ELISA(酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附測(ce)定(ding))是壹(yi)種(zhong)廣泛應(ying)用的(de)免(mian)疫(yi)分(fen)析技(ji)術(shu),用於檢(jian)測(ce)生(sheng)物樣本中(zhong)的特定抗(kang)原(yuan)或(huo)抗體。在(zai)進(jin)行ELISA實驗(yan)時(shi),可能會(hui)遇(yu)到(dao)多(duo)種(zhong)幹擾因(yin)素,這(zhe)些(xie)因(yin)素可能導(dao)致實驗(yan)結果(guo)出(chu)現假陽性(xing)和(he)假陰性(xing)。進(jin)行幹(gan)擾實驗(yan)是為了驗(yan)證試(shi)劑盒的特異性(xing),確(que)保(bao)檢(jian)測(ce)的(de)是目標(biao)抗原(yuan)而(er)非其(qi)他(ta)物質。
以下是壹(yi)些(xie)常(chang)見(jian)的(de)幹(gan)擾實驗(yan)方法:
1. 利用幹(gan)擾物質進(jin)行測(ce)試(shi):可以通過向ELISA板中(zhong)加入(ru)已知(zhi)的幹擾物質(如類風濕(shi)因(yin)子(zi)、補(bu)體、嗜異性(xing)抗(kang)體等(deng))來(lai)測(ce)試(shi)試劑盒的特異性(xing)。如果(guo)試劑(ji)盒在(zai)加入(ru)幹(gan)擾物質後(hou)仍(reng)能準(zhun)確(que)檢(jian)測(ce)目(mu)標抗原(yuan),說明(ming)其(qi)具(ju)有(you)良好的(de)特異性(xing)。
2. 交(jiao)叉實驗(yan):如果(guo)購(gou)買了同(tong)壹(yi)公(gong)司(si)不(bu)同(tong)批次的(de)ELISA試(shi)劑(ji)盒,可以通過交(jiao)叉實驗(yan)來驗(yan)證試(shi)劑盒的真偽(wei)。即(ji)將不(bu)同(tong)批次的(de)試(shi)劑(ji)盒用於同壹(yi)組(zu)樣本中(zhong),比(bi)較結果(guo)的壹(yi)致性(xing)。
3. 使用替(ti)代(dai)指(zhi)標進(jin)行驗(yan)證:某(mou)些試劑盒可能使(shi)用壹(yi)種(zhong)指(zhi)標來(lai)冒充(chong)其(qi)他(ta)指(zhi)標,例如用TGF beta作(zuo)為檢(jian)測(ce)抗(kang)體。通過使用不(bu)同(tong)的標準(zhun)品(pin)或(huo)已知(zhi)濃(nong)度的(de)目(mu)標抗(kang)原來驗(yan)證試(shi)劑盒是否能特異性(xing)地(di)檢(jian)測(ce)目(mu)標抗原(yuan)。
4. 基質(zhi)效應(ying)分(fen)析:由(you)於血清(qing)等(deng)復(fu)雜生物樣本中(zhong)含有(you)多種(zhong)蛋(dan)白(bai)質,可能會(hui)對(dui)檢(jian)測(ce)產(chan)生影(ying)響(xiang)。通(tong)過在(zai)不(bu)同(tong)濃(nong)度的(de)基(ji)質中(zhong)加入(ru)已知(zhi)濃(nong)度的(de)目(mu)標抗(kang)原來分(fen)析基質效應(ying),確(que)保(bao)在(zai)真實樣本中(zhong)能準(zhun)確(que)檢(jian)測(ce)目(mu)標抗原(yuan)。
5. 鉤狀(zhuang)效應(ying)驗(yan)證:對(dui)於高(gao)濃(nong)度的(de)目(mu)標抗(kang)原,可能因(yin)抗原(yuan)過量而(er)出(chu)現假陰性(xing)結果(guo)(後(hou)帶(dai)效應(ying))。通(tong)過稀釋(shi)樣本並重復(fu)檢(jian)測(ce)來(lai)驗(yan)證是否存(cun)在(zai)鉤(gou)狀(zhuang)效應(ying)。
進(jin)行幹(gan)擾實驗(yan)時(shi),需要(yao)嚴格按照試劑盒說明(ming)書操(cao)作,並(bing)註意實驗(yan)條件(jian)的標準(zhun)化(hua),以確保(bao)實驗(yan)結果(guo)的可靠性和可重復(fu)性。此外(wai),還(hai)應(ying)關(guan)註樣本處理、試(shi)劑(ji)選擇(ze)、操(cao)作步(bu)驟(zhou)等(deng)各(ge)個(ge)環(huan)節,以減少外(wai)部因(yin)素對(dui)實驗(yan)結果(guo)的幹(gan)擾。