ELISA是(shi)壹種(zhong)廣泛應(ying)用(yong)在(zai)測定液(ye)體樣(yang)本(ben)中(zhong)的(de)蛋白(bai)、抗體、或(huo)激素(su)的免疫(yi)分(fen)析技(ji)術(shu)。在(zai)ELISA中(zhong)，進(jin)行各(ge)項(xiang)實驗條(tiao)件(jian)的選(xuan)擇是(shi)很(hen)重(zhong)要(yao)的，其中(zhong)包(bao)括(kuo):

1、固(gu)相(xiang)載體(ti)的(de)選擇：許(xu)多物(wu)質(zhi)可(ke)作(zuo)為(wei)固(gu)相(xiang)載體(ti)，如聚(ju)氯乙烯、聚(ju)苯乙烯、聚(ju)丙酰(xian)胺(an)和(he)纖維素等(deng)。其形式(shi)可(ke)以是(shi)凹(ao)孔(kong)平(ping)板(ban)、試(shi)管、珠(zhu)粒等(deng)。目前常(chang)用(yong)的是(shi)40孔聚(ju)苯乙烯凹(ao)孔(kong)板(ban)。不(bu)管何(he)種(zhong)載體(ti)，在(zai)使用(yong)前均(jun)可(ke)進(jin)行篩(shai)選(xuan)：用(yong)等(deng)量抗原(yuan)包(bao)被(bei)，在(zai)同壹實驗條(tiao)件(jian)下進(jin)行反應，觀(guan)察(cha)其顯色(se)反(fan)應(ying)是(shi)否均壹性，據(ju)此(ci)判(pan)明(ming)其吸附性能是(shi)否良好(hao)。

2、包(bao)被(bei)抗體(ti)(或(huo)抗原(yuan))的選(xuan)擇：將(jiang)抗體(ti)(或(huo)抗原(yuan))吸附在(zai)固(gu)相(xiang)載體(ti)表面時，要求純度要好(hao),吸附時壹般(ban)要求PH在(zai)9.0～9.6之間。吸附溫度(du)，時間及(ji)其蛋白(bai)量也(ye)有(you)壹定影(ying)響(xiang),壹般(ban)多采用(yong)4℃18～24小時。蛋白(bai)質(zhi)包(bao)被(bei)的最適濃度需進(jin)行滴(di)定：即用(yong)不(bu)同(tong)的(de)蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度(0.1、1.0和(he)10μg／ml等(deng))進行包(bao)被(bei)後(hou)，在(zai)其它試(shi)驗條(tiao)件(jian)相(xiang)同時，觀察(cha)陽性(xing)標(biao)本(ben)的(de)OD值(zhi)。選擇OD值(zhi)最大(da)而蛋白(bai)量最少(shao)的(de)濃(nong)度(du)。對於多數蛋白(bai)質(zhi)來(lai)說通(tong)常(chang)為(wei)1～10μg／ml。

3、酶標(biao)記抗體工(gong)作濃(nong)度(du)的(de)選擇：首先用(yong)直接(jie)ELISA法(fa)進(jin)行初(chu)步效價(jia)的(de)滴(di)定(見(jian)酶標(biao)記抗體部(bu)份(fen))。然後(hou)再(zai)固(gu)定其它條(tiao)件或(huo)采取(qu)“方(fang)陣法(fa)"(包(bao)被(bei)物(wu)、待(dai)檢(jian)樣(yang)品(pin)的(de)參(can)考(kao)品及(ji)酶標(biao)記抗體分(fen)別為(wei)不(bu)同(tong)的(de)稀(xi)釋(shi)度)在(zai)正式(shi)實(shi)驗系(xi)統(tong)裏準確地(di)滴(di)定其工作(zuo)濃度(du)。

4、 酶(mei)的(de)底(di)物(wu)及(ji)供(gong)氫體的選擇：對(dui)供(gong)氫體的選擇要(yao)求是(shi)價(jia)廉、安全、有(you)明(ming)顯地(di)顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)，而本(ben)身無(wu)色(se)。有(you)些供(gong)氫體(如OPD等(deng))有(you)潛(qian)在(zai)的致(zhi)癌作(zuo)用(yong)，應註(zhu)意(yi)防護(hu)。有(you)條件者(zhe)應(ying)使用(yong)不(bu)致(zhi)癌、靈(ling)敏(min)度(du)高的(de)供(gong)氫體，如TMB和ABTS是(shi)目前較(jiao)為(wei)滿(man)意(yi)的供(gong)氫體。底(di)物(wu)作用(yong)壹段時間後(hou)，應(ying)加(jia)入(ru)強酸(suan)或(huo)強堿(jian)以終(zhong)止反(fan)應(ying)。通(tong)常(chang)底(di)物(wu)作用(yong)時間，以10-30分(fen)鐘為(wei)宜。底(di)物(wu)使用(yong)液必(bi)須(xu)新(xin)鮮(xian)配(pei)制，尤(you)其是(shi)H2O2在(zai)臨(lin)用(yong)前加(jia)入(ru)。