青(qing)葙(xiang)子(zi)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)*

儲(chu)存(cun)條件：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及(ji)保存(cun)方法(fa)
1. 血清：使(shi)用不(bu)含(han)熱原和(he)內毒素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收(shou)集血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘將(jiang)血清和(he)紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心地(di)分離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或肝素(su)抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘取上清。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘去(qu)除(chu)顆粒和聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加入(ru)適(shi)量生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗碎。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘取上清。
5. 保存(cun)：如(ru)果樣本(ben)收(shou)集後不(bu)及(ji)時檢(jian)測，請(qing)按(an)壹(yi)次用量分裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反復凍融(rong)，在室溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣(yang)品(pin)均勻(yun)地(di)充(chong)分解凍。

特點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用戶(hu)只需(xu)要提供病毒樣品(pin)。
2. 根(gen)據地(di)黃(huang)保守(shou)序列設計的(de)專(zhuan)壹(yi)性引物(wu)，與(yu)相(xiang)關(guan)病毒無交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈敏度(du)可(ke)以達到(dao)幾百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管式熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒(he)足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體系的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適(shi)用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。

使(shi)用方法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養(yang)按(an)照樣品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養(yang)按(an)照《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微生(sheng)物(wu)學檢(jian)驗(yan)阪崎腸(chang)桿菌檢(jian)驗(yan)要求進行。
2、血液樣(yang)品(pin)：用無菌註(zhu)射(she)器(qi)抽(chou)取受檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血2mL，註(zhu)入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸檬(meng)酸鈉)抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便樣品(pin)：取糞(fen)便置於(yu)滅菌(jun)的(de)收(shou)集管中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部位樣品(pin)：取發病部(bu)位新鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘液膿血送檢(jian)。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度(du)為(wei)例）
1. 註(zhu)意：由(you)於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非(fei)常高，因(yin)此(ci)下(xia)列稀釋操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要在獨立的(de)區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬不(bu)能汙(wu)染(ran)樣品(pin)或本(ben)試劑盒(he)的(de)其(qi)他成分）。為增加產品(pin)穩定(ding)性(xing)和避免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染(ran)性病原(yuan)，本(ben)產品(pin)不(bu)提(ti)供活體樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性對(dui)照，只提(ti)供可以直接使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離心(xin)管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍頭(tou)分別加入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板稀(xi)釋液（用帶芯(xin)槍頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照，充分震蕩 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上步稀釋所得)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照到(dao) 5 號管中(zhong)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待用。
7. 重(zhong)復上面(mian)的(de)操(cao)作(zuo)直(zhi)到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀(xi)釋度(du)的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待用。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣(yang)品(pin)建議經(jing)過增菌(jun)後(hou)，收(shou)集培(pei)養(yang)物(wu)用於(yu)檢(jian)測。 
二、DNA提取：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒(he)配備的(de)DNA抽(chou)提(ti)液，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核(he)酸的(de)粗(cu)提(ti)。也(ye)可(ke)采(cai)購(gou)上海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科(ke)技有限(xian)公(gong)司(si)生產的(de)DNA提(ti)取試劑盒(he)(過柱法(fa)-熒(ying)光(guang)配套(tao))或其(qi)他合適的(de)商(shang)業(ye)化(hua)產品(pin)，並按(an)照相應(ying)試劑盒(he)說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到(dao)1.5mL無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸棄(qi)上(shang)清，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
2、固體培(pei)養(yang)物(wu)：挑取單(dan)克(ke)隆(long)菌落與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便樣品(pin)：挑取米粒大小糞(fen)便於(yu)滅菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，加入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
4、其(qi)他液體(ti)標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性對(dui)照和陰(yin)性對(dui)照為已(yi)經(jing)抽(chou)提(ti)好(hao)的(de)核(he)酸(無需(xu)提取)，直(zhi)接(jie)取5μL加入(ru)到(dao)反應(ying)體系中(zhong)即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度(du)較高，建議在樣品(pin)制備區(qu)域(yu)加入(ru)陽(yang)性對(dui)照。 
IL13RA2 Others Rat 大鼠 IL13RA2 / IL13R 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 四氫甲基(ji)嘧啶(ding)羧(suo)酸(suan)(>98%，BR)Ectoine質(zhi)量規(gui)格：>98%，BR

人視(shi)網膜muller細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL氧化鎂(mei)碳(tan)酸(suan)鈉(na)合(he)劑Eschka's mixture質量規(gui)格：BC

GH3細(xi)胞(bao)，大(da)鼠埀體瘤(liu)細(xi)胞(bao) 5637(人膀(pang)胱癌細(xi)胞(bao)) 非(fei)洲綠(lv)猴腎(shen)細(xi)胞(bao);Vero E6乙酯(zhi)(>98%,BR)Ethyl dodeconoate質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR

