顯(xian)色是(shi)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒中的後壹(yi)步(bu)溫育反應(ying),此(ci)時酶催化無色的底物(wu)生成(cheng)有色的產物(wu)。反應(ying)的溫度和(he)時間仍(reng)是影(ying)響(xiang)顯(xian)色的因(yin)素。在(zai)壹(yi)定(ding)時間內,陰性孔可(ke)保持無(wu)色,而(er)陽性孔則(ze)隨(sui)時間的延(yan)長而(er)呈(cheng)色加(jia)強(qiang)。適當提(ti)高(gao)溫度有(you)助(zhu)於加速(su)顯(xian)色進行(xing)。在(zai)定(ding)量測(ce)定(ding)中,加(jia)入(ru)底物(wu)後的反應(ying)溫度和(he)時間應(ying)按規(gui)定(ding)力求準(zhun)確(que)。定(ding)性測(ce)定(ding)的顯(xian)色可(ke)在(zai)室(shi)溫進行(xing),時間壹(yi)般不(bu)需(xu)要(yao)嚴格(ge)控制,有時可(ke)根(gen)據(ju)陽(yang)性對照孔和(he)陰性對照孔的顯(xian)色狀(zhuang)況(kuang)適(shi)當縮(suo)短或(huo)延(yan)長反應(ying)時間及時判(pan)斷(duan)。
 

　　ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒實(shi)驗(yan)中顯(xian)色十(shi)分(fen)重(zhong)要(yao)，當ELISA沒有顯(xian)色，可(ke)能(neng)原因(yin)有這(zhe)幾個(ge)方面(mian)：
 

　　1.包(bao)被(bei)原：包括(kuo)妳的包被(bei)液有無問題，有(you)沒有(you)配錯。包(bao)被(bei)原壹般加100微升(sheng)，37度2小(xiao)時；
 

　　2.封閉：封閉液用的是否適合(he)？妳說做了(le)幾次都沒(mei)顯(xian)色，空(kong)白孔也(ye)不(bu)顯(xian)嗎(ma)？如果(guo)空白也無顏  色，那(na)封閉就沒有問題。壹(yi)般封閉是200微升(sheng)每孔，也(ye)可(ke)以(yi)滿孔封(feng)閉
 

　　3.壹抗(kang)：檢查(zha)妳的壹抗(kang)是否(fou)失效(xiao)。是(shi)否(fou)是(shi)在37度反應(ying)
 

　　4.二抗(kang)：底物(wu)，底物(wu)緩沖液……這些(xie)都(dou)要好好檢查(zha)！
 

　　5.洗滌：用(yong)PBST洗滌，包(bao)被(bei)和(he)封閉時洗板(ban)3次；壹抗(kang)二抗(kang)洗滌5次，每次間隔(ge)3分鐘(zhong)。手工(gong)和(he)機器(qi)洗滌沒(mei)什(shen)麽(me)不(bu)同(tong)，就(jiu)是(shi)省(sheng)力壹些(xie)。洗5次不(bu)會有負(fu)影(ying)響(xiang)，在(zai)壹(yi)抗(kang)和(he)二抗(kang)洗滌過(guo)程(cheng)中，恰(qia)恰(qia)需要(yao)多洗幾次，這樣(yang)有助於(yu)減(jian)少非特(te)異性吸(xi)附(fu)。
 

　　避(bi)免顯(xian)色淡(dan)靈敏(min)度低，需註意以下幾點(dian)：
 

　　1、 常(chang)規ELISA試(shi)劑(ji)盒平(ping)衡至30min；
 

　　2、 檢(jian)測(ce)抗(kang)體、偶(ou)聯HRP請按(an)說明書(shu)稀(xi)釋比；
 

　　3、 樣(yang)本、抗(kang)體孵(fu)育條件(jian)(溫度、轉(zhuan)速(su))，請根(gen)據(ju)說明書(shu)；
 

　　4、 控制TMB底物(wu)顯(xian)色時間。