細胞冷(leng)凍(dong)yell freexirig是(shi)保(bao)存微(wei)生物或動(dong)植(zhi)物細胞株(zhu)的常(chang)用(yong)方法。冷(leng)凍(dong)細胞到(dao)底該(gai)如(ru)何(he)活化(hua)，壹(yi)個(ge)不小心，細胞就受(shou)損(sun)了。冷(leng)凍(dong)細胞活化(hua)的正確操作(zuo)步驟(zhou):

1. 冷(leng)凍(dong)細胞之活化(hua)原(yuan)則(ze)為(wei)快速(su)解(jie)凍，以(yi)避免(mian)冰晶重新結(jie)晶而(er)對細胞造成傷(shang)害(hai)，導致細胞之死(si)亡。

2. 細胞活化(hua)後，約需數(shu)日(ri)，或繼(ji)代壹(yi)至二(er)代，其(qi)細胞生長或特性表(biao)現才(cai)會(hui)恢(hui)復正(zheng)常(chang)(例(li)如(ru)產(chan)生單株(zhu)抗(kang)體(ti)或是(shi)其(qi)它(ta)蛋白質)。

3.步(bu)驟(zhou)：

①操(cao)作(zuo)人(ren)員應戴(dai)防護(hu)面罩(zhao)及手套，防止(zhi)冷(leng)凍(dong)管(guan)可(ke)能(neng)爆(bao)裂(lie)之傷(shang)害(hai)。

②自液氮(dan)或幹(gan)冰容器中取(qu)出(chu)冷(leng)凍(dong)管(guan)，檢查蓋(gai)子(zi)是(shi)否旋(xuan)緊(jin)，由(you)於(yu)熱脹冷(leng)縮(suo)過(guo)程(cheng)，此時蓋子(zi)易(yi)松掉。

③將(jiang)新鮮(xian)培養(yang)基(ji)置於(yu)37 °C 水(shui)槽(cao)中回溫(wen)，回溫(wen)後噴以(yi)70 % 酒精並擦(ca)拭之，移入(ru)無(wu)菌(jun)操作(zuo)臺內(nei)。

④取(qu)出(chu)冷(leng)凍(dong)管(guan)，立即放入(ru)37 °C 水(shui)槽(cao)中快速(su)解(jie)凍，輕搖冷(leng)凍(dong)管(guan)使其(qi)在(zai)1 分鐘(zhong)內全部(bu)融(rong)化(hua)，以(yi)70%ethanol 擦(ca)拭保存管(guan)外部，移入(ru)無(wu)菌(jun)操作(zuo)臺內(nei)。

⑤取(qu)出(chu)0.9 ml 解(jie)凍之細胞懸(xuan)浮(fu)液，緩緩加入(ru)有(you)培養(yang)基(ji)之培養(yang)容(rong)器(qi)內(nei)(稀(xi)釋(shi)比(bi)例(li)為(wei)1:10～1:15)，混合(he)均勻， 放(fang)入(ru)CO2 培養(yang)箱(xiang)培養(yang)。另取(qu)0.1 ml 解(jie)凍(dong)細胞懸(xuan)浮(fu)液作(zuo)存活(huo)測(ce)試。

⑥解凍(dong)後(hou)是(shi)否立即去(qu)除(chu)冷(leng)凍(dong)保(bao)護(hu)劑(例(li)如(ru)DMSO 或glycerol)，依(yi)細胞種類而(er)異，壹(yi)般而言，大都不(bu)需要立即去(qu)除(chu)冷(leng)凍(dong)保(bao)護(hu)劑。惟若要立即去(qu)除(chu)，則(ze)將(jiang)解(jie)凍(dong)之細胞懸(xuan)浮(fu)液加入(ru)含(han)有(you)5-10 ml 培養(yang)基(ji)之離心管(guan)內，離心1,000 rpm, 5 分鐘(zhong)，移去(qu)上清(qing)液，加入(ru)新鮮(xian)培養(yang)基(ji)，混合(he)均勻，放(fang)入(ru)CO2 培養(yang)箱(xiang)培養(yang)。

⑦若不需立即去(qu)除(chu)冷(leng)凍(dong)保(bao)存(cun)劑，則(ze)在解凍(dong)培養(yang)後(hou)隔(ge)日(ri)更換培養(yang)基(ji)。