EFNA1 Protein Human 重(zhong)組(zu)人 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋(dan)白 (His & Fc 標(biao)簽)乙基(ji)曙紅(>95%,BS)Ethyl eosin質(zhi)量規(gui)格：>95%,BS

HCCLM3(人高轉(zhuan)移肝(gan)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 肝竇(dou)內皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)沒(mei)食子(zi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)Ethyl gallate質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR
IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 甲基(ji)倍(bei)他(ta)環(huan)糊精,2,6-二(er)甲基(ji)-β-環(huan)糊精Me-β-CD質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR

IMR-32 人神(shen)經(jing)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)埃博(bo)黴(mei)素(su)B；帕土匹龍Epothilone B(EPO906, Patupilone) 質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR

CEM/C1人急(ji)性(xing)細(xi)胞(bao)白血病細(xi)胞(bao) CEM/C1 human acute lymphoblastic leukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSA 83-01;A83-01A8301質量規(gui)格：>98%,BR

VEGFA Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠 VEGFA / VEGF164 蛋(dan)白Amresco 進(jin)分瓊脂粉Agar質量規(gui)格：BR,進分

小鼠垂(chui)體細(xi)胞(bao)(MPC)(5×105) 5637, 人膀(pang)胱癌細(xi)胞(bao) Human氟伏沙明(ming)Fluvoxamine質量規(gui)格：>98%,油狀
SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) -d8Budesonide-d8質量規(gui)格：美(mei)國進口

EJ 人膀(pang)胱癌細(xi)胞(bao)6α-羥基(ji)6α-Hydroxy Budesonide質量規(gui)格：美(mei)國進口

SW1116人結腸(chang)腺(xian)癌細(xi)胞(bao) SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培(pei)養(yang)基(ji)(GIBCO)+10%FBS6β-羥基(ji)6β-Hydroxy Budesonide質量規(gui)格：美(mei)國進口

CD70 Protein Rat 重(zhong)組(zu)大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽)亞(ya)鈣(gai)水合(he)物(wu)Folinic acid calcium salt hydrate質(zhi)量規(gui)格：美(mei)國進口

人脂肪細(xi)胞(bao)-內臟(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC來(lai)源), 人癌細(xi)胞(bao) Human鈉鹽 Camptothecin質(zhi)量規(gui)格：美(mei)國進口
青(qing)葙(xiang)子(zi)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)*REG1B Others Human 人 REG1B / PSPS2 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 溴百裏酚藍(lan)鈉鹽(yan)25克(ke)

貓(mao)星形腦膠(jiao)質細(xi)胞(bao);PG-4(S+L-)2，4-二叔丁(ding)基(ji)本(ben)酚，99%A 2,4-Di-tqrt-butylphqnol 96-76-4

CDCP1 Others Human 人 CDCP1 / CD318 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 粘蛋(dan)白胭(yan)脂紅5KU

人前(qian)列(lie)腺(xian)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL四(si)本(ben)硼鉀100毫克保存(cun)：-20℃

A-431細(xi)胞(bao)，人表(biao)皮癌細(xi)胞(bao) 流感嗜血桿菌 BALB/C小鼠肝瘤(liu)
實(shi)驗流程：
1. 整個(ge)檢(jian)測過(guo)程(cheng)應(ying)嚴格按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)要求分別在試劑準備區(qu)、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進(jin)行操(cao)作(zuo)，各(ge)區(qu)實驗服、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立使(shi)用，不(bu)能混(hun)用；實驗用吸頭采(cai)用帶濾芯(xin)吸頭；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區應(ying)配有生物(wu)安全櫃，樣本(ben)處(chu)理(li)在生物(wu)安全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配有紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝置。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降解(jie)，樣本(ben)處(chu)理(li)過程(cheng)應(ying)在0-4℃條(tiao)件下操(cao)作(zuo)，且(qie)完成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過程(cheng)中(zhong)使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過無核(he)酶(mei)處(chu)理(li)。

3. 每(mei)次(ci)實驗應(ying)該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試劑盒(he)所有試劑在使(shi)用前應(ying)該(gai)在常溫下充(chong)分融(rong)化混(hun)勻，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離心(xin)。
5. 試劑盒(he)內所配陰(yin)性和(he)陽(yang)性對(dui)照在壹(yi)次使(shi)用前應(ying)全部轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本(ben)準備區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為防止(zhi)熒(ying)光(guang)幹擾，應(ying)避免(mian)裸(luo)手直接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應(ying)管，並(bing)應(ying)避免(mian)在PCR反應(ying)管上(shang)進(jin)行(xing)任何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參(can)數應(ying)按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相(xiang)關(guan)要求進行設(she)置；不(bu)同(tong)批號試劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)參(can)數設置中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校正，淬滅基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程中(zhong)產品(pin)的(de)廢棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處(chu)理(li)後方可(ke)丟(diu)棄(qi)。