質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%5-Bromopyrimidine

CSK Others Mouse 小鼠(shu) CSK / C-Src kinase 桿狀病毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 阿(e)質(zhi)量(liang)規(gui)格：HSP90 抑制(zhi)劑，進(jin)分17-DMAG

臍動(dong)脈(mai)內皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(fang)(1ml)大豆(dou)
實驗(yan)流程：
1. 整個檢測(ce)過(guo)程應(ying)嚴格按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明書要(yao)求分別(bie)在試(shi)劑準備(bei)區、樣本(ben)處(chu)理(li)區和PCR擴增區進行操作，各區實驗服、儀(yi)器 、耗材應(ying)獨立(li)使用，不能(neng)混用；實驗用吸頭采(cai)用帶濾芯(xin)吸頭；樣本(ben)處(chu)理(li)區應(ying)配(pei)有(you)生物安全(quan)櫃(gui)，樣本(ben)處(chu)理(li)在生物安全(quan)櫃(gui)中(zhong)進行操作(zuo)；三個區應(ying)該配(pei)有(you)紫外線(xian)殺菌裝置。
2. 為避(bi)免RNA降解(jie)，樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程應(ying)在0-4℃條(tiao)件下操作(zuo)，且(qie)完成實驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程中(zhong)使用的器具耗材應(ying)經過(guo)無核(he)酶處(chu)理(li)。

3. 每(mei)次實(shi)驗(yan)應(ying)該設置陰(yin)、陽性對(dui)照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)在使用前應(ying)該在常(chang)溫下充分融(rong)化混勻(yun)，並應(ying)瞬時(shi)離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒內所(suo)配(pei)陰(yin)性和陽性(xing)對(dui)照(zhao)在壹(yi)次使用前應(ying)全(quan)部(bu)轉移(yi)至(zhi)標本(ben)準備(bei)區，並單(dan)獨存(cun)放(fang)。
6. 為防(fang)止(zhi)熒光幹擾(rao)，應(ying)避(bi)免裸手(shou)直(zhi)接接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並應(ying)避(bi)免在PCR反應(ying)管上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴增相關(guan)參(can)數(shu)應(ying)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明書相(xiang)關(guan)要(yao)求進行設置；不同(tong)批號試(shi)劑不能(neng)混用。
8. ABI系列熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數設置中不選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅基因選(xuan)擇None。
9. 實驗(yan)過(guo)程中(zhong)產(chan)品(pin)的廢(fei)棄物(wu)應(ying)該進行(xing)無(wu)害(hai)化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄。