ELISA測定現通(tong)常為(wei)采用手工操作的(de)以(yi)微(wei)孔(kong)板(ban)條(tiao)為(wei)固相的(de)測(ce)定模式(shi)，測(ce)定(ding)操作非常簡單，壹(yi)般涉(she)及到標本的(de)收(shou)集保存(cun)、試劑準備(bei)、加樣、溫(wen)育(yu)、洗(xi)板(ban)、顯(xian)色、比色、結(jie)果(guo)判斷和結(jie)果(guo)報(bao)告(gao)及解釋(shi)等(deng)方(fang)面(mian)，其中任(ren)壹(yi)步(bu)驟的(de)不(bu)當(dang)都會影(ying)響(xiang)測(ce)定結(jie)果(guo)，且(qie)尤以(yi)加(jia)樣、溫(wen)育(yu)和洗(xi)板(ban)等(deng)步(bu)驟為(wei)甚。現分(fen)述ELISA常(chang)見問題與(yu)解決方(fang)法(fa)：

1. 陰性(xing)對(dui)照出(chu)現陽(yang)性(xing)結(jie)果(guo)

①  樣品(pin)、試劑被汙(wu)染(ran)，或(huo)加樣時操作不(bu)當(dang)導致(zhi)相(xiang)鄰(lin)孔(kong)之(zhi)間(jian)溶(rong)液(ye)濺(jian)灑出現交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)——更換(huan)試劑，小(xiao)心(xin)操作。

② 酶標板(ban)洗(xi)滌(di)不(bu)*——洗(xi)板(ban)前(qian)先(xian)將(jiang)抗(kang)體溶(rong)液倒(dao)幹凈(jing)，然(ran)後清洗(xi)液(ye)倒(dao)滿板(ban)孔(kong)，確保(bao)能(neng)充分(fen)洗(xi)滌(di)。

③ 抗(kang)體量(liang)過多(duo)導致非特異(yi)性(xing)結(jie)合(he)——根(gen)據(ju)說明書的(de)推(tui)薦(jian)量(liang)使(shi)用抗(kang)體，稀釋(shi)抗(kang)體到(dao)適當(dang)濃度(du)。

2．酶標板(ban)整(zheng)體(ti)背景(jing)高(gao)

① 抗(kang)體非(fei)特異(yi)性(xing)結(jie)合(he)——應(ying)確保(bao)板(ban)孔(kong)進行(xing)了封(feng)閉並(bing)且(qie)使(shi)用的(de)是(shi)恰當(dang)的(de)封(feng)閉液以(yi)防(fang)止(zhi)非(fei)特異(yi)性(xing)結(jie)合(he)。

② 底物結(jie)合(he)濃(nong)度過高(gao)——對底物進行(xing)適當(dang)稀釋(shi)。

③ 反(fan)應時間(jian)過(guo)長——當(dang)酶標板(ban)顯(xian)色足夠進行(xing)吸(xi)光(guang)度(du)讀數時立(li)即使(shi)用終止(zhi)液(ye)終止(zhi)反(fan)應，適當(dang)縮短(duan)顯(xian)色時間(jian)。

④ 底物溶(rong)液汙(wu)染(ran)——正(zheng)常底物溶(rong)液應是澄(cheng)清透明的(de)，若(ruo)出現黃色或其(qi)他顏色表明受到汙(wu)染(ran)，應(ying)更換(huan)新(xin)的(de)底物溶(rong)液。

⑤ 底物孵(fu)育(yu)過程沒有避(bi)光(guang)——底物孵(fu)育(yu)應在(zai)避(bi)光(guang)條(tiao)件(jian)下(xia)進行(xing)。

3. 復(fu)孔之(zhi)間(jian)重(zhong)復(fu)性差

① 樣品(pin)數量不(bu)整(zheng)齊(qi)，加樣時間(jian)有長有短(duan)——加(jia)重(zhong)復(fu)孔時盡(jin)量(liang)保持(chi)加樣時間(jian)與(yu)第壹(yi)次(ci)接(jie)近(jin)。

② 加樣量不(bu)壹致(zhi)——樣品(pin)稀釋(shi)前(qian)應充分(fen)混勻，並(bing)且(qie)使(shi)用同(tong)壹移(yi)液(ye)槍(qiang)。

③ 洗(xi)滌(di)條(tiao)件(jian)、操作人(ren)員(yuan)不(bu)壹致(zhi)——重(zhong)復(fu)測定(ding)樣品(pin)時，操作條件、人(ren)員(yuan)應(ying)盡可(ke)能與(yu)上次(ci)保(bao)持壹致。

4. 吸(xi)光(guang)值(zhi)偏(pian)高(gao)或偏(pian)低

① 樣品(pin)中(zhong)待測抗(kang)原含(han)量太低會導(dao)致(zhi)測定(ding)結(jie)果(guo)偏(pian)低——可(ke)嘗試增加(jia)樣品(pin)使(shi)用量。

② 加入(ru)抗(kang)體量(liang)不(bu)合適會造(zao)成結(jie)果(guo)偏(pian)低或偏(pian)高(gao)——使(shi)用建議(yi)抗(kang)體量(liang)或為(wei)了使(shi)結(jie)果(guo)更好盡(jin)可(ke)能調(tiao)整(zheng)抗(kang)體的(de)適用量。

③ 孵(fu)育(yu)時間(jian)太短(duan)導(dao)致檢測結(jie)果(guo)偏(pian)低——適當(dang)延長抗(kang)體或(huo)抗(kang)原的(de)孵(fu)育(yu)時間(jian)，確保(bao)待測樣品(pin)與(yu)檢測抗(kang)體能(neng)充分(fen)結(jie)合(he)。

④ 孵(fu)育(yu)溫(wen)度(du)不(bu)適合——應保(bao)證抗(kang)體在(zai)最適宜(yi)條(tiao)件(jian)下(xia)進行(xing)孵(fu)育(yu)（壹般37℃孵(fu)育(yu)1h）。