1、ELISA試驗中(zhong)樣(yang)品都要(yao)做復(fu)孔或三(san)孔，然後(hou)計算每(mei)個濃(nong)度(du)規範品的均勻(yun)OD值(zhi)，復(fu)孔的變異系數(shu)應(ying)該小(xiao)於20%。

　　2、均勻(yun)OD值(zhi)減去空白孔的OD值(zhi)。

　　3、制造(zao)規(gui)範曲線(xian)。

　　以(yi)減去本(ben)底(di)後(hou)的(de)OD值(zhi)為(wei)X軸(zhou)，規範品的濃(nong)度(du)為Y軸，利用作圖軟件得(de)出(chu)壹個適宜的計算辦法。主張(zhang)運(yun)用(yong)適宜的軟件來作圖，比方(fang)CurveExpert 1.4。這(zhe)款(kuan)軟件能(neng)夠給(gei)出(chu)許多(duo)種(zhong)辦(ban)法(比方(fang)直(zhi)線(xian)、半(ban)對數(shu)、對數(shu)、四參(can)數(shu)方(fang)程(cheng)等(deng))並(bing)從(cong)中(zhong)挑(tiao)選(xuan)壹(yi)條(tiao)zui適宜(yi)的方(fang)程(cheng)。要(yao)想(xiang)檢驗某(mou)條(tiao)曲線(xian)是否與表(biao)中(zhong)數(shu)據(ju)符(fu)合，能(neng)夠將(jiang)規(gui)範品的濃(nong)度(du)作為未知(zhi)數(shu)，將(jiang)對應(ying)的OD值(zhi)帶(dai)入該方(fang)程(cheng)，計算出規(gui)範品的濃(nong)度(du)，得(de)到(dao)的成(cheng)果(guo)應(ying)該(gai)與(yu)實(shi)際濃(nong)度(du)很接近(+/-10%)。挑選(xuan)擬合(he)度(du)zui高(gao)的那(na)條(tiao)曲線(xian)。
 

　　假如(ru)出(chu)現規(gui)範曲線(xian)的(de)線(xian)性欠好(hao)，或平(ping)行(xing)性欠好(hao)(雙孔對照(zhao)孔的OD值(zhi)差(cha)別(bie)很(hen)大)，或(huo)出現(xian)跳孔的現(xian)象(xiang)，可(ke)能(neng)引起(qi)的(de)原因(yin)有酶標板孔間相互(hu)汙染、洗(xi)板後(hou)未能(neng)趕(gan)快進(jin)行(xing)下壹步(bu)操作、增(zeng)加(jia)樣(yang)品或其它試劑(ji)時(shi)操作的辦法不對、孵育方(fang)位(wei)避光性不佳或(huo)蓋板膜(mo)沒有(you)密(mi)封好(hao)使得(de)水(shui)分蒸發(fa)、酶標板孔問參(can)加的(de)試(shi)劑量(liang)不同，相(xiang)對應(ying)的解(jie)決(jue)辦(ban)法是加樣時(shi)請當(dang)心(xin)勿(wu)將(jiang)液體(ti)濺人另(ling)壹孔中(zhong)，人(ren)工洗板時(shi)也請當(dang)心(xin)，勿(wu)將(jiang)洗(xi)滌(di)液濺人另(ling)壹微(wei)孔中(zhong)、在洗板後(hou)及時(shi)進(jin)行(xing)下壹步(bu)操作、增(zeng)加(jia)試(shi)劑(ji)時(shi)請懸空(kong)滴(di)入，切記勿(wu)將(jiang)槍(qiang)頭接觸(chu)到(dao)板孔內，汲取(qu)不同試(shi)劑瓶(ping)中(zhong)的(de)液體(ti)時(shi)就(jiu)要更換壹(yi)次槍(qiang)頭、承(cheng)認(ren)孵育環(huan)境不透光，蓋板膜(mo)將(jiang)酶標板密(mi)封好(hao)、運(yun)用(yong)已(yi)校(xiao)正過的微(wei)量(liang)加(jia)樣器，如將(jiang)*次參(can)加液體(ti)時(shi)槍(qiang)頭上留(liu)有壹(yi)滴的(de)液體(ti)滴(di)下，那麽將以(yi)後(hou)槍(qiang)頭上留(liu)有的(de)液體(ti)也(ye)滴(di)下，以(yi)確(que)保參(can)加液體(ti)體(ti)積(ji)的(de)壹(yi)致性。