內(nei)毒素ELISA檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒是(shi)壹(yi)種用(yong)於體(ti)外(wai)定量檢(jian)測(ce)生(sheng)物(wu)樣本(ben)中內(nei)毒素（ET）濃度的工(gong)具(ju)，在(zai)科(ke)研和醫(yi)學(xue)診(zhen)斷(duan)領(ling)域應(ying)用廣(guang)泛。該(gai)試(shi)劑盒多基於(yu)雙抗(kang)體(ti)夾(jia)心法或(huo)競爭(zheng)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附試(shi)驗(yan)技(ji)術(shu)。以(yi)雙抗(kang)體(ti)夾(jia)心法為例，用(yong)純化(hua)的內(nei)毒素抗(kang)體(ti)包被微孔(kong)板(ban)制(zhi)成固相抗(kang)體(ti)，往包被單抗(kang)的微孔(kong)中依次(ci)加(jia)入(ru)內(nei)毒素，再(zai)與(yu)HRP標記的內(nei)毒素抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)，形成抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶(mei)標抗(kang)體(ti)復(fu)合(he)物(wu)，經過徹(che)d洗滌(di)後加(jia)底(di)物(wu)TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色，並在(zai)酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最終的黃色。顏色的深(shen)淺(qian)和(he)樣品中的內(nei)毒素呈正(zheng)相關，用(yong)酶(mei)標儀在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸光度（OD值(zhi)），通過標準(zhun)曲(qu)線(xian)計算(suan)樣品中內(nei)毒素濃度。
（1）試(shi)劑平衡
未開封試(shi)劑：
從冰箱取出(chu)後，室溫平衡30分(fen)鐘（具(ju)體(ti)時間參(can)考(kao)說明(ming)書(shu)），避(bi)免(mian)溫(wen)差導致(zhi)冷凝水影響反應(ying)。
已分(fen)裝(zhuang)試(shi)劑：
若需冷凍(dong)保(bao)存（如-20℃），提(ti)前取出(chu)置(zhi)於2-8℃緩慢解凍(dong)，避(bi)免(mian)直(zhi)接(jie)常(chang)溫解凍(dong)。
（2）器材(cai)準(zhun)備(bei)
耗(hao)材(cai)要求：
使(shi)用(yong)無(wu)酶(mei)、無內(nei)毒素汙染的耗(hao)材(cai)（如進口(kou)ELISA專用吸頭、壹(yi)次(ci)性EP管(guan)、96孔(kong)板(ban)等(deng)）。
槍頭(tou)盒需滅(mie)菌(jun)處(chu)理，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。
儀器校準(zhun)：
提前預熱酶(mei)標儀（37℃），校準(zhun)波長(chang)（通常(chang)450 nm或(huo)廠家指(zhi)定(ding)波長(chang)）。
洗板機檢(jian)查(zha)：確(que)保(bao)吸液充分(fen)，殘留液(ye)≤5μL/孔(kong)。
（3）標準(zhun)品配制(zhi)
梯度(du)稀釋：
按說明(ming)書(shu)用“標準(zhun)品稀釋液”逐級(ji)稀釋（如1:2或(huo)1:10），混勻後立即(ji)使(shi)用(yong)。
示例：原液濃(nong)度100 EU/mL→50→25→12.5 EU/mL等(deng)。
註意(yi)事(shi)項(xiang)：
每級(ji)稀釋後輕輕拍打(da)混(hun)勻，避(bi)免(mian)氣(qi)泡產生。
最後壹(yi)管作(zuo)為空白(bai)對照（如PBS或(huo)專用(yong)稀釋液）。
