ELISA是(shi)酶聯(lian)接(jie)免疫吸(xi)附劑測(ce)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jian)稱(cheng)。它(ta)是(shi)繼(ji)免疫熒光和放射(she)免疫技術之(zhi)後發(fa)展(zhan)起(qi)來(lai)的壹(yi)種免疫酶技術(shu)。由於抗原(yuan)、抗(kang)體的(de)反應在壹種(zhong)固相(xiang)載(zai)體(ti)──聚(ju)苯乙烯微量滴(di)定(ding)板(ban)的孔中(zhong)進行(xing)，每加(jia)入(ru)壹種(zhong)試劑孵育(yu)後，可通(tong)過(guo)洗滌(di)除(chu)去(qu)多余(yu)的遊(you)離反(fan)應物，從(cong)而保證(zheng)試(shi)驗結(jie)果的(de)特異性與(yu)穩定(ding)性(xing)。在實際(ji)應用(yong)中，通(tong)過(guo)不同的(de)設(she)計(ji)，具(ju)體(ti)的(de)方(fang)法步驟可(ke)有多種。
 

　　1.　試劑
 

　　(1)　包被緩沖(chong)液(ye)(PH9.60.05M碳(tan)酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)):NaCO31.59克　NaHCO3　2.93克　　加蒸(zheng)餾(liu)水至(zhi)1000ml
 

　　(2)　洗(xi)滌(di)緩沖(chong)液(ye)(PH7.4PBS)：0.15M　KH2PO40.2克　Na2HPO4·12H2O　2.9克　NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸(zheng)餾(liu)水至(zhi)1000ml
 

　　(3)　稀(xi)釋液:牛(niu)血清白(bai)蛋(dan)白(bai)(BSA)0.1克　加洗滌(di)緩沖(chong)液(ye)至(zhi)100ml　或(huo)以(yi)羊(yang)血清、兔血(xue)清(qing)等(deng)血(xue)清(qing)與(yu)洗滌(di)液(ye)配(pei)成5～10%使用(yong)。
 

　　(4)　終止液(2MH2SO4)：蒸(zheng)餾(liu)水178.3ml，逐(zhu)滴(di)加(jia)入(ru)濃硫酸(suan)(98%)21.7ml。
 

　　(5)　底物緩沖(chong)液(ye)(PH5.0磷(lin)酸(suan)棗(棗)檸(ning)檬酸(suan)):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml　0.1M檸檬酸(suan)(19.2克/L)24.3ml　加蒸(zheng)餾(liu)水50ml。
 

　　(6)　TMB(四甲(jia)基(ji)聯(lian)苯(ben)胺)使用(yong)液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底(di)物緩沖(chong)液(ye)(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl
 

　　(7)　ABTS使用(yong)液:ABTS　0.5mg　底物緩沖(chong)液(ye)(PH5.5)1ml　3%H2O2　2μl
 

　　(8)　抗原(yuan)、抗體(ti)和酶標記(ji)抗(kang)體(ti)。
 

　　(9)　正常(chang)人血(xue)清(qing)和陽性(xing)對照(zhao)血清。
 

　　2.　器(qi)材:
 

　　(1)　聚苯(ben)乙烯塑(su)料(liao)板(ban)(簡(jian)稱(cheng)酶標板(ban))40孔或(huo)96孔，ELISA檢測(ce)儀，50μl及100μl加(jia)樣器(qi)，塑(su)料(liao)滴(di)頭，小(xiao)毛巾，洗(xi)滌(di)瓶(ping)。
 

　　(2)　小(xiao)燒杯(bei)、玻(bo)璃棒、試(shi)管(guan)、吸(xi)管(guan)和量筒等(deng)。
 

　　(3)　4℃冰(bing)箱，37℃孵育(yu)箱。