細(xi)胞(bao)培養(yang)技(ji)術可以(yi)由壹(yi)個(ge)細(xi)胞(bao)經過大量培養(yang)成為簡(jian)單(dan)的(de)單(dan)細(xi)胞(bao)或極少(shao)分(fen)化(hua)的多(duo)細(xi)胞(bao)，這(zhe)是(shi)克隆(long)技(ji)術(shu)必(bi)須(xu)的環節(jie)，而(er)且細(xi)胞(bao)培養(yang)本(ben)身就(jiu)是(shi)細(xi)胞(bao)的(de)克(ke)隆(long)。細(xi)胞(bao)培養(yang)技(ji)術是細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學(xue)研究方法中重要和常用(yong)技(ji)術(shu)，通(tong)過細(xi)胞(bao)培養(yang)既(ji)可以(yi)獲得(de)大(da)量細(xi)胞(bao)，又(you)可(ke)以(yi)借(jie)此(ci)研究細(xi)胞(bao)的(de)信(xin)號(hao)轉導(dao)、細(xi)胞(bao)的(de)合(he)成代謝、細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)增殖等。下(xia)面了解(jie)細(xi)胞(bao)培養(yang)環境(jing)因素：

1．無菌(jun)環境(jing)

無毒(du)和無菌(jun)是(shi)體(ti)外(wai)培養(yang)細(xi)胞(bao)的(de)首(shou)要條(tiao)件(jian)。細(xi)胞(bao)在(zai)活體內(nei)，解(jie)毒系(xi)統和免(mian)疫系(xi)統可(ke)抵(di)抗微(wei)生(sheng)物或其他(ta)有害物質的入侵，但細(xi)胞(bao)在(zai)體外培養(yang)的(de)過程中，缺(que)乏(fa)機體(ti)免(mian)疫系(xi)統的(de)保(bao)護而(er)喪(sang)失對微生物(wu)的防(fang)禦能(neng)力(li)和對(dui)有(you)害物質的解(jie)毒能(neng)力(li)。為保(bao)證細(xi)胞(bao)能(neng)在(zai)體外環境(jing)中生(sheng)長(chang)繁殖，必須(xu)要確保(bao)無菌(jun)工(gong)作(zuo)區(qu)域(yu)、良好的(de)個人(ren)衛(wei)生(sheng)、無菌(jun)試(shi)劑和培養(yang)基(ji)以(yi)及(ji)無菌(jun)操作(zuo)。

常見(jian)的(de)微(wei)生物(wu)汙染有(you)支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、真(zhen)菌(jun)。支(zhi)原(yuan)體(ti)無致(zhi)死毒(du)性(xing)，可與細(xi)胞(bao)長(chang)期(qi)共(gong)存，對細(xi)胞(bao)有(you)潛(qian)在(zai)影響(xiang)，但體積(ji)小(xiao)，不易(yi)鑒(jian)別，可(ke)借(jie)助(zhu)於(yu)地(di)衣(yi)紅或Hoechst33342染色(se)來(lai)進行檢(jian)測(ce)。細(xi)菌(jun)增殖快，在(zai)短時間內(nei)即可(ke)大量擴增，並(bing)產(chan)生(sheng)毒素殺(sha)死細(xi)胞(bao)。真(zhen)菌(jun)的(de)種類(lei)繁多(duo)，肉(rou)眼可見，漂浮於(yu)培養(yang)液面上，可呈(cheng)絲狀(zhuang)、管(guan)狀(zhuang)或樹枝狀(zhuang)等。

2.合(he)適的溫(wen)度

壹(yi)般(ban)哺(bu)乳類(lei)與禽(qin)類(lei)細(xi)胞(bao)在(zai)體外培養(yang)的(de)適宜(yi)溫(wen)度(du)是(shi)37～38℃，不適(shi)宜(yi)的(de)環境(jing)溫度(du)會影響(xiang)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)。細(xi)胞(bao)對(dui)低(di)溫的(de)耐(nai)受能(neng)力(li)要(yao)強(qiang)於(yu)對(dui)高(gao)溫(wen)的耐(nai)受能(neng)力(li)，在(zai)低(di)溫下(xia)，細(xi)胞(bao)的(de)代謝活力及(ji)核分(fen)裂能(neng)力(li)降(jiang)低(di)。若溫(wen)度(du)不低(di)於(yu)0℃，雖然(ran)細(xi)胞(bao)代謝受到影響(xiang)，但無損傷作(zuo)用(yong)；25～35℃時，細(xi)胞(bao)以(yi)緩(huan)慢(man)的(de)速度生長(chang)；但若被(bei)置於(yu)40℃數(shu)小(xiao)時，則(ze)不僅(jin)不利於(yu)細(xi)胞(bao)生(sheng)存、生長(chang)，甚(shen)至(zhi)可導(dao)致(zhi)其(qi)死亡(wang)。

3.適(shi)宜(yi)的(de)滲(shen)透壓

高(gao)滲(shen)溶液或低(di)滲溶液會(hui)引起(qi)細(xi)胞(bao)發(fa)生褶皺、腫(zhong)脹(zhang)、破(po)裂。因此，滲透壓是(shi)體(ti)外(wai)培養(yang)細(xi)胞(bao)的(de)重要條(tiao)件(jian)之(zhi)壹(yi)。多(duo)數(shu)體外培養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)對(dui)滲(shen)透壓都有壹(yi)定(ding)的耐受能(neng)力(li)，實(shi)際(ji)應用中，260～320mmol/L的(de)滲(shen)透壓可(ke)適(shi)用(yong)於(yu)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)。

4．氣(qi)體環境(jing)與pH

細(xi)胞(bao)的(de)體(ti)外培養(yang)需(xu)要理想的(de)氣(qi)體環境(jing)，氧氣(qi)、二氧(yang)化(hua)碳是(shi)細(xi)胞(bao)生(sheng)存的必(bi)要(yao)條件。氧(yang)氣(qi)參與細(xi)胞(bao)的(de)三(san)羧酸(suan)循環，為細(xi)胞(bao)生(sheng)存、代謝與合(he)成提(ti)供(gong)能(neng)量(liang)；二(er)氧(yang)化(hua)碳既(ji)是細(xi)胞(bao)的(de)代謝產物(wu)，是(shi)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)的(de)必(bi)需(xu)成分(fen)，又(you)與維(wei)持(chi)培養(yang)液的(de)pH有(you)關。大多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)適(shi)宜(yi)的(de)pH範(fan)圍(wei)往(wang)往(wang)是(shi)7.2～7.4。在(zai)開放式(shi)培養(yang)中，以(yi)5%的(de)二(er)氧化(hua)碳氣(qi)體比(bi)例為宜(yi)。